LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中4种CYP450探针药物浓度

目的:建立高效液相-串联质谱（LC-MS/MS）法同时测定大鼠血浆中非那西丁(1A2),甲苯磺丁脲(2C9),右美沙芬(2D6),咪达唑仑(3A4) 4 种探针底物浓度。方法:采用symmetry C18柱(2.1 mm×50 mm,3.5 μm),流动相为甲醇：0.1％甲酸水溶液(67∶33,V/V),流速为 0.2 mL/min,柱温35 ℃。电喷雾离子化,检测方式为多反应离子监测。以卡马西平为内标,同时检测大鼠血浆中非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、咪达唑仑的药物浓度,并进行其专属性、精密度、准确度、稳定性的验证。结果:非那西丁( 10～5 000 ng/mL )、甲苯磺丁脲( 20～10 000 ng/mL )、右美沙芬( 4～1 000 ng/mL )、咪达唑仑( 4～1 000 ng/mL )线性关系良好,R²>0.99,准确度为95.6%～105.2%,日内和日间精密度RSD(%)<10%,提取回收率>77%,RSD(%)<7%、基质效应在90.7%～100.3%之间,RSD(%)<5.9%,稳定性好。结论:建立了同时快速测定大鼠血浆中4种探针药物（非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、咪达唑仑）浓度的高效液相-串联质谱分析方法,准确度和灵敏度高,专属性强。血浆样品的稳定性好,适用于CYP450酶活性的研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度及其药代动力学应用

目的：建立LC-MS/MS法测定人血浆中安立生坦浓度并应用于人体药代动力学研究。方法：采用液-液萃取法从人血浆中提取安立生坦和内标后，在Waters Symmetry C18柱（4.6 mm×100 mm, 5 μm）上进行色谱分离，有机相：40%甲醇-60%乙腈，水相：5 mmol/L乙酸铵-10%乙腈，流速：0.5 mL/min，电喷雾离子化源，多反应监测，负离子模式，安利生坦和内标的监测离子对分别为m/z 377.1→301.2和m/z 380.4→301.0。结果：安立生坦在2～2 000 ng/mL浓度范围内线性良好，定量下限为2 ng/mL，批内精密度小于2.72%，批间精密度小于8.98%，经内标归一化后的基质效应在92.3%～98.3%之间，提取回收率在74.6%～80.5%之间。 结论：该方法灵敏、经济、可靠，适用于人血浆中安立生坦浓度的测定，满足人体药代动力学研究。     

高效液相色谱法定量尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度

目的: 建立高效液相色谱法测定尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度。方法: 用Agilent ZORBAX SB-Aq column色谱柱,ZORBAX-Extend C₁₈预柱,以甲醇和 47 mmol/L KH₂PO₄水溶液作为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长为 260 nm。结果: 血清中尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤的线性范围分别是(1.667~166.667)×10³ ng/mL (r=0.9995)、(0.033~3.338)×10³ ng/mL(r=0.9994)和 (0.033~3.338)×10³ ng/mL (r=0.9996),日间与日内精密度均<15%。结论: 该法灵敏度高,精密度和准确度佳,能满足非布司他体内药效学研究。     

高抗肿瘤活性汉黄芩素衍生物GL-V9在大鼠体内的组织分布和排泄研究

目的:研究抗肿瘤化合物汉黄芩素衍生物GL-V9在大鼠体内的组织分布及排泄特点。方法:组织分布实验中，灌胃给予50 mg/kg的GL-V9混悬液后，根据既定的时间点处死大鼠，采集相应的血浆样品和胃、小肠、肝脏等组织样品，然后以乙酸乙酯作为提取剂对生物样品进行处理后通过UPLC-MS/MS法测定其中的GL-V9含量。排泄实验中，同样灌胃给予大鼠50 mg/kg的GL-V9混悬液，按照既定的时间段收集粪便、尿液和胆汁样品，测定排泄样品中GL-V9的含量，获得相应的累积排泄率。结果:各组织和排泄样品中GL-V9在2～1 000 ng/mL范围内线性关系良好（R2＞0.99）。组织分布实验结果显示，灌胃给药后GL-V9由胃肠道逐渐向肝脏、肺、肾组织分布，在脑、心和血浆中的含量较低。排泄实验表明，口服给药后，粪便中GL-V9排泄量最高，累积排泄率达（75.41±41.77）%。结论:GL-V9在大鼠各组织中的分布较为广泛，尤其是胃肠道、肝脏、肺和肾脏组织，而粪便则是GL-V9在大鼠体内的主要排泄途径。     

