p53基因状态对人卵巢癌细胞辐射敏感性的影响

本研究应用PCR-SSCP银染法检测3株人卵巢癌细胞p53基因的存在状态,以四甲基偶唑蓝（MTT）染色法和流式细胞术（FCM）比较不同p53基因状态的肿瘤细胞在1～10Gy^60Coγ射线照射后的体外生长及凋亡率。结果显示,p53野生型的A2780细胞^60Coγ射线照射后发生明显的生长抑制和凋亡,而p53基因突变型的A2780-CP细胞和缺失型的SKOV3细胞则呈现较强的辐射抗性。本研究结果说明,人卵巢癌细胞的p53基因状态直接影响其对γ射线照射的敏感性。     

沉默人乙酰转移酶样蛋白基因对结直肠癌CL187细胞放射敏感性的影响

探讨沉默人乙酰转移酶样蛋白(Human acetytransferase-like protein, hALP)基因表达对结直肠癌CL187细胞放射敏感性的影响。通过临床数据库挖掘h ALP基因在结肠癌组织的表达情况;CL187细胞沉默hALP后接受递增剂量(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy)射线照射,运用克隆增殖实验和细胞存活率检测实验分析细胞放射敏感性变化;结直肠癌CL187细胞沉默hALP后接受8 Gy射线照射,使用流式细胞分析术检测细胞凋亡情况;CL187细胞沉默hALP基因后接受8 Gy射线照射,使用Western blotting检测hALP基因、P53和BAX的蛋白表达水平。结果显示:CL187细胞沉默h ALP基因后接受2 Gy射线照射,沉默hALP基因组与对照组的细胞存活分数分别是0.63、0.5,相对生物学效应1.26;沉默hALP基因后射线照射引起的细胞凋亡从19.53%增高到36.49%(p0.05);沉默hALP基因后射线照射引起P53、BAX表达水平进一步增高。结果提示,沉默hALP基因表达提高了结直肠癌CL187细胞的放射敏感性。hALP基因的表达水平与细胞放射敏感性之间存在相关性,有可能是预测结直肠癌放射敏感性的分子靶标。     

碱性单细胞凝胶电泳预测肿瘤细胞内在放射敏感性研究

应用克隆形成法和碱性单细胞凝胶电泳技术检测辐射诱导的人红白血病细胞株K562、人结肠腺癌细胞株LS-T-117和鼠胶质瘤细胞株C6的初始DNA单链断裂数及单链断裂后的修复与细胞内在放射敏感性之间的关系。结果表明,3种细胞系的放射敏感性依次为K562>LS-T-117>C6;3种细胞系的DNA迁移距离都随着照射剂量的增加而增大,呈良好的剂量-效应关系。在相同剂量下,辐射诱导的DNA单链的初始断裂数目也依次为K562>LS-T-117>C6;3种细胞系经10Gy X射线照射并在PBS中培养不同时间后DNA迁移距离都有较大幅度的下降,但下降幅度依次为C6>LS-T-117>K562,在相同剂量下辐射诱导的DNA单链断裂后的修复能力也依次为C6>LS-T-117> K562。结果显示,辐射诱导的DNA单链断裂及修复与细胞内在放射敏感性有很好的相关性,可用于人体肿瘤细胞内在放射敏感性的预测。     

60Coγ射线对AT细胞SOD活性和MDA含量的影响研究

研究毛细血管扩张性共济失调症（AT）患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA（AT细胞）的应对电离辐射导致细胞氧化损伤的能力。以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM063（GM细胞）为对照,采用超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehydc,MDA）测定试剂盒,AT细胞和GM细胞经60^Coγ射线0、1、2、3、4Gy照射后,观察比较它们的SOD活性和MDA含量的差异,并分别进行曲线拟合。结果显示在1、2、3、4Gy剂量照射下,AT和GM细胞中SOD活性均随受照剂量增加而明显降低（P〈0．01）,同一剂量点的AT细胞中SOD活性明显低于GM细胞（P〈0．05）;AT和GM细胞中MDA含量均随受照剂量增加而升高（P〈0．05）,同一剂量点的AT细胞中MDA含量明显高于GM细胞（P〈0．05）。AT细胞和GM细胞的SOD活性和MDA含量均与照射剂量呈线性关系。结果表明由于AT细胞中SOD活性降低,导致AT细胞应对辐射的氧化损伤能力不足,引起AT细胞中MDA含量增加,是AT细胞高辐射敏感性的原因之一。     

