Hsp27高表达和低表达乳腺癌细胞的比较蛋白质组学研究

以Hsp27高表达的乳腺癌细胞株MCF-7为亲本,分别通过导入靶向Hsp27的shRNA敲减载体和对照空载体的方法,构建了Hsp27敲减细胞株和相应对照细胞株.然后对对照细胞株与Hsp27敲减细胞株3B2进行了比较蛋白质组学研究,结果发现在双向凝胶电泳的差异蛋白质表达谱上,共有7个明显差异蛋白点,经过MALDI-TOF-TOF质谱分析和数据库搜索,共鉴定出了4个差异蛋白点,它们分别是Hsp27和另外2种差异表达的蛋白OVCA2和PYRG2.本实验构建了Hsp27敲减的稳定细胞模型并为进一步了解Hsp27的生物学功能提供了新的线索.     

人C-反应蛋白(CRP)基因的克隆及表达研究

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)参与人体炎症反应,是临床诊断中的重要检测指标。利用家蚕杆状病毒表达系统构建重组人CRP病毒vBmHis-CRP,接种家蚕五龄幼虫表达重组人CRP蛋白。利用自制抗CRP血清Western Blot检测重组蛋白得到目的条带,纯化后BCA法测定蛋白含量为30μg/mL,质谱检测进一步确定该蛋白为目的蛋白。这为家蚕生物反应器规模化制备重组人CRP蛋白打下了基础,为解决临床CRP相关炎症反应快速诊断试剂盒中标准抗原的来源问题提供了依据。     

CTB-InsB融合基因在大肠杆菌中的表达研究

构建了一种霍乱毒素B亚基（CTB）与人胰岛素B链（InsB）的融合基因，并克隆入表达载体pGEX-4T-1中，命名为pGEX—CTB-InsB。该融合蛋白在大肠杆菌中的表达产物以包涵体形式存在，分子量约为43kDa。包涵体经溶解和复性后，使用GSTrapFF亲和层析柱纯化得到融合蛋白。经SDS-PAGE和Western免疫印迹分析证实纯化蛋白为重组目的蛋白。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因定向进化研究

为得到具有催化活性的重组亚油酸异构酶,对嗜酸乳杆菌AS1.1854菌株亚油酸异构酶基因进行体外定向进化.经过两轮连续易错PCR扩增及一轮DNA改组获得了突变基因片段,并克隆到pET30a质粒载体上,转化大肠杆菌,构建了该酶的基因突变文库.经IPTG诱导表达后筛选出一株重组菌,可表达可溶性重组酶蛋白,经紫外分光光度计法测定,重组酶蛋白活力为8.2 U.     

中国明对虾溶菌酶点突变基因的原核表达

为解决中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)溶菌酶成熟肽(FcLys)可溶性问题,构建了点突变基因的原核表达质粒,并进行重组表达。以已构建的带有FcLys目的基因的重组克隆质粒为模板扩增FcLys点突变(FcLysM)的基因片段,将该对虾溶菌酶成熟肽序列的N端和C端中含有几个疏水性氨基酸经点突变改为亲水性氨基酸,但不改变其活性中心和二硫键的形成。将FcLysM的基因片段与表达载体连接并转化,制得基因工程菌pET-39b(+)-FcLysM/Rosetta(DE3)。通过基因测序方法验证该重组表达质粒读码框的准确性以及FcLysM目的基因序列的正确性。该工程菌表达后在SDS-PAGE结果显示,表达产物为分子质量约为43ku的融合蛋白FcLysM。进一步研究分析证明,该重组点突变蛋白的可溶性表达量高于非突变的对虾溶菌酶表达量。     

HPV16 E6基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达HPV16 E6重组蛋白.利用自行构建的重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6,经IPTG诱导表达HPV16 E6重组蛋白.实验结果表明,重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6在大肠杆菌中经IPTG诱导成功表达出HPV16 E6重组蛋白.HPV16E6重组蛋白的制备为宫颈组织中HPV16型感染的早期诊断和宫颈癌治疗性疫苗的研制奠定了物质基础.     

