下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

目的：研究下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响及机制。方法：qRT-PCR方法测定正常支气管上皮16HBE细胞和肺癌A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176的表达。将A549/DDP细胞分成对照组、si-NC组、si-LINC00176组、si-LINC00176+Anti-miR-NC组、si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组。MTT实验检测顺铂对A549/DDP的半数抑制浓度（IC50）。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot测定LC3-I、LC3-II、Beclin 1、C-Caspase-3蛋白表达。利用荧光素酶报告系统鉴定LINC00176和miR-138-5p的靶向关系。结果：与16HBE细胞比较，A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与A549细胞比较，A549/DDP细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与对照组、si-NC组比较，si-LINC00176组A549/DDP细胞IC50显著降低（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著降低（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达、miR-138-5p表达水平显著升高（P<0.01）。LINC00176与miR-138-5p直接结合。与si-LINC00176+Anti-miR-NC组比较，si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组A549/DDP细胞IC50显著升高（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著升高（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达显著降低（P<0.01）。 结论：下调lncRNA LINC00176通过靶向上调miR-138-5p能够抑制肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药，抑制细胞自噬，诱导细胞凋亡。     

沉默YAP基因提高伊马替尼耐药的人髓性白血病细胞K562药物敏感性的研究

目的: 探究沉默YAP基因后,提高伊马替尼耐药的K562细胞（K562/IMA）对于伊马替尼敏感性的作用及相关机制,为伊马替尼耐药的人髓性白血病治疗提供参考。方法: 采用小干扰RNA技术（siRNA）转染YAP的siRNA-YAP沉默K562/IMA的YAP基因。设置对照组（Control）、siRNA阴性对照组（siRNA-NC）和YAP siRNA组（siRNA-YAP）。采用RT-qPCR和Western blot法鉴定沉默后各组细胞YAP蛋白和mRNA的表达水平。CCK-8法检测各组细胞对于伊马替尼的敏感性,并计算半数抑制浓度IC50。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。Western blot法检测YAP、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、caspase-3、细胞色素C（Cyto-C）的表达水平,Transwell小室检测细胞转移侵袭能力。结果: YAP基因沉默后,siRNA-YAP组细胞中YAP的蛋白和mRNA表达水平显著低于Control组和siRNA-NC组,沉默效果较好。siRNA-YAP的IC50值显著低于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）,而流式细胞术结果显示,siRNA-YAP组细胞在相同药物剂量下,凋亡率显著高于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。YAP沉默的K562/IMA细胞迁移侵袭能力显著下降。伊马替尼干预后,siRNA-YAP细胞中Bcl-2/Bax的水平下调,cleaved-caspase-3、caspase-3和Cyto-C的水平上调,相比Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。结论: 沉默伊马替尼耐药的K562/IMA细胞中YAP基因,可以恢复肿瘤细胞对于伊马替尼的敏感性,可以促进线粒体凋亡途径的激活,导致耐药肿瘤细胞的凋亡。     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的：比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法：不同浓度顺铂（cisplatin, DDP）干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）表达水平;应用10 μmol/L顺铂（相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC50值）干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3）、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白（p-FOXO3a）表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1（Baf A1）干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A549及A549/DDP细胞Akt、p-Akt及自噬相关蛋白表达水平,以探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。结果：与亲本A549细胞相比,获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞具有更强的顺铂耐药性及较高的基础自噬水平。在10 μmol/L顺铂压力下,A549/DDP细胞存活率明显高于A549细胞;A549细胞中,顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达水平,下调Bcl-2表达、促进Bax及Cleaved Caspase-3活性片段表达增加,诱导细胞凋亡;A549/DDP细胞中,相同浓度的顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调Beclin 1及LC3Ⅱ表达、下调p62表达,促进细胞保护性自噬,使耐药细胞获得生存活性。 结论：顺铂诱导亲本A549细胞凋亡可能与抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达有关;A549/DDP细胞顺铂耐药表型的获得可能与顺铂抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调细胞保护性自噬相关。     