辐射基因治疗黑色素瘤的实验研究

研究低剂量辐射结合腺病毒(AdCMV)载体介导的p53基因转导对人黑色素瘤A375细胞系基因转移效率和辐射敏感性的影响.用复制缺陷的重组腺病毒载体(AdCMV-p53)介导入p53基因转染1 Gy X-射线预辐照的A375细胞系,RT-PCR检测mRNA水平,流式细胞仪测定细胞周期阻滞及外源性P53蛋白表达情况,克隆形成率测定辐射后细胞存活率.用携带报道基因的复制缺陷重组腺病毒载体AdCMV-GFP作为对照.实验结果表明,1 Gy X-射线辐照可较高地增加AdCMV-p53对A375细胞的基因转导效率,转导的外源性野生型p53可在A375(wtp53)细胞中高效表达,并诱导细胞周期G1期阻滞;单纯转导p53对A375细胞无明显诱导凋亡和生长抑制效应;而转导p53后给予X-射线辐射,当剂量达到4 Gy及其以上时,48h后AdCMV-p53感染组细胞开始出现明显形态改变,克隆存活率明显低于AdCMV-GFP感染组和未感染组,显示存活曲线下移,4Gy时细胞存活率就减少了1个量级.小剂量辐射既可有效增加AdCMV-p53介导的p53转导,又不会对患者产生明显副作用;转导野生型p53的人黑色素瘤A375细胞系显示P53过表达;过表达的P53蛋白虽然对A375细胞无明显生长抑制及凋亡诱导作用,但可明显增加其辐射敏感性.这表明p53是基因治疗黑色素瘤较好的侯选基因,也为临床上放疗联合基因治疗黑色素瘤提供了实验室依据,即减轻临床上对于辐射敏感性差的肿瘤单纯大剂量照射或单纯基因疗法中rAd-p53制品用量过大而给病人造成的毒副作用.     

二氢丹参酮I对QGY—7703细胞和SPC—A—1细胞放射敏感性的 …

利用体外细胞集落形成法研究二氢丹参酮Ｉ对肿瘤细胞放射敏感性的影响。实验表明，二氢丹参酮Ｉ对人肝癌细胞株（ＱＧＹ－７７０３）和人肺细胞细胞株（ＳＰＣ－Ａ－１）有较强的细胞毒作用，半致死剂量ＬＤ５０分别为８．８６μｍｏｌ／Ｌ和７．７３μｍｏｌ／Ｌ，该药物与Ｘ射线联合使用能增强细胞对射线的敏感性，１μｍｏｌ／Ｌ的二氢丹参酮１作用于有氧细胞１ｈ后照射，对ＱＧＹ－７７０３细胞和ＳＰＣ－Ａ－１细胞的增敏比（Ｓ     

80MeV/u 12C6+离子辐照小鼠头部对脾脏细胞周期分布的影响

研究重离子辐照小鼠头部对脾脏细胞周期分布的影响，为重离子放射治疗癌症和太空防护提供基础数据。80MeV／u能量的^12C^6＋对BALB／c小鼠头部给以0、0．5、1、2、4、10Gy的照射，用流式细胞仪测脾脏细胞周期分布。重离子辐照后36h，小鼠脾脏细胞S期细胞随着辐照剂量的增加显著减少（p〈0．05）；0．5Gy组、4Gy组和10Gy组出现G0／G0期阻滞明显阻滞（p〈0．05），1Gy组和2Gy组无显著变化（p〉0．05）；0．5Gy组G2／M期细胞显著减少（p〈0．01），其它剂量组明显阻滞（p〈0．05）。重离子辐照小鼠头部对小鼠脾脏细胞周期分布有明显影响。     

