表观遗传修饰-他莫昔芬耐药机制研究的新方向

他莫昔芬(tamoxifen,TAM)为人工合成的非甾体类抗雌激素药物,被广泛用于雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患者的治疗。但是仍有约40%的ER阳性乳腺癌患者对TAM产生继发性耐药。目前对TAM耐药机制研究众多,而表观遗传学是最新的研究方向。在本综述中,我们将从表观遗传调控方面阐述当前对TAM耐药机制研究的新进展,以便更好地了解TAM耐药,并为乳腺癌治疗提供新的策略。     

乳腺癌患者体内他莫昔芬的群体药代动力学研究

目的:考察他莫昔芬（TAM）在乳腺癌患者体内的药物代谢动力学特征,以及可能的影响因素。方法:采集规律服用TAM的乳腺癌患者的血液样本,使用HPLC-MS/MS测定TAM及其代谢产物Endoxifen的血药浓度,以非线性混合效应模型法（NONMEM）进行分析,得到群体药代动力学参数,与文献中TAM药代动力学参数进行比较,并用Bootstrap对最终模型进行验证。结果:共29例患者参加该研究,平均年龄（46.9±6.4）岁,体质量指数（BMI）为（23.70±2.87） kg/cm2。最终模型的药代动力学参数估计值分别为,Ka为0.830 h-1;CLTAM为6.61 L/h;CLMET为0.707 L/h;VTAM为753 L;VEND为400 L;CLEND为5.10 L/h;Q为61.8 L。协变量筛选,在向前包容过程中显示有机阴离子转运多肽OATP1B1*521的基因多态性和绝经时间对代谢常数CLTAM有影响（P<0.05）,但向后剔除过程未发现有显著性影响的协变量（P<0.001）。Bootstrap结果显示最终模型稳健率达96.8%。结论:本研究成功构建了TAM在乳腺癌患者体内的群体药代动力学模型,并从定量的角度为TAM临床个体化用药提供参考信息。     

他莫昔芬诱导非酒精性脂肪肝的机制研究进展

选择性雌激素受体拮抗剂他莫昔芬目前在临床上乳腺癌术后内分泌治疗的应用中最为广泛,然而,越来越多的证据显示他莫昔芬可大大提高乳腺癌患者非酒精性脂肪肝的发病风险。目前关于他莫昔芬造成肝脏脂毒性的研究并不详尽,其造成非酒精性脂肪肝的具体机制仍不明确,本文对他莫昔芬诱导非酒精性脂肪肝这一现象及其机制研究进展进行综述,为后续深入探索其机制及研发治疗药物提供参考。     

CYP2D6*10和CYP2C19*2基因型多态性与接受他莫昔芬治疗乳腺癌患者生存率的相关性研究

目的: 研究CYP2D6^*10和CYP2C19^*2基因型多态性与接受他莫昔芬(tamoxifen, TAM)治疗乳腺癌患者生存率的相关性研究。方法: 选择2009至2004年本院甲乳外科和肿瘤内科收治的171名术后服用TAM治疗的雌激素阳性乳腺癌患者,调查TAM使用情况和生存状态等相关资料;收集相关的石蜡组织切片用于DNA提取;用PCR技术检测CYP2D6^*10和CYP2C19^*2基因型多态性;查明CYP2D6^*10和CYP2C19^*2基因型多态性与患者生存率的相关性。结果: 本次研究中,CYP2D6Wt/Wt、CYP2D6Wt/^*10和CYP2D6^*10/^*10基因型的总生存率(overall survival,OS)类似,差异无统计学意义(P>0.05)。CYP2C19^*2/^*2基因型的5年OS明显优于CYP2C19 Wt/Wt,差异具有统计学意义(P<0.05);CYP2C19^*2/^*2基因型的10年OS明显优于CYP2C19 Wt/Wt和CYP2C19 Wt/^*2,差异具有统计学意义(P<0.05);但是CYP2C19Wt/Wt与CYP2C19 Wt/^*2的5、10年OS差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 研究结果显示,CYP2D6^*10基因型多态性与服用TAM治疗乳腺癌患者的生存率之间不存在相关性;CYP2C19^*2基因型多态性与接受TAM治疗乳腺癌患者的生存率之间存在相关性,CYP2C19^*2/^*2接受TAM治疗乳腺癌患者的生存率最高,CYP2C19 Wt/^*2生存率较高,CYP2C19 Wt/Wt较低。     

