白杨素减轻人脐静脉内皮细胞的氧化应激损伤

目的: 观察白杨素对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）氧化应激损伤的保护作用。方法: 常规培养HUVEC细胞,分为5组：对照组,不加任何干预;H₂O₂组,用400 μmol/L过氧化氢处理2 h;白杨素高、中、低剂量组,提前用100、50、25 μmol/L的白杨素孵育12 h,然后用400 μmol/L过氧化氢处理2 h。处理结束后,用MTT法检测活细胞数目,并检测乳酸脱氢酶（LDH）的漏出。收集细胞上清液及细胞裂解液,检测NO、丙二醛（MDA）产量及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。用荧光染料DCEF-DA染色后,酶标仪检测活性氧（ROS）的产量。用荧光定量RT-PCR的方法检测黏附分子的表达。结果: 过氧化氢导致内皮细胞活细胞数目减少,LDH漏出增多,MDA、ROS产生增多,SOD活性下降,黏附分子表达增多,内皮细胞NO产生减少,eNOS活性下降。提前用白杨素预孵,可以增加细胞存活率,减轻氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,eNOS蛋白活性增加,细胞NO的产量增加。结论: 白杨素可以减轻HUVEC的氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,增加细胞NO的合成能力。     

细胞焦亡在肠缺血再灌注损伤中作用的研究进展

细胞焦亡是一种可导致炎症反应的程序性细胞死亡，其发生依赖于炎症小体、炎性半胱天冬酶（caspase）等蛋白相继激活进而裂解消皮素D（gasdermin D, GSDMD）蛋白使其N端在细胞膜多聚化并产生焦亡小孔。细胞焦亡的发生有炎症小体激活caspase-1的经典途径和胞质LPS激活caspase-4/5/11的非经典途径；作为介导机体炎症反应的重要机制，细胞焦亡在机体应对伤害性刺激的反应中具有不可替代的作用，其与神经系统疾病、心血管系统疾病和肿瘤等多种疾病密切相关。最近研究发现，细胞焦亡在肠缺血再灌注损伤（intestinal ischemia-reperfusion injury, II/RI）的发生中也具有关键作用，本文就近年来细胞焦亡的分子特征、机制与II/RI的关系进行综述，旨在为II/RI的防治提供理论依据。     

CGRP通过激活cAMP/PPARγ/eNOS途径改善血管内皮细胞胰岛素抵抗

目的:探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗的保护作用及其机制。方法:用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）建立胰岛素抵抗细胞模型（irHUVEC）,分别用葡萄糖氧化酶法和蒽酮-硫酸法检测细胞葡萄糖消耗能力和糖原合成能力;RT-PCR和Western blot分别检测目的蛋白和基因表达。结果:33.3 mmol/L的高糖和5 μmol/L 的胰岛素处理24 h可以成功诱导内皮细胞产生胰岛素抵抗。与正常HUVEC相比,irHUVEC体积变大,边界模糊,形态异常;当细胞用高糖和高胰岛素分别诱导24 h和48 h时,irHUVEC的葡萄糖消耗量分别减少20%和31%,并且糖原合成分别减少了55%和64%,差异都具有显著性;同时,过氧化物酶增殖体激活受体γ（PPARγ）和还原型一氧化氮合酶（eNOS）的表达均降低。CGRP可以明显增加irHUVEC葡萄糖的消耗量约20%和糖原合成增加约70%,并能增加PPARγ和eNOS蛋白及mRNA表达;SQ22536（cAMP阻断剂）能使PPARγ和eNOS的蛋白和基因表达量明显减少。结论:CGRP可以改善内皮细胞的胰岛素抵抗,其机制可能与上调环磷酸腺苷（cAMP）,增加PPARγ和eNOS表达有关。     

