分化相关基因-1在血管损伤后新生内膜形成中的表达及临床意义

目的: 探讨分化相关基因-1在大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜形成中的表达情况及作用。方法: 24只SD大鼠随机分为实验组和对照组,各12只。实验组给予建立颈动脉球囊损伤模型,对照组不做任何处理。第14天后分别测定两组大鼠血清中分化相关基因-1（N-myc downstream regulated gene 1, NDRG-1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth,VEGF）、内皮抑素（endostatin,ES）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白细胞介素-1（interleukin-1,IL-1）和内膜变化情况。结果: 实验组12只大鼠建模成功10只,成功率83.33%。建模前两组大鼠NDRG-1、VEGF、ES、TNF-α、IL-1检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）;建模后14 d实验组NDRG-1、VEGF、ES、TNF-α、IL-1检测结果明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;NDRG-1的表达与VEGF的表达呈正相关,与ES、TNF-α、IL-1的表达呈负相关（r=0.724,-0.822,-0.776,-0.814,P＜0.01）;实验组内膜面积、内膜面积/中膜面积比等明显大于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,NDRG-1的表达与内膜面积、内膜面积/中膜面积比呈负相关（r=-0.712, r=-0.776, P＜0.01）。结论: NDRG-1与血管损伤后新生内膜形成关系密切,可能是新生内膜增生的重要参与者。     

替诺福韦酯治疗对慢性乙型肝炎患者血清FGF-23、β2-MG、Cys-C及RBP水平的影响

目的: 研究替诺福韦酯治疗对慢性乙型肝炎患者血清成纤维细胞生长因子-23（FGF-23）、β2-微球蛋白（β2-MG）、胱抑素-C（Cys-C）及视黄醇结合蛋白（RBP）水平的影响。方法: 抽取2015年1月至2016年1月在本院治疗的80例慢性乙型肝炎患者作为研究对象,予服用替诺福韦酯,300 mg/次,1次/d,治疗12个月,抽取40例健康体检者作为对照组。观察患者在不同时间点HBV-DNA水平、HBV-DNA不可检测率、HBeAg转阴率及血清中FGF-23、β2-MG、Cys-C及RBP浓度水平变化情况。结果: 与治疗前相比较,经过替诺福韦酯治疗后,患者HBV-DNA水平明显下降（P<0.05）,HBV-DNA不可检测率明显上升（P<0.05）,HBeAg转阴率明显升高（P<0.05）;治疗后6个月、12个月,病例组患者血清中FGF-23、β2-MG、Cys-C及RBP浓度水平明显高于对照组（均P<0.05）;病例组患者血清中FGF-23浓度水平与β2-MG、Cys-C及RBP浓度水平呈正相关（r：0.566,0.643,0.604,P<0.05）,β2-MG、Cys-C、RBP指标之间也呈正相关（P<0.05）。FGF-23、β2-MG、Cys-C及RBP指标异常组和对照组比较,BNU、Ccr、GFR、P水平差异具有统计学意义（t值分别为：5.581,6.947,3.330,4.921,均P<0.05）,Scr比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论: 替诺福韦酯对乙型肝炎患者FGF-23、β2-MG、Cys-C及RBP水平具有升高作用,通过监测这些指标的变化,有助于调整替诺福韦酯治疗方案,预防或减少肾功能不全和低磷性骨病的发生。     