重组精氨酸脱亚胺酶的制备工艺

研究了重组精氨酸脱亚胺酶(r ADIES)的30 L规模发酵、制备工艺及其生物学活性。将构建好的工程菌先进行摇瓶活化获得种子液,转入30 L发酵罐进行培养,用IPTG进行诱导表达;表达产物进行高压匀浆破菌、包涵体洗涤、溶解稀释复性后经DEAE阴离子交换层析柱和Butyl疏水层析柱纯化;通过SDS-PAGE和RP-HPLC等方法检测表达和纯度;用体外测活法检测活性。将工程菌进行放大培养并诱导表达,获得了相对分子质量在46 k Da的r ADIES。重组蛋白表达量占总蛋白的25%以上,经制备工艺获得的r ADIES纯度高于95%,酶活性为42IU。实验结果表明:该工艺具有可行性,可以获得较高活性的重组精氨酸脱亚胺酶。     

大肠杆菌中可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21及制备

为在大肠杆菌中高效、非融合、可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF-21),研究了纯化方法,以获得具有较高生物活性的rhFGF-21。全基因合成人成纤维细胞生长因子21cDNA序列,克隆进原核表达载体pET-3c,在转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中进行表达。表达产物经盐析、层析等方法纯化后,利用3T3-L1细胞鉴定其促葡萄糖摄取的生物学活性。结果表明:rhFGF-21在BL21(DE3)PlysS实现了高效、非融合、可溶性表达,目的蛋白占菌体总蛋白的20%左右;表达产物经纯化后,纯度可达95%以上;表达产物能够明显促进3T3-L1细胞对葡萄糖的吸收。该方法成功实现了rhFGF-21在大肠杆菌中高效可溶性表达。     

黑松银松素合成酶的cDNA克隆及表达研究

松萎蔫病是由松材线虫引起的一种危害性极大的森林病害,为研究黑松对松材线虫的抗性机制,本文利用RT-PCR技术对黑松体内经转录组分析获得的与银松素合成酶mRNA高相似度的序列进行扩增,获得了银松素合成酶cDNA,然后将此银松素合成酶基因(PSL)克隆到表达载体pET-15b上,构建了重组表达质粒pET-15b-PSL,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)后构建工程菌,通过IPTG诱导,工程菌高效表达重组蛋白,经Ni 2+螯合柱亲和层析得到了纯化重组银松素合成酶。该研究为了解黑松银松素合成酶的功能及松萎蔫病抗性松树的培育奠定了基础。     

携带Herceptin与MICA胞外结构域融合基因的重组腺病毒的构建及鉴定

通过构建能表达抗体Herceptin与MICA胞外结构域的融合蛋白的重组腺病毒,为进一步联合NK细胞的治疗研究奠定基础.采用Overlap-PCR的方法获得Herceptin与MICA胞外结构域的融合基因,并将融合基因连接到载体pDC339上.接着再利用酶切及PCR方法鉴定载体及重组病毒基因的正确性,并通过ELISA和Westem Blot检测融合蛋白的表达情况,最后经间接免疫荧光分析(IFA)检测融合蛋白的结合特性.构建的载体酶切后经电泳鉴定证实构建成功,重组病毒DNA的PCR显示病毒携带了Herceptin的轻链基因、重链基因及MICA胞外结构域的基因;ELISA和Western Blot证实重组腺病毒成功地表达出了目的融合蛋白;IFA实验表明融合蛋白能与SK-OV-3细胞表面的Her-2受体特异性地结合.最后成功地构建了能表达具有正常结合特性的抗体Herceptin与MICA胞外结构域的融合蛋白的重组腺病毒,为之后与NK细胞的联合治疗研究奠定基础.     