孕烷X受体介导的代谢酶和转运体转录调控及其在化疗药物耐药中的作用

孕烷X受体(PXR, NR1I2)是生物体内药物代谢酶和转运体基因表达的主要调控因子之一。近来研究发现,PXR介导的药物代谢酶和转运体的过表达,与化疗药物多药耐药的产生密切相关。鉴于PXR在药物代谢酶和转运体调控中的重要性和PXR转录调控的多样性,有必要对其导致的多药耐药形成机制进行更深入的研究。本文综述了PXR介导的代谢酶和转运体基因表达调控机制,及其引起化疗药物多药耐药的相关研究进展,为提高化疗药物敏感性、逆转化疗药物的多药耐药提供有效的治疗策略。     

UPLC-MS/MS同时测定血浆样品中他莫昔芬及代谢产物的浓度和应用

目的: 建立UPLC-MS/MS法测定人体血浆样品中他莫昔芬及代谢产物的浓度和应用。 方法: 采用Waters AcQuity型超高效液相色谱联用API4000型三重四级杆质谱仪,样品处理采用固相萃取的方法,采用Thermo hypurity C₁₈(150 mm×2.1 mm,5 μm)色谱分析柱, 流动相为 10 mmol/L 甲酸胺-乙腈(40∶60,V/V),流速为 0.3 mL/min,进样体积为 10 μL,柱温为 30 ℃, 样品室温度为 5 ℃,质谱应用ESI源、正离子模式、多反应监测(MRM)方式检测他莫昔芬及各代谢产物的浓度。 结果: 他莫昔芬、ND-Tam和TamNox线性范围为1~400 ng/mL,4-OH-Tam线性范围为 0.4~160 ng/mL,4-OHND-Tam线性范围为2~800 ng/mL,可以满足样本浓度定量检测的需要,方法稳定、特异性高,并成功地应用到用药后他莫昔芬及各代谢产物血浆浓度的检测。 结论: 该方法简便、准确、重复性好,可以准确地定量人体血浆他莫昔芬和代谢产物的浓度,除了为临床血药浓度监测及他莫昔芬药效学研究提供服务外,也可为遗传药理学科研提供技术方法。     

枸橼酸他莫昔芬分散片在健康人体的药动学和生物等效性研究

目的 研究枸橼酸他莫昔芬分散片在健康人体内的药动学和生物等效性。 方法 采用随机自身对照双周期交叉试验设计, 20 名男性健康志愿者口服受试制剂和参比制剂各20 mg, 用高效液相荧光法测定他莫昔芬的血药浓度, 用非房室模型计算他莫昔芬的药动学参数。 结果 枸橼酸他莫昔芬分散片和普通片的药动学参数如下:tmax分别为(6.3 ±2.2)、(6.7 ±2.4)h, Cmax 分别为(72±14)、(68 ±16)μg/L, AUC(0-492)分别为(4.6 ±2.0)、(4.6±2.0)mg·L^-1 h, t₁₂ 分别为(143±24)、(153 ±33)h 。枸橼酸他莫昔芬分散片相对于普通片的相对生物利用度为(101±13)%。 结论 两制剂在人体内生物等效。     