UPLC-MS/MS法测定人血浆中瑞舒伐他汀的浓度及人体生物等效性研究

目的: 建立和确证超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）测定人血浆中瑞舒伐他汀（rosuvastatin,RST）浓度的方法,并评价瑞舒伐他汀钙片在健康男性受试者中的药代动力学和人体生物等效性。方法: 选择阿托伐他汀（atorvastatin, ATO）作为内标(IS),50 μL 血浆样品经甲醇沉淀蛋白,YMC-ODS-C₁₈(2.1 mm×50 mm ID,1.9 μm)色谱柱梯度洗脱分离,导入串联质谱（MS/MS）,采用选择反应检测（SRM）进行定量分析,检测的离子对分别为m/z 482.2→258.2（RST）和559.2→440.2 (ATO),建立测定人血浆RST的UPLC-MS/MS法。筛选20名健康男性受试者单次口服瑞舒伐他汀钙片受试制剂或参比制剂,测定RST的血药浓度,并计算两制剂的主要药动学参数及相对生物利用度。结果: 血浆中RST在 0.5~40 ng/mL 范围内线性良好（R = 0.9998）,最低检测限为 0.5 ng/mL,提取回收率92.49%~101.38%,日内精密度﹤4.54%,日间精密度9.59%。RST受试制剂与参比制剂的C_max分别为（11.90±4.54）ng/mL和（11.80±4.08）ng/mL,t_1/2分别为（4.24±2.01）h和（4.74±2.26）h,t_max 分别为（3.40±0.68）h和（3.60±0.82） h,AUC_0-t 分别为（87.7±41.4） ng•mL^-1•h和（96.0±40.9）ng•mL^-1•h,AUC_0-∞分别为（93.1±41.3） ng•mL^-1•h和（101.9±41.9） ng•mL^-1•h,与参比试剂比较,受试制剂的相对生物利用度为(93.1±27.6)% (AUC_0-t)、(94.3±26.2)%( AUC_0-∞)。结论: 所建立的测定人血浆RST的UPLC-MS/MS法具有简便、准确、灵敏、快速等特点,可应用于瑞舒伐他汀钙片的人体生物等效性研究。研究结果表明：受试制剂和参比制剂在人体内处置过程基本一致,两种制剂具有生物等效性,临床上可以替换使用。     

高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中的达比加群

目的: 建立了一种简单、快速、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定大鼠血浆中达比加群的浓度,进行了系统的方法学验证研究,并应用于达比加群酯大鼠灌胃给药后的药代动力学研究。方法: 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,通过Ecosil-C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm) 色谱柱分离,流动相为甲醇5%甲醇水溶液（含有10 mmol/L甲酸铵及 0.1%甲酸）,梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子化源正离子条件下多反应监测模式,监测反应离子对为达比加群［M+H]⁺ m/z 472.2→289.2,内标苯海拉明［M+H］⁺ m/z 256.1→167.0。结果: 达比加群在 0.25~500 ng/mL 浓度范围内线性关系良好（r =0.9970）,定量下限为 0.25 ng/mL;日内、日间精密度（RSD）均小于 9.57%,准确度（RE）均在±6.5%以内;血浆中无内源性物质干扰,基质效应为108%~112%,提取回收率为 92.6%~94.2%;达比加群的血浆样品经室温放置 4 h、-80 ℃三次冻融循环、-80 ℃冻存三周,处理后的样品在进样器内放置 24 h 均稳定;药物浓度超出曲线范围的样品经空白血浆稀释5倍后,其准确度均在±8.00%以内,精密度小于4.92%。结论:本文建立的LC-MS/MS方法学验证,成功适用于大鼠灌胃20 mg/kg给药达比加群酯药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定粪便样品中百可利和黄芩苷的浓度及在粪便排泄中的应用