β-肾上腺素能受体阻滞剂和COX-2抑制剂在结直肠癌肝转移中的作用研究

目的: 研究β-肾上腺素能受体阻滞剂和环氧合酶-2（COX-2）抑制剂在结直肠癌肝转移过程中发挥的作用及潜在机制。方法: 本研究首先通过体外结直肠癌细胞实验,研究不同浓度的β-肾上腺素能受体阻滞剂和COX-2抑制剂对结肠癌细胞的增殖抑制作用,血管内皮生长因子（VEGF）分泌能力和活性氧（ROS）表达能力,随后于体内构建小鼠结直肠癌肝转移动物模型,对小鼠模型的肿瘤转移率、肿瘤数量、肿瘤最大重量、肿瘤最大直径和VEGF mRNA进行检测。结果: β-肾上腺素能受体阻滞剂和COX-2抑制剂对结肠癌细胞具有显著的增殖抑制作用,呈给药剂量依赖性。当β-肾上腺素能受体阻滞剂的浓度为200 μmol/L时,肿瘤细胞的增殖抑制率为(39.00±2.00)%,VEGF分泌量为(55.44±7.65) pg/mL,当COX-2抑制剂的浓度为2 μmol/L时,肿瘤细胞的增殖抑制率为(33.67±1.15)%,VEGF分泌量为(37.75±4.08) pg/mL,各组内比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。与使用β-肾上腺素能受体阻滞剂相比,使用COX-2抑制剂明显地抑制肝脏转移瘤的生长效果,比较差异具有统计学意义（P<0.05）,联合使用β-肾上腺素能受体阻滞剂和COX-2抑制剂可有效降低肿瘤的最大重量、尺寸和VEGF mRNA表达水平［（0.20±0.13） g,（1.98±0.33） mm和0.22±0.06］,与对照组相比［（0.88±0.13） g,（5.45±0.88） mm和1.03±0.14］,与β-肾上腺素能受体阻滞剂组［（0.50±0.16） g,（3.45±0.45） mm和0.75±0.08］和COX-2抑制剂组［（0.34±0.09） g,（2.73±0.24） mm和0.50±0.08］相比,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论: 在结直肠癌肝转移过程中,β-肾上腺素能受体阻滞剂和COX-2抑制剂通过调控肿瘤表达ROS,促进肿瘤细胞凋亡;通过协同作用调控肿瘤细胞VEGF分泌,抑制肿瘤细胞新生血管形成和迁移。     

慢性低O2高CO2大鼠血管内皮生长因子表达及参一胶囊的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF) 在低氧性肺动脉高压形成中的意义及参一胶囊对其影响。 方法 采用ELISA 法、透射电镜、原位杂交技术等方法, 观察正常对照组、低O₂ 高CO₂ 4 周组、低O₂ 高CO₂ 4 周+参一胶囊组大鼠肺动脉平均压(mPAP)、右心室重量比(RV/LV +S)、血清和肺组织的VEGF的含量、肺细小动脉的超微结构、肺组织VEGFmRNA表达的变化。 结果 低O₂ 高CO₂ 组大鼠的mPAP、RV/LV +S、血清和肺组织的VEGF 的含量明显高于正常对照组(P <0.01)。低O₂ 高CO₂ 4 周+参一胶囊组大鼠mPAP、RV/LV +S、血清VEGF 显著低于低O2 高CO₂ 组(P <0.01), 肺组织的VEGF 的含量也低于低O₂ 高CO₂ 组(P <0.05)。低O₂ 高CO₂ 组大鼠肺细小动脉中膜平滑肌细胞明显增生、胶原纤维较正常对照组增多, 低O₂ 高CO₂ 4 周+参一胶囊组较低O₂ 高CO₂ 组则明显减轻。原位杂交显示低O₂ 高CO₂ 组大鼠肺细小动脉VEGFmRNA 较正常对照组明显增加(P <0.01), 而低O₂ 高CO₂ 4周+参一胶囊组与低O₂ 高CO₂ 组比较, 则明显降低(P <0.05)。 结论 VEGF 参与了慢性低氧性肺动脉高压的形成, 参一胶囊可通过抑制VEGF 的作用而有效地降低肺动脉高压。     

雷公藤甲素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的:探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ) 诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFb) 增殖及α₁(Ⅰ) 型前胶原合成的影响。方法:建立Ang Ⅱ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝(MTT) 比色法测定细胞增殖;分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot 印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞α₁(Ⅰ) 型前胶原mRNA 及蛋白表达。结果:雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制心肌成纤维细胞增殖和α₁(Ⅰ) 型前胶原合成。结论:雷公藤甲素可以通过抑制Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和α₁(Ⅰ) 型前胶原合成从而抑制心肌纤维化。     