吉西他滨联合洛铂或顺铂治疗蒽环类和紫杉类药物耐药晚期乳腺癌的比较研究

目的:比较吉西他滨联合洛铂或顺铂治疗蒽环类和紫杉类药物耐药晚期乳腺癌的疗效和不良反应。方法: 61例晚期乳腺癌患者随机分为吉西他滨加洛铂组(GL组)和吉西他滨加顺铂组(GP组)。至少治疗2个周期后分别评价疗效和不良反应发生情况。结果: GL组和GP组缓解率分别为 43.33%和 38.71%; GL、GP组中位肿瘤进展时间分别为 6.29 个月和 5.59 个月(P>0.05)。GL组的中性粒细胞减少、血小板减少发生率较GP组多见,而GP组的恶心呕吐发生率较GL组多见,两组间有统计学差异(P<0.05)。结论: GL和GP方案均为治疗蒽环类和紫杉类药物耐药晚期乳腺癌的有效方案,两组缓解率及中位肿瘤进展时间相近。但GL组的血液学毒性发生率较GP组多见,而GP组的胃肠道反应较GL组多见。这两种方案可能适合不同人群,值得临床进一步研究。     

槲皮素通过GAS5调控GSK-3β/β-catenin逆转乳腺癌阿霉素耐药

目的：探究槲皮素逆转阿霉素耐药作用及其可能机制。方法：采取CCK-8法检测槲皮素（ADR）对阿霉素耐药细胞的细胞毒性及对阿霉素耐药的逆转效果;平板克隆形成实验检测细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞内罗丹明123（Rh123）积累变化;qRT-PCR法检测细胞中GAS5、ABCB1 RNA表达水平;Western blot检测GSK-3β、β-catenin、c-MYC、cyclin D1、ABCB1蛋白表达水平。结果：槲皮素（10、20、40 μmol/L）可以明显增强MCF-7/ADR对ADR的敏感性,抑制细胞的增殖,增加细胞内Rh123积累,促进GAS5、GSK-3β的表达,抑制β-catenin、c-MYC、cyclin D1、ABCB1的表达;细胞转染si-GAS5后,GAS5、GSK-3β表达明显下降,β-catenin、c-MYC、cyclin D1、ABCB1表达明显升高;当加入槲皮素（40 μmol/L）与si-GAS5共处理后,与sncRNA加槲皮素共处理对照组相比,这些蛋白的表达都发生了逆转性的回复作用。 结论：槲皮素可以通过GAS5介导GSK-3β/β-catenin通路抑制ABCB1的表达从而逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药。     

卡培他滨在治疗转移性乳腺癌中作用的Meta分析

目的: 近年来关于卡培他滨在治疗转移性乳腺癌上的研究结论并不一致,现采用Meta分析的方法评价卡培他滨在治疗转移性乳腺癌中的疗效及不良反应。方法: 计算机检索2014年3月以前Cochrane、Pubmed、EMbase、Medline、中国生物医学文献数据库、中国知网、万方数据库的相关文献,根据严格的纳入和排除标准,筛选出加入卡培他滨的化疗方案对比不加卡培他滨的化疗方案的随机或半随机对照试验,最终将数据通过Revman 5.2 软件合并及分析。质量评价采用 Cochrane Handbook 5.0.1 的评价方法。结果: 总共纳入9个随机临床对照实验及1个半随机对照试验,共1 449例患者进行Meta分析,结果显示,联合卡培他滨的化疗方案对比不加入卡培他滨的方案,可以提高总反应率(RR=1.61; 95%CI:1.29~2.02,P<0.0001)及完全反应率(RR=1.68;95%CI:1.04~2.71, P<0.03),减少肌痛和骨髓抑制的几率,但同时会增加胃肠道反应和手足综合征的发生概率。两组方案在部分反应率和其余不良反应上尚不能认为有差异。结论: 联合卡培他滨的化疗方案在治疗转移性乳腺癌的作用上,可以提高总反应率及完全反应率,但是治疗过程中应注意防治胃肠道反应及手足综合征等不良反应。     