槲皮素通过GAS5调控GSK-3β/β-catenin逆转乳腺癌阿霉素耐药

目的：探究槲皮素逆转阿霉素耐药作用及其可能机制。方法：采取CCK-8法检测槲皮素（ADR）对阿霉素耐药细胞的细胞毒性及对阿霉素耐药的逆转效果;平板克隆形成实验检测细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞内罗丹明123（Rh123）积累变化;qRT-PCR法检测细胞中GAS5、ABCB1 RNA表达水平;Western blot检测GSK-3β、β-catenin、c-MYC、cyclin D1、ABCB1蛋白表达水平。结果：槲皮素（10、20、40 μmol/L）可以明显增强MCF-7/ADR对ADR的敏感性,抑制细胞的增殖,增加细胞内Rh123积累,促进GAS5、GSK-3β的表达,抑制β-catenin、c-MYC、cyclin D1、ABCB1的表达;细胞转染si-GAS5后,GAS5、GSK-3β表达明显下降,β-catenin、c-MYC、cyclin D1、ABCB1表达明显升高;当加入槲皮素（40 μmol/L）与si-GAS5共处理后,与sncRNA加槲皮素共处理对照组相比,这些蛋白的表达都发生了逆转性的回复作用。 结论：槲皮素可以通过GAS5介导GSK-3β/β-catenin通路抑制ABCB1的表达从而逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药。     

同源盒基因2在黑色素瘤细胞对于曲美替尼耐药中的作用

目的:研究同源盒基因2（MSX2）在黑色素瘤细胞A375对于曲美替尼耐药中的作用机制。方法:构建曲美替尼耐药的A375细胞株（A375-AR）,曲美替尼干预A375和A375-AR后采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。采用小干扰RNA（siRNA）沉默A375-AR中MSX2基因,设计A375、A375-AR、A375-AR-MSX2,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。构建MSX2过表达的A375细胞系（A375-OE）,设置A375、A375-OE和A375-AR组,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。结果:A375-AR对1.8 nmol/L的曲美替尼耐药,采用1.8 nmol/L曲美替尼干预后,A375细胞活力和细胞凋亡率显著高于A375-AR,A375细胞中Bcl-2基因表达水平低于A375-AR,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于A375-AR。A375-AR沉默MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著增高,且细胞活力下调,凋亡率上调,细胞中Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达上调。A375过表达MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著下调,细胞活力上调,凋亡率下调,细胞中Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达下调。结论:MSX2基因可以诱导黑色素瘤细胞对于曲美替尼的耐药,是治疗黑色素瘤耐药的潜在靶点。     

肿瘤细胞和耐药肿瘤细胞中FoxO3/Keap1/Nrf2通路的表达差异

目的: 检测FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路在肿瘤细胞和耐药肿瘤细胞中的表达差异,探讨FoxO3/Keap1/Nrf2信号在肿瘤细胞耐药中的作用。方法: 构建肺癌A549耐药（A549/DDP）和结肠癌HCT-8耐药（HCT-8/5-FU）两种细胞株,耐药细胞对药物的敏感性用MTT法检测;分别用qRT-PCR、Western blot检测FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路成员在非耐药和耐药肿瘤细胞中mRNA和蛋白的表达情况并进行比较。结果: A549/DDP的耐药性明显高于A549细胞（P<0.05),耐药倍数为5.25倍;HCT-8/5-FU耐药性显著高于HCT-8细胞（P<0.05）,耐药倍数为31.67倍;两种耐药细胞A549/DDP和HCT-8/5-FU中的FoxO3、Keap1和Akt基因的mRNA表达水平降低而Nrf2和Nqo1基因的mRNA表达水平升高;A549/DDP和HCT-8/5-FU细胞中的Keap1和FoxO3蛋白表达水平降低而p-Akt、Nrf2、Nqo1的蛋白表达水平升高。结论: FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路与肿瘤耐药性有一定相关性,为深入研究该通路并探索降低肿瘤耐药性的治疗策略提供参考。     

氧化前胡素对乳腺癌MCF-7/DOX细胞多柔比星耐药的抑制作用

目的：探讨氧化前胡素（oxypeucedanin, OPD）对人乳腺癌MCF-7/DOX细胞多柔比星耐药的影响并探究其可能机制。方法：体外培养MCF-7/DOX细胞,MTT法检测OPD对MCF-7/DOX细胞增殖的影响,并考察OPD最大无毒浓度与多柔比星不同浓度联用对MCF-7/DOX细胞增殖的影响。qRT-PCR检测OPD与多柔比星联用对MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1及甘油磷脂代谢酶AGPAT2、CHKA、CEPT1、DGKA、PCYT1A、PLA2G15 mRNA水平的影响。Western blot检测OPD与多柔比星联用对MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1、CHKA及CCTα蛋白表达的影响。结果：OPD 50 μg/mL与多柔比星联用作用于MCF-7/DOX细胞的IC50值低于多柔比星单独,其逆转倍数为1.56倍。与对照组比较,多柔比星组MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1和6种甘油磷脂代谢酶mRNA均下调（P<0.05或P<0.01）,MDR1、MRP1、CHKA和CCTα蛋白表达无显著变化（P>0.05）,OPD 50 μg/mL与多柔比星联用组上述基因和蛋白表达均显著下调（P<0.05）。与多柔比星组比较,OPD 50 μg/mL与多柔比星联用组MCF-7/DOX细胞上述基因表达进一步下调（P<0.05或P<0.01）,上述4种蛋白表达无显著变化（P>0.05）。 结论：OPD可增强MCF-7/DOX细胞对多柔比星的化疗敏感性,逆转耐药,可能与其抑制甘油磷脂代谢途径有关。     