D-4F在七氟烷处理对急性高糖血症小鼠血管保护中的作用及机制

目的: 观察apoA-1拟似物D-4F对七氟烷麻醉急性高糖血症小鼠的血管保护效应。方法: 实验一,雄性 C57BL/6J小鼠随机分4组（n=8）：对照组（CON组）、 D-4F组、急性高血糖组（AHG组）、 AHG+D-4F组,各组再进行吸入1.71%七氟烷(SEV),检测各组血糖、主动脉血管环舒张功能、NO水平,Western blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、磷酸化的eNOS（p-eNOS）、小凹蛋白（Cav-1）水平;实验二,人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）分别用5.5、20.0 mmol/L 的葡萄糖培养24 h,4 μg/mL 布雷德菌素A (BFA)和0.5 μg/mL D-4F孵育1 h,再进行SEV处理,检测ROS水平。结果: AHG组显示急性高血糖时血管的舒张能力下降,主动脉产生NO减少,Cav-1蛋白表达明显增强,eNOS活性下降。D-4F组显示加入D-4F并不能提高急性高血糖时的血管舒张能力,AHG+D-4F组显示给予SEV刺激后D-4F对血管的舒张有改善作用（P<0.01),Cav-1蛋白表达下降,eNOS活性增强,NO生成增多。细胞实验显示SEV刺激下,HG+D-4F组ROS的生成下降,D-4F该功能并可被BFA所阻断。结论: D-4F可恢复SEV对急性高糖血症的血管保护功能,其机制可能与D-4F降低细胞内脂质筏区域Cav-1的耦合能力,增强脂质筏里eNOS的磷酸化,NO生成增多,ROS生成减少,减轻急性高血糖的血管损害有关。     

桂皮醛抑制血管内皮细胞与中性粒细胞黏附及其分子机制

目的:研究桂皮醛对白细胞与血管内皮细胞黏附影响的分子机制,探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法: 虎红染色法观察桂皮醛高（10 mg/L）、中（5 mg/L）、低（2.5 mg/L）浓度对人中性粒细胞（polymorphonuclear,PMN）与肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）黏附的影响;荧光免疫细胞化学法观察桂皮醛对HUVEC表面细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）和CD44表达的影响。结果: 桂皮醛和TNF共同作用HUVEC 4 h后,高浓度桂皮醛能明显抑制HUVEC与PMN黏附(P<0.05),能明显抑制HUVEC表面VCAM-1 表达(P<0.01)。中浓度桂皮醛能明显抑制HUVEC表面ICAM-1和VCAM-1 表达(P<0.05)。各浓度桂皮醛对HUVEC表面CD44表达未表现明显作用。桂皮醛和TNF共同作用HUVEC 12 h后, 桂皮醛未表现以上作用。结论:桂皮醛作用早期通过降低TNF诱导的HUVEC表面黏附分子的表达,抑制白细胞与血管内皮细胞的黏附,从而抑制过度的炎症反应来促进创伤愈合。     

甘草素对高糖诱导心肌细胞凋亡的影响及机制

目的: 研究甘草素对高糖干预下心肌细胞（H9C2）凋亡的影响,探讨其可能机制。方法: 培养H9C2细胞,分为正常对照组（Control组）,高糖组（HG组）,高糖甘草素（终浓度10、30、100 nmol/L）干预组（HG+Liq组）。采用CCK-8法测定各组细胞的存活率;应用Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测活性氧（ROS）含量;生化法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果: 高糖干预使H9C2心肌细胞活力减弱、ROS生成增多、SOD活性下降与MDA增加,并引起细胞凋亡增加、Bcl-2/Bax表达比值降低。与HG组相比,HG+Liq组（终浓度30、100 nmol/L）的细胞存活率显著提高（P<0.05,P<0.05）,ROS水平降低（P<0.05,P<0.05）,SOD活性升高（P<0.05,P<0.05）,MDA含量降低（P<0.05,P<0.05）,细胞凋亡率减少（P<0.05,P<0.05）。Western blot结果显示,高糖甘草素（终浓度100 nmol/L）干预组的Bcl-2和Bax表达比值与HG组相比有显著提高（P<0.01）。结论: 甘草素通过抑制ROS的产生,抑制氧化应激、抑制心肌细胞凋亡,从而减少高糖所致的H9C2心肌细胞损伤。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的: 研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法: 以不同浓度乙醇(50、100和 200 mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞 24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果: 乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论: 乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