槲皮素对胶质瘤干／祖细胞的辐射致敏作用及其机制的初步探讨

本研究旨在探讨槲皮素对胶质瘤干／祖细胞辐射敏感性的影响及其机制。用槲皮素（Quercetin,Que）作用于已经建立的胶质瘤干／祖细胞系SU-．2,用WesternBlot和免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3的变化,以检测SU-2的自噬活性的改变。采用四甲基偶氮唑盐（3．（4,5．Dimethylthiaz01-2-y1）．2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法和克隆形成实验比较各处理组对SU．2的增殖抑制作用;应用AnnexinV-FITC／PI流式细胞术检测不同因素处理SU．2后细胞凋亡情况的改变。实验结果表明：用槲皮素预先处理胶质瘤干／祖细胞系SU-2再辐照组较单纯辐照组的细胞增殖率降低∞〈0．05）,克隆形成率明显降低p〈0,05）,细胞凋亡率显著增加仞〈0．05）。这些结果提示,胶质瘤干／祖细胞的基础自噬活性很低,经槲皮素处理后,再经X线照射,胶质瘤干／祖细胞的自噬活性提高,辐射敏感性明显增加。     

电离辐射所致肾损伤引起的骨代谢异常的机制探讨

研究了大剂量γ射线照射大鼠肾脏后诱发骨代谢异常的细胞分子机制。以15Gyγ射线照射大鼠肾脏,3个月后分析骨骼的病理形态、相关基因mRNA和蛋白质表达量的改变。肾辐射致骨小梁体积、骨小梁宽度、骨小梁数目分别降低13．2％、18．3％（p〈0．05）和20．1％（p〈0．05）,骨小梁间距增加34．8％（p〈0．05）,骨吸收表面提高20．2％（p〈0．05）。骨骼RANKL／OPG（细胞核因子κB受体活化因子配基,Receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL;骨保护蛋白,Osteoprotegerin,OPG）mRNA比值提高52．2％（p〈0．05）。TGF—β（转移生长因子β,Transforming growth factor-β）、IGF-Ⅰ（胰岛素样生长因子Ⅰ,Insulin—like growth factor Ⅰ,）、OPN（骨桥蛋白,Osteopontin）mRNA和蛋白质表达量明显升高。结果表明：大剂量γ射线照射大鼠肾脏可导致明显骨代谢异常,其发生机制主要与肾1α羟化酶活性降低致活性维生素D减少及PTH升高,成骨细胞表达的RANKL／OPG比例失调,以及TGF—β、IGF—Ⅰ、OPN表达明显升高有关。     

电离辐射和紫杉醇诱导的KB细胞中SPATA5L1和Cyclin B2表达的变化

电离辐射与紫杉醇协同作用,可以诱导体外培养的人口腔上皮癌KB细胞出现G2／M阻滞,形成多核细胞,并最终造成死亡。先前通过基因芯片筛选研究发现,在经过电离辐射和／或紫杉醇作用后,有10条与细胞分裂有关的基因存在差异表达。本研究旨在通过Real—time PCR和Western Blot定量分析其中两条基因SPATA5L1和CyclinB2的表达变化,来揭示G2／M阻滞及多核细胞形成的分子机制。结果表明,在受到6Gy以下不同剂量的电离辐射或电离辐射与40nmol／L紫杉醇协同作用后,SPATA5L1的表达量明显增加,但同时CyclinB2的表达量则下降。推测SPATA5L1上调表达和CyclinB2适度的下调表达,使受处理细胞在胞核分裂后阻止胞浆分裂而无法形成正常子代细胞,导致G2／M阻滞及多核细胞形成。     

白藜芦醇对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其机制研究

摘要采用MTT法检测不同浓度白藜芦醇对肺癌A549细胞的毒性;克隆形成实验测定白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用;碱性单细胞凝胶电泳实验（彗星实验）检测细胞DNA受损情况;采用Westernblot法检测白藜芦醇与辐射联合作用对抑制凋亡蛋白Survivin的影响。结果表明,白藜芦醇对肺癌A549细胞的抑制作用随着白藜芦醇浓度升高及时间延长而增加：白藜芦醇与辐射联合作用可以明显增加辐射所致A549细胞的DNA损伤（p〈0．05）,并降低克隆形成率及抑制凋亡蛋白Survivin的表达。表明白藜芦醇对A549细胞具有放射增敏作用,且放射增敏作用可能是通过抑制Survivin蛋白的表达实现的。     