目的:建立LC-MS/MS法测定人粪便中百可利和黄芩苷的浓度,研究中国健康人单剂量口服百可利咀嚼片后百可利和黄芩苷在粪便中的排泄过程。方法:采用Phenomenex Synergi 4u MAX-RP 80 C12色谱柱（2.0 mm×150 mm,4 μm）;流动相组成包含有机相B：乙腈-甲醇（50∶50,V/V,含0.5%甲酸）,水相 A：3 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.5%甲酸）。正离子方式检测,扫描方式为多反应监测（MRM）,采用甲醇直接沉淀法处理粪便样品;8例健康受试者口服百可利咀嚼片400 mg,采用LC-MS/MS法测定粪便中百可利和黄芩苷浓度,计算48 h累积排泄率。结果: 粪便中百可利的线性浓度范围为100～20 000 ng/mL,黄芩苷为10～4 000 ng/mL。百可利定量下限为100 ng/mL,黄芩苷为10 ng/mL,批内、批间精密度均小于15%。百可利、黄芩苷经过样品预处理后在自动进样器中放置24 h、3次反复冻融、以及在-70 ℃冰箱中保存6个月内均稳定。样品稀释20倍、200倍后检测,百可利、黄芩苷的准确度和精密度均满足要求。8名健康受试者单剂量口服400 mg百可利咀嚼片后,原药百可利的48 h累积排泄率为（36.32±16.52）%,主要代谢产物黄芩苷的48 h累积排泄率为（0.96±0.54）%。结论:本方法操作简单,灵敏度高,选择性高,适合于百可利咀嚼片及其体内代谢物黄芩苷在中国健康受试者粪便中排泄的研究。     

HPLC-MS/MS 法同时测定Beagle 犬血浆中槲皮素、山萘酚和异鼠李素

目的 建立同时测定犬血浆中槲皮素、山萘酚和异鼠李素浓度的HPLC-MS/MS 方法。方法 血浆样品经酸水解后用乙醚提取, 采用选择性反应检测方法测定其血药浓度。仪器为FinniganLC-MS/MS 二级四极杆质谱检测器, 色谱柱为Luna C₁₈ (150 mm ×2.00 mm i.d., 5 μm, Luna,USA);流动相为乙腈-0.1 %甲酸, 梯度洗脱。结果 槲皮素、山萘酚和异鼠李素的线性范围均为0.5 ~ 100.0 ng/mL, 三种黄酮的最低定量限均为0.5 ng/mL, 各自日内日间精密度分别小于7.3 %,6.2 %和6.4 %, 回收率分别大于70 %, 66 %和70 %。结论 该测定方法经验证符合血浆样品的测定要求, 可以应用于临床前药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中格列美脲及其活性代谢物

目的: 建立同时测定格列美脲(Glimepiride,G)及其活性代谢物羟基格列美脲(Hydroxyl-glimepiride,M₁)血浆浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法。方法: 血浆样品酸化后,经乙酸乙酯萃取后浓集进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈ (50 mm×3.0 mm,5 μm),甲醇∶水∶甲酸(80∶20∶0.1)为流动相,流速为 0.2 mL/min,柱温为室温,采用电喷雾(ESI) 离子源,多反应离子检测模式, 以格列齐特(Gliclazide,IS)为内标。G、M₁和IS的检测离子对分别为质荷比(m/z) 491.4→352.4、507. 4→352.4、324.4→127.2。结果: G和M₁的线性范围分别为 1.25～400 ng/mL 和 0.313~100 ng/mL,最低定量限分别为 1.25 和 0.313 ng/mL;批内批间精密度均小于10%,方法回收率均在 96.4% ~102.5%之间。结论: 该方法简便快速、特异性高,可用于同时测定G和M₁血药浓度及其人体药代动力学的研究。     

UPLC-MS/MS法测定卡泊芬净血浆浓度

目的: 建立UPLC-MS/MS法测定血浆中卡泊芬净的浓度。方法: 采用AQ C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 3 μm),柱温40 ℃,流动相为甲醇和0.2%甲酸5 mmol/L乙酸铵水溶液梯度洗脱,流速0.4 mL/min,电喷雾离子化,正离子扫描模式下,卡泊芬净m/z 547.5→538.5,罗红霉素m/z 838.6→157.9（内标）,分析时长6.5 min。结果: 卡泊芬净在0.1~25 μg/mL中呈良好的线性关系（R²=0.999 5）;定量下限为0.1 μg/mL;提取回收率为59.08%;日内及日间RSD<15%、准确度、精密度、稳定性等均符合生物样品测定要求。低、中、高和定量下线浓度点的卡泊芬净提取回收率相一致。结论: 本方法操作简单、快捷、准确、灵敏度高且重现性良好,适用于临床上对卡泊芬净血药浓度的快速监测。     