芬戈莫德对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖和凋亡的作用

目的: 观察芬戈莫德（FTY720）对人胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其可能的机制。方法: 将FTY720作用于MIAPaCa-2细胞,采用不同方法观察细胞形态学和分子生物学方面的改变。结果: MTT结果显示经过FTY720处理后,MIAPaCa-2细胞的增殖受到抑制,且这种作用呈现剂量依赖性,IC₅₀约为5 μmol/L。流式细胞术提示FTY720可以促进MIAPaCa-2细胞凋亡。划痕实验结果显示FTY720可抑制MIAPaCa-2细胞迁移。3D细胞增殖实验结果显示FTY720可以抑制MIAPaCa-2细胞增殖和集落形成。Western Blotting显示FTY720可以降低p-Akt、Bcl-2和pro-caspase-3的表达,上调caspase-9表达。结论: FTY720可以抑制胰腺癌MIAPaCa-2细胞的增殖,并且引起细胞凋亡,可能与其降低Bcl-2的表达,进而激发caspase家族介导的凋亡程序有关。     

三叶青总黄酮逆转吉非替尼耐药肺腺癌细胞的耐药性

目的：探讨三叶青总黄酮（FTH）逆转吉非替尼（GEF）耐药肺腺癌细胞的耐药性及其初步机制。方法：采用MTT法,检测FTH对GEF耐药A549/GR细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测FTH对A549/GR细胞凋亡及周期的影响;建立A549/GR细胞荷瘤小鼠模型,观察两药联用后的体内抑瘤效果;采用Western blot法检测瘤组织PI3K/Akt信号通路关键蛋白（PTEN、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT）的表达情况。结果：与单用GEF相比,FTH联合GEF给药可显著抑制A549/GR细胞增殖（P<0.05）,诱导A549/GR细胞凋亡（P<0.05）,使细胞停滞在G0/G1期。体内实验结果表明,两者联合可显著抑制裸鼠A549/GR移植瘤的生长（P<0.05）,并显著降低瘤组织p-PI3K和p-AKT表达（P<0.05）,升高PTEN蛋白表达（P<0.05）。 结论：FTH可逆转A549/GR细胞对GEF的耐药性,其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/AKT通路有关。     

泛素特异性肽酶22诱导胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的观察

目的: 探讨泛素特异性肽酶22（ ubiquitin specific peptidase 22,USP22）在胰腺癌吉西他滨耐药中的作用。方法: 采用Western blot检测吉西他滨诱导不同胰腺癌细胞株对USP22表达情况的影响。利用胰腺癌SW1990亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞株SW1990/Gem及USP22 siRNA稳定表达细胞株(表示为SW1990-shUSP22、SW1990/Gem-shUSP22);采用CCK-8实验检测抑制USP22表达对胰腺癌细胞吉西他滨敏感性的影响。结果: 1 μmol/L或10 μmol/吉西他滨诱导人胰腺癌PANC-1和SW1990细胞后,USP22表达均增高（P<0.05或P<0.01）。耐药细胞株SW1990/Gem中USP22蛋白表达显著高于SW1990亲本细胞株（P<0.01）。USP22 siRNA稳定表达细胞株SW1990-shUSP22,SW1990/Gem-shUSP22中USP22蛋白表达水平与相应对照组SW1990-NC,SW1990/Gem-NC相比,分别显著下调约65%（P<0.01）和60%（P<0.01）。SW1990-NC组和SW1990-shUSP22组对吉西他滨的IC50分别为（1 850.96±87.37） nmol/L和（534.83±49.68） nmol/L,差异具有统计学意义(P<0.01)。SW1990/Gem-shUSP22组对吉西他滨的IC50为（2 157.08±120.32） nmol/L,与SW1990/Gem-NC组（29 850.96±345.78） nmol/L相比,差异具有统计学意义(P<0.01);与SW1990-NC组（1 387.58±96.56） nmol/L相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 吉西他滨可诱导胰腺癌细胞USP22表达增高。抑制USP22表达可增加胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,并可有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。本研究揭示胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的新机制,为改善胰腺癌个体化化疗方案提供新思路。     