糖肾方激活PGC-1α/LXR/ABCA1信号通路改善高脂诱导的巨噬细胞胆固醇摄取及流出

目的：观察中药糖肾方对棕榈酸钠诱导的RAW264.7巨噬细胞的脂质流出、摄取等转运相关分子的影响。方法：用棕榈酸钠（PA）诱导RAW264.7巨噬细胞制造高脂环境，经MTT测定后给予不同浓度糖肾方及PGC-1α-siRNA干预；利用Western blot和Real-time PCR检测细胞过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）、肝脏X受体（LXR）、ATP-结合盒转运蛋白（ABCA1）、分化簇36（CD36）的表达；Filipin染色及BODIPY 493/503染色观察糖肾方对细胞内脂滴沉积的影响。结果：Western blot及Real-time PCR的结果提示PA组PGC-1α、LXR、ABCA1表达减少，CD36表达增加（P<0.05），给予糖肾方干预可上调PGC-1α、LXR、ABCA1的表达，下调CD36的表达（P<0.05）；Filipin染色及BODIPY 493/503染色结果显示糖肾方可改善高脂状态下细胞内脂滴沉积的情况。PGC-1α-siRNA干预可抑制糖肾方上调PGC-1α、LXR、ABCA1表达以及抑制CD36的表达的作用。 结论：糖肾方可激活PGC-1α/LXR/ABCA1信号通路促进脂质流出、下调CD36的表达抑制脂质摄取，改善因脂质代谢异常引起的相关疾病等。     

丹酚酸A抑制TLR4/JNK MAPK改善棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的：研究丹酚酸A对脂毒性诱导的H9C2心肌细胞损伤的改善作用并初步探究其分子机制。方法：采用棕榈酸体外诱导建立H9C2心肌细胞脂毒性模型并给予丹酚酸A进行干预，采用乳酸脱氢酶法检测细胞损伤，采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞存活率，采用罗丹明123染色观察心肌细胞线粒体膜电位变化，采用蛋白免疫印迹技术研究丹酚酸A改善作用的分子机制。结果：浓度为400 μmol/L的棕榈酸可显著导致H9C2心肌细胞脂毒性损伤（P<0.05）。不同浓度（10、20、40、80 μmol/L）丹酚酸A暴露对心肌细胞无毒性作用（P>0.05）。丹酚酸A干预显著改善脂毒性诱导的心肌细胞损伤及细胞线粒体膜电位降低（P<0.05）。激活Toll样受体4（Toll-like receptors, TLR4）可显著增强脂毒性诱导的心肌细胞损伤（P<0.05），而抑制TLR4显著减轻棕榈酸诱导的细胞脂毒性（P<0.05）。此外，丹酚酸A显著抑制棕榈酸诱导的TLR4及其下游c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase, JNK MAPK）（P<0.05）。 结论：丹酚酸A改善脂毒性诱导的心肌细胞损伤，该保护作用可能与其抑制TLR4/JNK MAPK信号通路有关。     