电离辐射联合顺铂对人肺癌细胞中BTG3基因表达的影响

加速器产生的6-MV X-射线一次性照射体外培养的人肺腺癌细胞株A549和SPCA-1,细胞的吸收剂量分别设置为0、1、3、5和8 Gy,细胞照射后24 h及单次接受5 Gy照射后6、12和24 h后取样;X-射线联合顺铂对BTG3表达的影响研究设立单纯照射组(5 Gy)、顺铂处理组(20μmol·L-1顺铂)和联合处理组(5 Gy+20μmol·L-1顺铂),上述实验均以未给予任何处理的细胞为对照组;采用Western blot及RT-PCR法检测受到不同剂量电离辐射及照射后不同时间肿瘤细胞中BTG3表达水平。Western blot与PCR检测结果均显示,A549和SPCA-1细胞在受到不同剂量的X-射线照射后24 h,其BTG3蛋白及mRNA表达量均明显增加,并随电离辐射剂量的增加而增加,与对照组比较有统计学差异(t=5.25-15.75,p0.05);照射后不同时间检测结果显示,细胞在X-射线照射4 h后BTG3蛋白及mRNA的表达量即开始上升,并持续到照射后24 h,与照射前相比有统计学差异(t=7.52-11.18,p0.05);联合处理组BTG3的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=7.02-15.86,p0.05)。电离辐射联合顺铂可以上调肺癌细胞株中BTG3的表达,BTG3基因有可能作为肺癌放化疗的靶基因。     

125I籽源持续低剂量率照射诱导人肺癌细胞的旁效应

观察125I籽源持续低剂量率照射诱导人肺癌细胞损伤的旁效应.选择对高剂量率外照射敏感性不同的A549人肺腺癌细胞和NCI-H446人小细胞肺癌细胞,采用125I籽源离体照射细胞模式,将直接受照细胞与未受照细胞共培养24h,应用CB微核法和γH2AX荧光免疫分析法,检测2Gy和4Gy125I籽源持续低剂量率照射诱导人肺癌细胞的微核形成和DNA双链断裂水平.结果表明,125I籽源照射能显著诱导A549和NCI-H446细胞的微核形成率和γH2AX位点形成率增加的旁效应,显示增强对肿瘤细胞的杀伤作用.旁效应强弱与累积照射剂量、肿瘤细胞的辐射敏感性相关:对高剂量率外照射敏感的NCI-H446细胞对低剂量率照射及其旁效应的敏感性高于A549细胞,但与直接辐射效应相比,125I籽源照射诱导A549细胞旁效应高于NCI-H446细胞,这两种细胞的辐射旁效应均随累积照射剂量增加而降低,提示介导旁效应的信号因子水平可能随细胞损伤程度的增加而下降.     

用99Tcm-MIBI在体外评价肿瘤细胞多药耐药逆转剂逆转细胞多药耐药的效果

摘要 目的 通过99Tcm-MIBI细胞内摄取变化为手段探讨单独或低剂量联合应用多药耐药逆转剂逆转肿瘤细胞多药耐药的效果,期望为进一步解决临床恶性肿瘤化疗面临的问题提供实验依据。方法 人类髓系白血病K562细胞及其耐药细胞系K562/D(高度表达Pgp)各2×106个,分别加入99Tcm-MIBI 8MBq,观察不同时间不同浓度多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA 0.1～0.4μg/ml)和/或维拉帕米（Ver 2.5～10μg/ml）存在时,K562细胞及K562/D细胞对99Tcm-MIBI摄取变化。两种细胞系间及逆转剂前后间比较采用t检验,组间比较采用q检验。结果①不同浓度Ver或CsA存在时,K562细胞99Tcm-MIBI摄取略有增加,但差异无显著性（P＞0.05）。K562/D细胞加入不同浓度Ver及CsA后99Tcm-MIBI摄取均明显增加。但不同浓度Ver间及不同浓度CsA间,摄取增加的差异没有显著性（P＞0.05）。②2.5μg/ml Ver及0.1μg/ml CsA同时加入K562细胞系中,60min时99Tcm-MIBI摄取率为0.303±0.076,增加率为183%。接近单独应用Ver（10μg/ml）或单独应用CsA（0.4μg/ml）。结论 99Tcm-MIBI细胞内摄取变化可评价逆转剂作用下Pgp的功能变化,低剂量逆转剂联合应用能达到与单一较大剂量应用逆转剂相似的效果,为临床逆转Pgp介导的多药耐药提示新的信息。     