miR-34a通过调控雄激素受体基因抑制前列腺癌细胞系LNCaP增殖

目的：探究miR-34a对雄激素受体（AR）基因的调控作用及对前列腺癌（PCa）LNCaP细胞增殖、凋亡的影响。方法：收集2016年10月至2019年9月本院泌尿外科行前列腺穿刺活检确诊为PCa患者组织标本36例,另取同期行手术治疗切除的良性前列腺增生（BPH）组织标本41例。体外培养LNCaP细胞,分别转染miR-34a mimics（mimics组）,miR-34a mimic NC（NC组）,设正常生长细胞为空白对照组（BC组）,另在mimics组基础上转染AR过表达（AR过表达组）载体及其对照（AR对照组）,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,实时定量PCR（RT-qPCR）检测miR-34a及AR mRNA表达水平,免疫印迹法检测AR蛋白、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）及原癌基因产物（c-Mcy）、细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、capase-3）的表达水平。结果：与BPH组织比较,PCa组织中miR-34a表达水平显著降低（P<0.05）,AR mRNA及蛋白表达水平均显著增加（P<0.05）;与BC、NC组比较,mimics组LNCap细胞miR-34a表达水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著增加（P<0.05）,AR、Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,同一时间LNCap细胞活力均显著降低（P<0.05）;双荧光素酶实验结果显示,miR-34a与AR可能存在一定的调控关系,过表达AR基因可逆转miR-34a mimics对LNCaP细胞增殖抑制,促进凋亡作用。 结论：miR-34a可能通过调控AR抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,促进其凋亡。     

氧化前胡素对乳腺癌MCF-7/DOX细胞多柔比星耐药的抑制作用

目的：探讨氧化前胡素（oxypeucedanin, OPD）对人乳腺癌MCF-7/DOX细胞多柔比星耐药的影响并探究其可能机制。方法：体外培养MCF-7/DOX细胞,MTT法检测OPD对MCF-7/DOX细胞增殖的影响,并考察OPD最大无毒浓度与多柔比星不同浓度联用对MCF-7/DOX细胞增殖的影响。qRT-PCR检测OPD与多柔比星联用对MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1及甘油磷脂代谢酶AGPAT2、CHKA、CEPT1、DGKA、PCYT1A、PLA2G15 mRNA水平的影响。Western blot检测OPD与多柔比星联用对MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1、CHKA及CCTα蛋白表达的影响。结果：OPD 50 μg/mL与多柔比星联用作用于MCF-7/DOX细胞的IC50值低于多柔比星单独,其逆转倍数为1.56倍。与对照组比较,多柔比星组MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1和6种甘油磷脂代谢酶mRNA均下调（P<0.05或P<0.01）,MDR1、MRP1、CHKA和CCTα蛋白表达无显著变化（P>0.05）,OPD 50 μg/mL与多柔比星联用组上述基因和蛋白表达均显著下调（P<0.05）。与多柔比星组比较,OPD 50 μg/mL与多柔比星联用组MCF-7/DOX细胞上述基因表达进一步下调（P<0.05或P<0.01）,上述4种蛋白表达无显著变化（P>0.05）。 结论：OPD可增强MCF-7/DOX细胞对多柔比星的化疗敏感性,逆转耐药,可能与其抑制甘油磷脂代谢途径有关。     

Adhesion of Rhodococcus sp. S3E2 and Rhodococcus sp. S3E3 to plasma prepared Teflon-like and organosilicon surfaces

The bacterial strains of Rhodococcus sp. S3E2 and Rhodococcus sp. S3E3 were selected for adhesion study on Teflon-like or organosilicon thin films deposited on paper substrate in atmospheric pressure surface barrier discharge. As a carrier gas the nitrogen with small admixture of octafluorocyclobutane or hexamethylenedisiloxane was used. The influence of octafluorocyclobutane and hexamethylenedisiloxane flow rate ratio on later cell adhesion was studied. The cell attachment was evaluated by means of the luminometric measurement of the ATP extracted from adhered cells. The surface properties of deposited layers were investigated by means contact angle measurement and chemical properties of deposited films were studied by means of FTIR spectroscopy. Optical emission spectroscopy was used for investigation of plasma parameters of used plasma.     