高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中吲达帕胺浓度及生物等效性研究

目的: 建立一种简单、有效且灵敏的液质联用法(LC-MS/MS)检测人血浆中吲达帕胺浓度。方法: 血浆样品经叔丁基甲基醚(tert-Butyl Methyl Ether, MTBE)萃取后,选安定作内标。色谱柱为Luna C₁₈柱(150 mm×2.0 mm, 5 μm);流动相为 10 mmol/L 甲酸铵(含0.1%甲酸):甲醇=(20∶80,V/V);流速为 0.30 mL/min;采用ESI+ MRM方式监测;源电压:3.5 kV;源温度:100 ℃;吲达帕胺和安定的离子选择通道分别为:m/z 366.2→132.1,285.2→154.1。结果: 吲达帕胺线性范围为 0.536~45.733 ng/mL,最低检测浓度为 0.536 ng/mL,提取回收率在69%~81%,日内、日间RSD均<15%。由湖南协力药业有限公司生产生产的吲达帕胺缓释片(1.5 mg/片)与施维雅(天津)制药有限公司生产的吲达帕胺缓释片(商品名:纳催离,1.5 mg/片)经单次及多次给药试验研究,具有生物等效性。结论: 本方法简单、灵敏,可准确检测人体血浆中吲达帕胺的浓度。     

左卡尼汀对大鼠糖尿病肾病的保护作用分析

目的: 探讨与分析左卡尼汀对大鼠糖尿病肾病的保护作用。方法: 24只8周龄的雄性SD大鼠随机分为3组,每组8只大鼠。为对照组提供单次腹腔内生理盐水(10 mL/kg)注射,接着静脉注射生理盐水(1 mL/kg);为糖尿病肾病组提供单次腹腔内链脲霉素(65 mg/kg)注射,接着静脉注射生理盐水(1 mL/kg);对于实验组,则提供单次腹腔内链脲霉素(65 mg/kg)注射,接着静脉注射左卡尼汀(50 mg/kg),都为1次/d,持续14 d,记录实验后肾功能情况。结果: 实验组与糖尿病肾病组都造模成功,实验后实验组与对照组的体质量显著高于糖尿病肾病组(P<0.05),血肌酐与尿蛋白排泄量及IL-6、TNF-α含量都显著低于糖尿病肾病组,肾组织Bcl-2、Caspase-3表达量都显著低于糖尿病肾病组,实验组与对照组之间对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 左卡尼汀在大鼠糖尿病肾病中的应用能有效发挥肾功能保护作用,抑制肾组织的Bcl-2、Caspase-3表达,促进大鼠体质量恢复正常。     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中吲哒帕胺的浓度

目的: 建立一种简便、灵敏的测定人体血浆中吲哒帕胺浓度的高效液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS/MS) 方法。方法: 以瑞格列奈钙为内标,采用乙腈:0.1%甲酸水溶液=90∶10为流动相,以Agilent-ZORBAX-C₁₈柱(2.1 mm×150 mm,5.0 m)色谱柱为分析柱,通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行进样检测。检测离子为 [M+H]+m/z 364.1 m/z 188.8(吲哒帕胺)和[M+H]+m/z 451.1 m/z 134.8(瑞格列奈钙,内标)。结果: 吲哒帕胺线性范围为 0.5～50 ng/mL,定量下限为 0.5 ng/mL,线性关系良好;高、中、低三个浓度的日内、日间的RSD均<15%,平均回收率为 94.60%～110.33%。结论: 本方法专属性强,操作简便,灵敏度高,适用于吲哒帕胺制剂的临床药动学研究。     

基于HPLC-MS/MS的青风藤生物碱的药物代谢动力学研究

目的: 建立青风藤主要活性成分青风藤碱和木兰花碱在大鼠生物样品中的液质联用（LC-MS/MS）分析方法,并用于研究青风藤生物碱在SD大鼠体内的药代动力学行为及特征,为青风藤的广泛研究及临床用药奠定基础。方法:（1）采用LC-MS/MS法建立并确证测定大鼠生物样品中青风藤生物碱含量的方法。（2）考察大鼠单次灌胃给予青风藤提取液（10 g生药/kg）的体内经时过程。采用LC MS/MS测定给药后血浆中青风藤生物碱的浓度,根据测定结果计算药代动力学参数并研究其药动学规律。结果: 青风藤碱和木兰花碱分别在13.8～3 530.0 ng/mL(R²=0.999 9)和5.8～2 960.0 ng/mL(R²=0.999 8)浓度范围内线性关系良好,批内与批间的相对标准偏差(RSD, relative standard deviation)均小于15%。灌胃给药后青风藤碱和木兰花碱的C_max分别为14.88 μg/mL、0.99 μg/mL;T _max分别为55.00 min、57.50 min;T _1/2分别为2.64 h、6.08 h;AUMC_(0-t)分别为369 127.25 μg·h·h·mL-1、32 143.44 μg·h·h·mL-1;AUC_(0-t)分别为2 482.76 μg·h·mL-1、177.77 μg·h·mL-1;MRT_(0-t)分别为2.50 h、3.12 h。结论: 本实验所建立的LC-MS/MS法具有灵敏、快速、稳定的特点;药代动力学参数表明青风藤生物碱在大鼠体内的动力学符合非房室模型,其在大鼠体内的达峰时间较短,消除过程较缓慢,血药浓度高。     