基于FCM和SSA–ELM的超短期风功率预测

针对风电输出功率波动大、随机性强等特征引起风功率难以预测的问题,提出了基于模糊C均值聚类(Fuzzy C-Means,FCM)选取相似日和樽海鞘群算法优化极限学习机（SSA-ELM）的风电场超短期风功率预测模型。首先,采用FCM数据聚类方法,筛选出与预测日相关性较大的历史相似日,将其风速、温度、风向、气压等影响风功率的主要因素组成多输入样本集合;其次,通过训练集在训练过程中确定的网络参数,利用樽海鞘群算法在迭代过程中的充分探索和开发,优化极限学习机的输入权值矩阵及隐含层偏差值,建立樽海鞘群算法优化极限学习机的超短期风功率预测模型;最后,根据超短期风电并网的相关规定,针对河南省某风电场的实际数据,分别从基于相似日超短期预测、具有代表性的四季预测和滚动误差三方面进行仿真实验,与传统极限学习机（ELM）和BP神经网络模型进行对比分析,结果表明本文提出的模型收敛速度快,预测精度较高。证明了基于FCM和SSA-ELM的超短期风功率预测模型具有良好的追踪性和泛化性。     

高有效位数的加,减,乘,除,乘方和阶乘运算法

采用面向对象的Ｃ＋＋语言,给出了高有效位数值的类定义,并给出了该数值的加、减、乘,除,乘方和阶乘的运算程序。     

ICP—AES法直接测定钢中铅、锡、砷、锑和铋

采用ICP—AES法直接测定钢中微量铅、锡、砷、锑和铋的含量,多组分光谱拟合（MSF）法有效消除钢中共存元素对测定结果的干扰。5种元素的检出限分别为Pb14．1μg/L,Sn16．8μg/L,As20．2μg／L,Sb17．5μg/L,Bi15．2μg/L,方法准确,快速简便,稳定性好。     

变化、放弃与机会

前几年,一本名为《谁动了我的奶酪》的书格外畅销.这本书讲述的是一个简单的寓言故事：四只小老鼠在别人动了他们赖以生存的奶酪之后,分别采取了不同的态度.这本书的用意是让人以积极的心态正视工作和生活中的变化,在变化中创造新生活.此书在企业界备受重视和欢迎,国内一些著名的企业家还多次召开研讨会谈自己的读书体会。     

人·环境·空间——都市中的公共艺术设计

围绕都市中公共开放空间现象、公共艺术的特点 ,来思考公共艺术与人、自然环境等的关系 .     

燕麦淀粉的提取与纯化

燕麦（Avena sativa L.）是禾本科、燕麦属一年生草本植物,淀粉是燕麦中含量最丰富的成分,约占籽粒干重的50%~65%。目前,提取燕麦淀粉的常用方法主要有碱提取法、酶提取法和水提取法。燕麦淀粉独特的结构特点及其具有的低热稳定性、糊状透明度、抗剪切性和高黏度性质,直接影响着燕麦产品的热稳定性和黏弹性等性质。通过热（蒸制、烘烤、过热蒸汽、微波、挤压膨化、红外、蒸汽爆破等）和非热（脉冲电场、低温等离子体、高静水压力、超声波等）处理方法来改性燕麦淀粉,能够改善其水化特性以及产品的感官和食用品质,这将大大提升燕麦淀粉的市场竞争力,并有望将燕麦淀粉作为各种应用淀粉的独特来源。目前对于燕麦淀粉物理改性的机制了解还比较有限,需要进行更多的研究,从分子结构、理化性质等方面入手,探究燕麦淀粉物理改性的机制。本文综述了目前在燕麦淀粉的提取、结构、理化性质和物理改性方面的最新进展,以期推动燕麦基食品的开发利用。     

纳米材料的结构、性能、制备及其应用前景

纳米材料及其制备技术是材料科学研究的一个新的领域。本文在归纳参考文献的基础上介绍了纳米晶材料的结构特征，制备方法以及在材料科学中的应用前景。