睑板腺癌中MMP-2的表达及其临床意义

目的: 探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metallop roteinase-2,MMP-2)在睑板腺囊肿和睑板腺癌组织中的表达差异及其与睑板腺癌临床病理特征的关系和临床意义。方法: 采用免疫组化SP法检测睑板腺囊肿和睑板腺癌组织中MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,以CD34标记检测肿瘤内的微血管密度(microvessel density, MVD),分析MMP-2与临床病理因素、VEGF、MVD的关系。结果: MMP-2在睑板腺癌组织中阳性表达率高于睑板腺囊肿(56% vs 20%),差异具有统计学意义(P﹤0.05),而VEGF表达在睑板腺癌和睑板腺囊肿中差别无统计学意义;MMP-2蛋白表达与肿瘤复发和局部浸润有关 (P﹤0.05),与患者年龄、组织学分级、病理类型和病程无关 (P﹥0.05)。MMP-2阳性的肿瘤组织内MVD明显高于MMP-2阴性肿瘤(P﹤0.05),VEGF的表达与MMP-2无相关性(r=-0.049,P=0.748)。结论: MMP-2在睑板腺癌中高表达,可能通过非VEFG依赖途径促进肿瘤的血管生成,进而参与肿瘤浸润和复发。     

血管内皮生长因子受体抑制剂SU5614对甲苯二异氰酸酯诱导哮喘模型小鼠治疗作用的研究

目的: 探讨血管内皮生长因子(VEGF)受体抑制剂SU5614对甲苯二异氰酸酯(TDI)诱导哮喘模型小鼠的治疗作用。方法: BALB/C小鼠随机分为3组:对照组,模型组和SU5614组。采用TDI制备哮喘小鼠模型,观察SU5614对模型小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)VEGF的表达情况、肺组织病理学变化,气道反应性和气道血浆渗出的变化。结果: 免疫细胞学分析结果表明,模型组小鼠BALF中VEGF表达明显增加,而SU5614组VEGF表达则明显降低;病理组织学发现模型组肺组织病理学炎症反应明显,而SU5614组炎症反应则明显减轻;模型组气道反应性明显增高,而SU5614组则明显降低(P<0.05);模型组气道血浆渗出明显增加,而SU5614组则明显减少(P<0.05)。结论: SU5614不仅抑制BALF中VEGF活性,也能抑制炎性细胞的迁移,降低气道高反应性和减少气道血浆渗出。     

川陈皮素抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大

目的：探讨川陈皮素（nobiletin, Nob）抑制高糖诱导心肌细胞肥大的作用及其机制。方法：利用高糖（high glucose, HG）刺激乳鼠心肌细胞（neonatal rat cardiomyocytes, NRCMs）建立心肌细胞肥大模型,并给予Nob、核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂Brusatol干预,采用MTT法检测细胞存活率,qRT-PCR法检测C-myc、Nppa mRNA水平,免疫荧光检测心肌细胞表面积,Western blot法检测Nrf2和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达水平。结果：33.3 mmol/L HG刺激NRCMs 48 h,细胞存活率显著下降,C-myc、Nppa mRNA水平和细胞表面积显著升高,Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低（P<0.05）。给予Nob干预后,与HG组比较,细胞存活率、Nrf2和HO-1蛋白表达显著上调,C-myc、Nppa mRNA水平和细胞表面积显著下降（P<0.05）。利用Brusatol抑制Nrf2活性,与HG+Nob组比较,上述指标被逆转。 结论：Nob抑制高糖诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

阿司匹林、舒林酸对3AO细胞环氧合酶-2、血管生长因子、层粘蛋白受体、CD44V6表达的影响

目的: 研究阿司匹林、舒林酸对3AO 细胞环氧合酶-2(COX-2)、血管生长因子(VEGF)、CD₄₄V₆ 及层粘蛋白受体(LN-R)表达的影响。方法: 采用MTT方法观察阿司匹林、舒林酸在贴壁前后加入培养液中对3AO 细胞生长的影响。采用免疫细胞化学的方法研究两种药物对3AO 细胞COX-2、VEGF、CD₄₄V₆、LN-R 的影响。结果: MTT 实验显示阿司匹林、舒林酸不论在贴壁前还是后加入均可抑制3AO 卵巢癌细胞的生长,加药后调节pH 可减弱生长抑制作用但仍然可明显抑制肿瘤细胞的生长。阿司匹林和舒林酸对COX-2、VEGF 的表达也有抑制作用,但对CD₄₄V₆ 及LN-R 的表达无明显影响。结论: 抑制COX-2 的表达可以下调VEGF 的表达,从而抑制肿瘤的血管生成。阿司匹林和舒林酸可通过抑制COX-2 及VEGF 的表达而抑制肿瘤的生长。     