五酯胶囊对大鼠体内辛伐他汀及其代谢物辛伐他汀酸药代动力学影响

目的：建立LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中辛伐他汀和辛伐他汀酸浓度,并考察单剂量五酯胶囊对辛伐他汀及辛伐他汀酸在大鼠体内药代动力学影响。方法：采用简单的液液萃取法（LLE）,以洛伐他汀为内标,选用Agilent Eclipse-C18(2.1 mm×150 mm,3.5 μm)为色谱柱,水（含0.1%甲酸）-乙腈（含0.1%甲酸）（5∶95,V/V）为流动相。采用喷雾电离源（ESI）;正离子方式检测,扫描方式为多反应监测（MRM）。将12只雄性大鼠随机分成对照组和实验组,每组6只。对照组灌胃给予辛伐他汀40 mg/kg,实验组先灌胃给予五酯胶囊内容物150 mg/kg（每粒含五味子甲素11.25 mg）,15 min后,再灌胃给予辛伐他汀40 mg/kg,两组分别于给药前和给药后时间点0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h于大鼠眼眶静脉丛采血约0.5 mL于肝素管中。通过Phoenix软件计算得到相关药代动力学参数。结果：血浆中的辛伐他汀、辛伐他汀酸分别在5～5 000 ng/mL内线性关系良好（辛伐他汀r=0.994 0,辛伐他汀酸r=0.994 54）,最低定量下限分别为5 ng/mL,日内标准偏差与日间标准偏差均小于10%,提取回收率可达80%以上。主要药代动力学参数如下（对照组与实验组）,Cmax［(97±24) vs. (590±227) ng/mL, (385±137) vs. (1 322±502) ng/mL］、AUC0-t［(446±70) vs. (1 315±535) ng·h·mL- 1, (1 305±531) vs. (3 393±1 047) ng·h·mL- 1］、t1/2［(2.37±0.18) vs. (2.93±0.78) h,(2.39±0.43) vs. (3.44±0.80) h］明显增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论：本实验建立的LC-MS/MS法快捷、简单、灵敏、专属性强,适用于大鼠血浆中辛伐他汀和辛伐他汀酸的测定;五酯胶囊对大鼠体内的辛伐他汀和辛伐他汀酸的药代动力学特征有影响,提示临床两药联用可能会发生显著的相互作用。     

UPLC-MS/MS同时测定血浆样品中他莫昔芬及代谢产物的浓度和应用

目的: 建立UPLC-MS/MS法测定人体血浆样品中他莫昔芬及代谢产物的浓度和应用。 方法: 采用Waters AcQuity型超高效液相色谱联用API4000型三重四级杆质谱仪,样品处理采用固相萃取的方法,采用Thermo hypurity C₁₈(150 mm×2.1 mm,5 μm)色谱分析柱, 流动相为 10 mmol/L 甲酸胺-乙腈(40∶60,V/V),流速为 0.3 mL/min,进样体积为 10 μL,柱温为 30 ℃, 样品室温度为 5 ℃,质谱应用ESI源、正离子模式、多反应监测(MRM)方式检测他莫昔芬及各代谢产物的浓度。 结果: 他莫昔芬、ND-Tam和TamNox线性范围为1~400 ng/mL,4-OH-Tam线性范围为 0.4~160 ng/mL,4-OHND-Tam线性范围为2~800 ng/mL,可以满足样本浓度定量检测的需要,方法稳定、特异性高,并成功地应用到用药后他莫昔芬及各代谢产物血浆浓度的检测。 结论: 该方法简便、准确、重复性好,可以准确地定量人体血浆他莫昔芬和代谢产物的浓度,除了为临床血药浓度监测及他莫昔芬药效学研究提供服务外,也可为遗传药理学科研提供技术方法。