奥巴克拉联合5-氟尿嘧啶对低氧性胰腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的: 研究在低氧条件下,奥巴克拉(obatoclax)联合5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)对胰腺癌细胞株BxPC-3细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）的影响。方法: 细胞分组为低氧组、5=FU组、obatoclax+5-FU组,利用MTT法检测各组BxPC-3细胞增殖活性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western blot检测各组BxPC-3细胞中EMT相关基因与蛋白的表达情况。结果: 在低氧条件下,obatoclax联合5-FU可抑制BxPC-3细胞的增殖活性,且具有时间依赖性;obatoclax联合5-FU可进一步促进EMT的管家基因,转录因子Snail与Slug的表达升高;obatoclax联合5-FU促进上皮标记E-Cadherin的表达升高,及间质标记N-Cadherin、Fibronectin、Collagen I、Vimentin的表达下降。结论: 在低氧状态下obatoclax联合5-FU可抑制胰腺癌BxPC-3细胞的增殖活性,可通过抑制转录因子Snail与Slug的表达,上调上皮标记E-Cadherin的表达,下调间质标记N-Cadherin、Fibronectin、Collagen I及Vimentin的表达,从而抑制肿瘤细胞上皮向间质的转化,进而降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。     

奥巴克拉联合5-氟尿嘧啶对低氧性胰腺癌细胞凋亡的作用研究

目的: 研究在低氧条件下,奥巴克拉(obatoclax,OBX)联合5-fluorouracil(5-FU)对胰腺癌HPAC细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法: 建立低氧条件;采用Western blot检测正常氧及低氧条件下HPAC细胞中HIF-1α抗体的表达;Hoechst 33258染色检测OBX在正常氧及低氧条件下对胰腺癌细胞凋亡的影响;细胞分组为低氧组、5-FU组、OBX+5-FU组,MTT检测各组中细胞增殖活性, Western blot检测各组中HIF-1α、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果: 低氧条件下HIF-1α的表达显著高于其在正常氧条件下的表达,说明低氧条件成功;在低氧条件下,OBX诱导胰腺癌HPAC细胞凋亡的能力增强,凋亡率增加,且呈一定的剂量依赖关系;低氧条件下5-FU可抑制胰腺癌细胞活力,降低细胞中HIF-1α、Bcl-2的表达,促进Bax的表达;OBX联合5-FU组,细胞活力显著降低,HIF-1α、Bcl-2的表达进一步下降,Bax的表达明显升高。结论: 在低氧条件下,OBX联合5-FU可通过抑制HIF-1α和Bcl-2的表达,促进Bax的表达,诱导细胞凋亡而抑制胰腺癌HPAC细胞的增殖。     

PHA-767491抑制CDC-7的表达在子宫内膜癌ishikawa细胞系中的作用研究

目的:PHA-767491抑制CDC-7的表达对子宫内膜癌ishikawa细胞系的增殖、侵袭、迁移以及凋亡产生的作用。方法:配置PHA-767491至各实验所需浓度，使其作用于子宫内膜癌ishikawa细胞系。CCK-8法用于检测ishikawa细胞系的增殖能力及明确IC50。运用qRT-PCR法，检测药物PHA-767491对ishikawa细胞中的CDC-7 mRNA的表达的影响。利用划痕实验，检测PHA-767491对于ishikawa细胞迁移能力的影响。用Transwell法检测药物影响ishikawa细胞的侵袭能力。流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测药物PHA-767491影响ishikawa细胞的凋亡能力。结果:CCK-8的结果得出，药物PHA-767491能够有效地抑制ishikawa细胞系增殖的能力，得出24 h药物IC50等于9.51 μmol/L。qRT-PCR的结果证明：PHA-767491抑制ishikawa细胞中CDC-7 mRNA的显著表达。划痕实验的结果表明：PHA-767491可抑制ishikawa细胞的迁移能力。Transwell结果表明：药物PHA-767491有效地抑制ishikawa细胞的侵袭能力。流式细胞术结果证明：PHA-767491可以促进ishikawa细胞的凋亡。结论:PHA-767491能够显著抑制子宫内膜癌细胞ishikawa中CDC-7的表达，降低了ishikawa细胞增殖和迁移、侵袭能力，并且可明确诱导ishikawa细胞的凋亡。     