熊果酸抑制HepG2中C-反应蛋白的异常表达及其对HUVECs的损伤

目的: 研究不同剂量的熊果酸(UA)对IL-6诱导的HepG2细胞中C-反应蛋白(CRP)异常表达的抑制作用以及对CRP所致人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法: IL-6(30 ng/mL)、UA(6.5、12.5、25 μmol/L)与IL-6(30 ng/mL)共同作用于HepG2细胞48 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞活力、CRP蛋白及mRNA表达情况。CRP(25 μg/mL)、UA(5,10,20 μmol/L)与CRP(25 μg/mL)共同作用于HUVECs 24 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞增殖、VCAM-1和LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果: UA能显著抑制IL-6诱导的HUVECs细胞活力下降及细胞中CRP蛋白与mRNA的表达升高;UA显著抑制CRP引起的内皮细胞增殖,并且在mRNA及蛋白水平均能显著抑制CRP诱导的HUVECs异常高表达VCAM-1及LOX-1。结论: UA可通过抑制肝脏合成炎症因子CRP而降低血液中CRP浓度,并降低CRP等炎症因子对内皮细胞的损伤等途径从而发挥抗心肌缺血及动脉粥样硬化等心血管疾病的作用。     

3,4,5,6-四羟基口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用

目的:观察3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用。方法:在大鼠离体胸主动脉环, 用高浓度葡萄糖(25mmol°L^-1) 孵育24 h, 检测乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性舒张反应;人脐静脉内皮细胞株(ECV304)用高浓度葡萄糖(30 mmol°L^-1) 培养48 h, 测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、一氧化氮(NO) 及细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA) 含量。结果:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的舒血管效应减退, 并且呈剂量依赖性。3, 4, 5,6-四羟基_口山酮(1、3 和10 μmol°L^-1) 能显著抑制高糖所致的内皮细胞LDH 泄漏、NO 释放和MDA 生成的增加。结论:3, 4, 5, 6-四羟基_口山酮对高糖所致的血管内皮依赖性舒张功能减退有保护作用, 其保护作用与抑制脂质过氧化减少血管内皮细胞损伤有关。     

β-榄香烯抗氧化损伤作用的实验研究

目的: 利用内皮细胞氧化损伤模型和鹌鹑饵食性高脂血症模型,研究β-榄香烯的抗氧化损伤作用。 方法: 采用过氧化氢(H₂O₂)建立体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤模型,观察不同浓度(0.1、1、10 mg/L)β-榄香烯对细胞内活性氧水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响;采用高脂饲料喂养法建立鹌鹑高脂血症模型,观察β-榄香烯对鹌鹑血清SOD活性、MDA和一氧化氮(NO)含量的影响。 结果: β-榄香烯可降低内皮细胞内活性氧水平,升高SOD活力,降低MDA含量;β-榄香烯升高鹌鹑血清中SOD活性和NO含量,降低MDA水平。 结论: β-榄香烯具有较强的抗氧化、清除氧自由基及保护血管内皮细胞作用。     

川陈皮素抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大

目的：探讨川陈皮素（nobiletin, Nob）抑制高糖诱导心肌细胞肥大的作用及其机制。方法：利用高糖（high glucose, HG）刺激乳鼠心肌细胞（neonatal rat cardiomyocytes, NRCMs）建立心肌细胞肥大模型,并给予Nob、核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂Brusatol干预,采用MTT法检测细胞存活率,qRT-PCR法检测C-myc、Nppa mRNA水平,免疫荧光检测心肌细胞表面积,Western blot法检测Nrf2和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达水平。结果：33.3 mmol/L HG刺激NRCMs 48 h,细胞存活率显著下降,C-myc、Nppa mRNA水平和细胞表面积显著升高,Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低（P<0.05）。给予Nob干预后,与HG组比较,细胞存活率、Nrf2和HO-1蛋白表达显著上调,C-myc、Nppa mRNA水平和细胞表面积显著下降（P<0.05）。利用Brusatol抑制Nrf2活性,与HG+Nob组比较,上述指标被逆转。 结论：Nob抑制高糖诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