辐射增敏剂作用下SGC7901细胞内GSH含量变化与受照射剂量关系的初步研究

研究了辐射增敏剂丁胱亚磺酰亚胺（BSO）作用下胃腺癌细胞（SGC）内谷胱甘肽（GSH）含量与照射剂量间的关系。实验观察到胃癌细胞内GSH含量有呈照射剂量依赖性升高的趋势，而用BSO预处理后的细胞，GSH含量迅速降低且变化不受照射剂量的影响。     

肿瘤多细胞球体在放射治疗基础研究中的应用和意义

自70年代以来,肿瘤多细胞球体模型已被广泛应用于肿瘤研究中,用这种体外模型可以研究实体肿瘤的特性和抗肿瘤治疗,尤其是放射治疗的效应。本文结合作者在应用这种球体模型实验中的体会,对它在放射基础研究中应用和意义进行了综合性介绍。肿瘤多细胞球体在组织学和生长特性方面和实体肿瘤相似,例如随着体积增长有乏氧细胞和或坏死区存在,生长比率降低。 本文介绍了应用这种模型时多种观察指标,包括在肿瘤研究中评定放射效应的技术。例如体积变化、组织学、细胞存活、细胞活力、细胞丢失和细胞动力学等。肿瘤多细胞球体内细胞之间的密切联系具有累积和修复放射损伤的能力。表现为对放射的抗性比单层细胞高。在某种程度上肿瘤多细胞球体是一种界于体内和体外单层细胞之间的简单、周期短、而又经济的实验模型。     

青蒿素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435辐照后微核的影响研究

本实验主要分析青蒿素作用后p53功能突变的人乳腺癌细胞MDA-MB-435微核的变化。通过MTT法测定不同药物浓度及不同药物作用时间对细胞毒性的影响,通过胞质分裂阻滞法（CB法）计数青蒿素作用联合不同剂量^60Coγ射线照射后细胞的微核率（Micronucleus frequency,MNF）和微核细胞率（Micronucleus cell frequency,MNCF）,将青蒿素作用的细胞与单纯照射细胞的微核率和微核细胞率的统计分析结果进行比较。实验结果表明,青蒿素对实验细胞MDA—MB-435毒性较小,在实验药物浓度为200μmol／L,作用时间为24h时,将CB微核法得到的数据进行回归拟合可以得到药物作用及未经药物作用的剂量效应曲线,比较两组曲线,青蒿素作用组的微核率及微核细胞率明显高于单纯照射细胞（p〉0．05）。     

四环素衍生物CMT-8对人类宫颈癌细胞HeLa的生长及其放射敏感性的影响

探讨四环素衍生物CMT-8对人宫颈癌细胞HeLa的生长以及放射增敏性的影响。分别采用MTT法、伤口愈合实验、细胞粘附实验、流式细胞术和Western blot法测定CMT-8对HeLa细胞生长、迁移、粘附、周期的影响及其相关蛋白表达水平的改变。实验结果表明,CMT-8可有效抑制HeLa细胞的生长,降低其迁移、粘附能力,引起细胞G0/G1期阻滞、下调周期蛋白Cyclin D和Cyclin E的表达水平。CMT-8联合X射线能明显抑制细胞的生长,下调DNA损伤修复蛋白Ku70和DNA-PKcs的表达水平。这些发现提示,CMT-8作为人宫颈癌抗肿瘤新药可能是与其抑制细胞生长、细胞周期调控和抗迁移有关。另外,CMT-8在低剂量下可以提高人宫颈癌细胞的放射敏感性,与其调节DNA损伤修复蛋白的表达水平有关。