麒麟丸预防体外受精胚胎移植术后所致卵巢过度刺激综合征患者的疗效及对血浆相关指标的影响

目的:研究麒麟丸预防体外受精胚胎移植（IVF-ET）术后所致卵巢过度刺激综合征（OHSS）患者的疗效及其对血浆中血管内皮细胞生长因子（VEGF）、组织因子（TF）和组织因子通路抑制剂（TFPI）的影响。方法:选取2016年1月至2019年1月我院收治的64例行IVF-ET患者,在促排卵注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）日发现有OHSS高风险因素者,简单随机化分组,各32例。对照组给予西医治疗方案,观察组加用麒麟丸,比较两组轻中度OHSS的发生情况、新鲜周期移植取消率、血浆中VEGF、TF、TFPI水平、行IVF-ET者临床结局（HCG阳性率、生化妊娠率、临床妊娠率）。结果:两组均无重度OHSS发生,观察组OHSS发生率（12.50%）、新鲜周期移植取消率（15.63%）低于对照组（50.00%、43.75%）（χ2=6.063,P=0.014）;观察组取卵日、胚胎移植日血浆VEGF、TF水平分别为［（368±103）pg/mL、（392±91）pg/mL］、［（24±4）pg/mL、（29±4）pg/mL］低于对照组的［（436±117）pg/mL、（448±108）pg/mL］、［（26±4）pg/mL、（31±4）pg/mL］（t=2.450、2.237、4.093、5.204,P=0.017、0.029、＜0.001、＜0.001）;观察组取卵日、胚胎移植日血浆TFPI水平分别为［（73±18）ng/mL、（66±12）ng/mL］高于对照组的［（62±16）ng/mL、（58±10）ng/mL］（t=2.550、3.032,P=0.014、0.004）;观察组生化妊娠率（8.70%）低于对照组（42.86%）（χ2=4.147,P=0.042）,临床妊娠率（91.30%）高于对照组（57.14%）（χ2=4.147,P=0.042）。结论:麒麟丸能预防IVF-ET术后重度OHSS发生,并减少轻中度OHSS的发生,降低新鲜周期移植取消率,改善IVF-ET术后妊娠结局,其机制可能与调节VEGF、TF和TFPI表达有关。     

鼠神经生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

目的: 观察鼠神经生长因子(mNGF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的影响。方法: 4周龄健康SD大鼠60只,按随机数字表法分为治疗组(n=30)和正常对照组(n=30)。治疗组在常规培养的基础上加入浓度为 0.1 μg/mL mNGF作为诱导液。将培养的第3代BMSCs制成单细胞悬液,诱导后3 d,观察细胞形态变化,行神经元特异性烯醇酶(NSE) 免疫荧光检测,计算阳性率。结果: 正常对照组细胞仅有少量NSE的表达,治疗组细胞表达NSE阳性率较对照组细胞显著增加(P＜0.01)。结论: mNGF可诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化。     

Cl-通道阻断剂对A10细胞α1-AR 介导的Ca2+内流的影响1

目的: 在胚胎大鼠主动脉平滑肌细胞(A10), 探讨Cl^- 通道与 Ca²⁺ 内流的关系及酪氨酸磷酸化对Ca²⁺ 内流的作用。 方法: 采用 Fura-2 荧光探针双波长测定胞浆游离 Ca²⁺ 浓度([Ca²⁺ ]_i )。 结果: Ca²⁺通道阻断剂 nifedipine 和 SK&F96365 可阻止肾上腺素(Adr) 触发的 Ca²⁺ 内流;氯通道阻断剂 niflumicacid(NFA) 和 furosemide 呈浓度依赖性抑制 Ca²⁺ 内流。在 Ca²⁺ 内流被 SK&F96365 最大限度抑制后,NFA和 furosemide 可进一步抑制 Ca²⁺ 内流;而 Ca²⁺内流被NFA 和furosemide 分别最大抑制 28%和 35%后, SK&F96365 也可进一步抑制 Ca²⁺ 内流达 53%和52%。genistein 呈浓度依赖性抑制 Ca²⁺ 内流;vana-date 浓度依赖性促进 Ca²⁺ 内流。 结论: 在 A10 细胞, 肾上腺素受体触发的 Ca²⁺ 内流涉及电压依赖性Ca²⁺ 通道(VDC) 和受体操纵性 Ca²⁺ 通道(ROC);氯通道参与了 VDC 及 ROC 介导的 Ca²⁺ 内流;蛋白酪氨酸磷酸化的水平影响 Ca²⁺ 内流。     