枸杞多糖对糖尿病肾损伤的保护作用和机制研究

目的：研究枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide, LBP）对大鼠糖尿病肾损伤的保护作用及机制。方法：腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）建立大鼠糖尿病（diabetes mellitus, DM）模型。将大鼠分为对照组、糖尿病组、LBP（60 mg/kg）组和LBP（30 mg/kg）组。LBP组灌胃给予LBP，每天一次，持续12周。测定大鼠空腹血糖值、血肌酐（serum creatinine, Scr）、血尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）、C反应蛋白（C-reactive protein, CRP）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白细胞介素-6（ interleukin-6, IL-6）的含量。计算相对肾质量，观察肾脏组织形态变化，测定肾组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、过氧化氢酶（catalase, CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）活性、谷胱甘肽（glutathione, GSH）、丙二醛（malondialdehyde, MDA）的含量，核转录因子-кB（nuclear factor-kappa B, NF-кB）亚基p65、细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1, MCP-1）表达。结果：与对照组相比，糖尿病组大鼠血糖明显升高（≥16.7 mmol/L），血清中Scr、BUN、CRP、IL-6、TNF-α含量增加，肾组织MDA含量提高，GSH含量和GSH-Px、CAT、SOD活性降低，NF-кB亚基p65、MCP-1和ICAM-1表达水平增加。而与糖尿病组相比，LBP能降低糖尿病大鼠的血糖，减少血清中Scr、BUN、CRP、IL-6、TNF-α的含量，降低肾组织MDA含量，提高GSH含量、GSH-Px、CAT、SOD活性，下调NF-кB亚基p65、MCP-1和ICAM-1表达水平。 结论：LBP对糖尿病肾损伤具有明显的保护作用，其作用机制可能与其改善糖尿病大鼠血糖，降低肾脏氧化应激水平和减轻炎症反应有关。     

黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶途径抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬的研究

目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19细胞）自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）,高糖组（30 mmol/L葡萄糖）,黄芪皂苷组（30 mmol/L葡萄糖+2.5、5、10 μg/mL黄芪皂苷）。噻唑蓝比色（MTT）法检测ARPE-19细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测自噬相关蛋白及PERK途径关键因子表达水平。添加PERK特异性抑制剂GSK2606414,Western blot检测对细胞自噬水平的影响。结果:与正常对照组比较,高糖组ARPE-19细胞活性降低,凋亡率升高,自噬相关蛋白LC3表达水平明显升高,另一自噬相关蛋白p62蛋白表达水平明显降低。PERK途径关键因子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、Perk和增强子结合蛋白的同源蛋白（CHOP）表达水平明显上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。与高糖组比较,黄芪皂苷组ARPE-19细胞活性升高,凋亡率降低,LC3蛋白表达水平明显下调,p62蛋白表达水平明显上调,GRP78、Perk和CHOP蛋白水平明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。PERK特异性抑制剂GSK2606414能够进一步抑制黄芪皂苷组ARPE-19细胞LC3蛋白表达水平,上调p62蛋白表达水平,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:黄芪皂苷能够抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬水平,其作用机制可能与抑制蛋白激酶R样内质网激酶途径有关。     

白藜芦醇通过上调miR-26a改善高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤

目的:研究白藜芦醇（RES）对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19损伤的保护机制。方法:高葡萄糖（HG）刺激ARPE-19细胞诱导建立损伤模型。分别采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）实验检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率、DCFH-DA染色流式细胞仪检测活性氧（ROS）生成和定量即时聚合酶链锁反应（RT-qPCR）技术检测miR-26a表达水平。Western blot方法分析相关蛋白表达水平。结果:HG刺激明显降低ARPE-19细胞活力，凋亡率升高及氧化应激损伤加重。RES改善HG诱导的ARPE-19细胞损伤；上调HG诱导的ARPE-19细胞中miR-26a表达，miR-26a沉默部分逆转了RES对HG诱导的ARPE-19细胞损伤的保护效应。另外，RES还可通过上调miR-26a表达降低细胞外调节蛋白激酶（ERK）和Wnt/β-catenin信号通路活化。结论:RES通过上调miR-26a表达，伴随抑制ERK和Wnt/β-catenin信号传导，改善HG诱导的ARPE-19细胞损伤。RES可能成为治疗糖尿病视网膜病变的药物。