缺氧诱导因子2α对肝细胞癌化疗耐药性的影响

目的:研究缺氧诱导因子2α（HIF-2α）对肝细胞癌化疗耐药性的影响及其机制。方法:选取6种肝细胞癌细胞株,Western blot方法检测HIF-2α的表达; 制备过表达HIF-2α慢病毒颗粒并感染人肝细胞癌细胞株HepG2和PLC/PRF/5细胞,制备稳定表达HIF-2α的细胞株HepG2-HIF-2α和PLC/PRF/5-HIF-2α,Western blot法验证其表达;配置6种常规化疗药物氟尿嘧啶、环磷酰胺、盐酸表柔比星、丝裂霉素、甲氨蝶呤、索拉菲尼的5个浓度,并加入HepG2-HIF-2α及对照细胞中,MTT法检测细胞抑制率;Western blot检测两种过表达HIF-2α的肝细胞癌细胞株及相应对照细胞中耐药基因MDR1、LRP及MRP1的水平。结果:Western blot结果显示HIF-2α在6种肝细胞癌细胞株中均有表达;HIF-2α慢病毒颗粒感染肝细胞癌细胞株后能够在肝细胞癌细胞中稳定过表达HIF-2α;MTT结果显示,与对照组相比,环磷酰胺、甲氨蝶呤和索拉菲尼对HepG2-HIF-2α抑制率明显较低（P<0.05）,提示HIF-2α的表达引起耐药性的增加;而氟尿嘧啶、盐酸表柔比星和丝裂霉素对HepG2-HIF-2α细胞的抑制率与对照组无统计学差异（P>0.05）;Western blot法进一步分析了HIF-2α在肝细胞癌细胞中的表达导致耐药性增加的原因,结果显示,在HepG2-HIF-2α细胞及PLC/PRF/5-HIF-2α细胞中,耐药相关基因MDR1、LRP、MRP1的表达水平均高于对照组（P<0.05）。结论:在肝细胞癌中,HIF-2α能够通过上调MDR1、LRP、MRP1耐药基因的表达引起肝细胞癌细胞的耐药性的增加。     

双PI3K/mTOR抑制剂NVPBEZ235对宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用

目的: 探讨双PI3K/mTOR 抑制剂 NVPBEZ235对宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用。方法: 四甲基偶氮唑盐（MTT）及集落克隆法测定各因素对Hela细胞的抑制作用。通过流式细胞仪检测药物联合射线（irradiation,IR）对宫颈癌细胞周期的影响。结果: 与对照组相比,NVPBEZ235在体外能够抑制人宫颈癌细胞的生长。NVPBEZ235、IR联合作用细胞,在体外可以使细胞周期阻滞于G2/M期,二者具有协同作用,联合作用效果显著大于单药作用。结论: 20% IC50 NVPBEZ235在体外能够促进细胞对射线照射的敏感性,抑制细胞的增殖从而实现对宫颈癌细胞的放射增敏作用。     

长链非编码RNA TSIX通过靶向miR-384调控人胰腺癌细胞增殖的研究

目的：观察长链非编码RNA（lncRNA）TSIX在胰腺癌组织及细胞中的表达,并探讨其对细胞增殖的影响及可能的机制。方法：采用qPCR 法检测 TSIX 在5种胰腺癌细胞株（BxPC-3、CAPAN-1、AsPC-1、 CFPAC-1和SW1990）、人正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7和7例胰腺癌组织及其癌旁组织中的差异性表达。生物信息学预测并分析与TSIX互补配对的miRNA及下游基因。用携带TSIX siRNA基因的重组慢病毒颗粒（LV-siRNA）感染SW1990细胞作为实验组,以阴性对照慢病毒颗粒（LV-NC）作为对照组。通过qPCR检测低表达TSIX对miR-384和Gab2 mRNA表达的影响,通过Western blot检测Gab2和PI3K/AKT通路蛋白的表达,通过流式细胞术、MTT比色法、集落形成实验检测低表达TSIX对SW1990细胞周期、活力及增殖的影响。结果：与胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7相比,TSIX在胰腺癌细胞株中均呈高表达（P<0.01）,其中在SW1990细胞中表达水平最高（P<0.01）。TSIX在胰腺癌组织中的表达水平高于其癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）。SW1990细胞转染TSIX siRNA后,qPCR检测细胞中TSIX表达量明显降低（P<0.01）,miR-384表达升高（P<0.01）,Gab2的mRNA表达降低（P<0.01）;低表达TSIX能显著阻滞细胞周期、抑制细胞活力和集落形成能力（P<0.01）。结论：lncRNA TSIX在胰腺癌组织及细胞中高表达,低表达TSIX可抑制SW1990细胞的增殖,其机制可能为TSIX通过与miR 384互补配对调控Gab2基因的表达。