环氧化酶2过表达对铝盐致大鼠海马神经元损伤的影响

目的 研究环氧化酶2(COX-2)过表达与铝盐致大鼠海马神经元损伤间的关系。方法 原代海马神经元培养 7 d,予以铝盐负荷(终浓度 200 μmol/L)建立大鼠海马神经元损伤模型,以神经元转染COX-2过表达腺病毒(MOI=100),Western Blot检测COX-2的蛋白表达水平,酶化学法检测海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及MTT值,倒置荧光显微镜观察海马神经元病理形态变化。结果 COX-2过表达腺病毒转染的神经元COX-2蛋白表达增加(P<0.01),SOD活性、MDA含量、LDH漏出率、MTT值,以及大鼠海马神经元细胞的形态和结构未见明显异常变化。而COX-2过表达腺病毒转染在铝盐负荷基础上的海马神经元细胞MTT值和SOD活性明显下降,LDH漏出率和MDA含量明显上升(P<0.01或P<0.05),表现为严重的细胞损伤。结论 单纯的一定程度COX-2过表达不会造成神经元明显损伤,但可增加神经元对铝盐损伤的敏感性。     

神经生长因子对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)对分离的新生大鼠脑细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 以 Fura-2/AM 为细胞内钙离子的荧光指示剂, 测定谷氨酸(Glu)及过氧化氢(H₂O₂)诱导的新生大鼠脑细胞内[Ca²⁺]_i, 观察 NGF 对此影响。 结果 新生大鼠脑细胞内静息 [Ca²⁺]_i 208±22nmol/L, NGF对神经细胞静息 [Ca²⁺] i 无明显影响, NGF 1～ 100μg/L 能剂量依赖地抑制 Glu 和 H₂O₂ 引起的 [Ca²⁺]_i 升高, 其 IC₅₀ 分别为 42.5 和 27.3 μg/L。结论 NGF 通过降低 [Ca²⁺]_i 的水平来保护大脑皮质神经元抗谷氨酸毒性及过氧化氢损伤。     

链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠合并脑缺血再灌注损伤模型优化方法的研究

目的: 为2型糖尿病（T2DM）合并脑缺血治疗新药的机制研究,探索T2DM合并脑缺血再灌注（T2DM-MCAO/R）损伤大鼠模型建立的优化方法。方法: 以4至5周高脂高糖（HFG）饮食诱导胰岛素抵抗,注射链脲佐菌素（STZ）形成T2DM模型,按STZ注射剂量分为A、B、C、D、E五种方法。再建立T2DM MCAO/R损伤大鼠模型：A、B、C法采用颈总动脉（CCA）进线法,D、E法用颈外动脉（ECA）进线法;A法为单次给药,B、C法连续给药3 d,D、E法在手术前连续给药2周。通过观测大鼠的症状,测量各阶段体质量和空腹血糖（FBG）、手术后神经功能行为学评分等来评价成模率和模型质量。结果: T2DM-MCAO/R成模率为80.0%、77.8%、84.6%、100.0%、100.0%,其中,E法T2DM成模率最高,为93.3%,死亡率最小。胰岛素和尼莫地平都可以使模型大鼠血糖和神经功能行为学明显改善,并使脑梗死面积减小。结论: 以两次低剂量注射STZ,结合ECA进线法手术,建立T2DM-MCAO/R损伤大鼠模型,成模率高,死亡率低,稳定性好,是成功的优化模型,值得推广应用于T2DM合并脑缺血治疗新药的作用与机制研究。