符合AMS2750E规范的特殊合金热处理用电阻炉的优化改进

以某热处理厂电阻炉的实际使用情况为例,介绍了目前国内特殊合金热处理用电阻炉在进行高温测量时出现的热工性能缺陷等问题。通过对设定温度450、620和780 ℃的标定,分析了原电阻炉炉温均匀性和系统控温精度不达标的原因,有针对性地对原电阻炉进行了优化改进,并加以测试验证,使其TUS及SAT最终符合AMS 2750E二级炉要求。     

Fe3+对Al3+活化微斜长石产生屏蔽的机理

硅线石—微斜长石—油酸钠浮选分离系统中, 金属离子强烈干扰浮选过程, 而Ｆｅ３ ＋ 可明显削弱这种干扰作用。借助显微电泳仪和Ｘ 射线光电子能谱, 研究了Ｆｅ３ ＋ , Ａｌ３ ＋ 金属离子在硅线石和微斜长石表面的竞争吸附, 揭示了Ｆｅ３ ＋ 对Ａｌ３ ＋ 活化微斜长石产生屏蔽作用的机理。研究发现由于Ｆｅ３ ＋ 能增加硅线石表面ζ电位, 同时降低微斜长石表面ζ电位, 削弱了Ａｌ３ ＋ 对微斜长石的活化作用;ＸＰＳ 研究表明Ｆｅ３ ＋ 对Ａｌ３ ＋ 活化微斜长石产生屏蔽效应的根本原因在于Ｆｅ３ ＋ 能够降低微斜长石表面Ａｌ２ｐ 电子的结合能, 从而降低其表面活性, 使其不易于与捕收剂油酸钠作用     

RON蛋白与CXC趋化因子受体4蛋白的表达与去势抵抗型前列腺癌患者阿比特龙耐药的相关性

目的：研究受体酪氨酸激酶（RON）蛋白与CXC趋化因子受体4（CXCR4）蛋白的表达与去势抵抗型前列腺癌（CRPC）患者阿比特龙耐药的相关性。方法：选取2017年1月至2020年2月我院收治的127例接受阿比特龙治疗的CRPC患者,根据是否耐药分为观察组（n=32,阿比特龙耐药患者）、对照组（n=95,缓解患者）。采用免疫组化与蛋白免疫印迹检测比较两组RON、CXCR4蛋白表达,采用Logistic回归分析进行RON、CXCR4蛋白与耐药的单因素、多因素分析,采用受试者工作特征曲线（ROC）及ROC下面积（AUC）分析RON、CXCR4蛋白预测耐药的价值,并在阿比特龙耐药细胞株中加入RON、CXCR4抑制剂,观察两者对阿比特龙耐药细胞凋亡指标［半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3、caspase-9、细胞凋亡率］的影响。结果：免疫组化显示,观察组RON阳性表达率（71.88%,23/32）较对照组（27.37%,26/95）高;观察组CXCR4阳性表达率（65.63%,21/32）较对照组（12.63%,12/95）高;蛋白免疫印迹检测显示,观察组RON、CXCR4蛋白较对照组高（P<0.05）;RON、CXCR4蛋白与耐药均呈正相关（P<0.05）;加入RON、CXCR4抑制剂后,RON、CXCR4表达被成功抑制,且caspase-3、caspase-9、细胞凋亡率均高于阿比特龙耐药细胞株（P<0.05）;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭显示,抑制RON、CXCR4表达,细胞迁移及侵袭细胞数目均显著降低（P<0.05）;RON蛋白预测阿比特龙耐药的AUC为0.789,截断值＞4.11,敏感度为84.37%,特异度为61.05%（P<0.05）;CXCR4蛋白预测阿比特龙耐药的AUC为0.825,截断值＞3.42,敏感度为75.00%,特异度为80.00%（P<0.05）;RON+CXCR4蛋白预测阿比特龙耐药的AUC为0.884（95%CI：0.815～0.934）,敏感度为87.50%,特异度为83.16%（P<0.05）。 结论：CRPC患者RON、CXCR4蛋白表达显著增加,与患者阿比特龙耐药密切相关,有望成为预测耐药的标志物,抑制RON、CXCR4蛋白表达,可促进CRPC阿比特龙耐药细胞的凋亡。     

Fe3 对Al3 活化微斜长石产生屏蔽的机理

硅线石—微斜长石—油酸钠浮选分离系统中,金属离子强烈干扰浮选过程,而Fe