毛云芝菌固体发酵产漆酶的分离纯化及酶学性质

作者对毛云芝菌利用桑叶和麸皮固体发酵所产漆酶进行了分离纯化,并研究了纯化后漆酶的酶学性质。将毛云芝菌固体发酵漆酶粗提液通过离心、过滤、大孔树脂脱色、硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose fast flow层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,结果得到电泳纯的漆酶,纯化倍数15.53,酶活回收率51.21%。用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量62 600;该酶反应的最适温度为50℃,在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中最适pH值为4.0,在醋酸缓冲液中最适pH值3.0;氧化ABTS的Km为0.093 mmol/L,对邻苯二酚的Km为3.71 mmol/L。     

中药药渣发酵生产毛云芝菌漆酶培养基的工艺研究

为充分利用中药药渣,该研究探索不同中药药渣对毛云芝菌漆酶产酶效果的影响。结果表明:大黄、麻黄和芍药药渣可有效促进毛云芝菌漆酶的产量。在选择大黄药渣的基础上,优化药渣培养基的组成为麸皮3%,蛋白胨0.2%,大黄药渣12%,MgSO43g/L,KH2PO43g/L,pH值5.0,该培养基产酶酶活可达到4 828.2 U/mL,约是优化前培养基产酶酶活的1.4倍。     

响应面法优化毛云芝菌产漆酶的培养条件研究

研究了影响毛云芝菌产漆酶的培养条件,通过单因素实验选取试验各因素的水平,根据Box-Benhnken试验设计原理,进行响应面回归分析,以漆酶酶活为响应值,确定了影响漆酶产量的各因素的水平,结合验证实验结果得到其最佳的培养条件为接种量8.2 %、装液量30.8%、摇床转速141 r/min.     

鸭血浆胆碱酯酶的分离纯化和性质的研究

将鸭血浆用0．2mol／L pH7．2磷酸盐缓冲溶液等体积稀释后，以硫酸铵为盐析剂进行二次盐析、再经DEAE-52离了交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析对胆碱酯酶进行分离纯化，可获得电泳纯的胆碱酯酶，纯化倍数为278．5倍，酶活回收为17．8％。实验表明，该酶的最适温度为37℃，最适pH为7．8，有过量底物抑制现象。     

毛柄金钱菌漆酶的纯化与理化性质研究

本文通过盐析、超滤和DEAE-Sephadex A-25离子交换层析得到毛柄金钱菌漆酶,并对其理化性质进行了研究,考察了毛柄金钱菌漆酶最适宜反应温度和pH值、热稳定性和pH值稳定性、反应动力学常数、耐溶剂性质以及金属离子对酶活的影响。实验结果表明:毛柄金钱菌漆酶在60℃时酶活达到最大,最适反应温度为60℃,低于70℃时具有较好的热稳定性;该酶最适pH为4.0,在pH 4.0~4.5表现出较强的稳定性;毛柄金钱菌漆酶氧化ABTS的Km值为1.58×10-4mmol/L;乙醇、丙酮和二氧六环作溶剂时对毛柄金钱菌漆酶活性具有较强的抑制作用;Zn2+和Cu2+对漆酶有激活作用,而Fe2+、Fe3+则有明显的抑制作用。     

发酵液中牛肉风味肽分离纯化方法的比较研究

使用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对重组酵母发酵液中一种牛肉风味肽（BMP）的稳定性进行了研究，并分别运用D301离子交换层析和Sephadex G-25凝胶过滤层析对其进行了分离纯化，最后利用RP-HPLC对目标肽进行分析检测。结果表明，在pH值为7．4条件下，发酵液中的目标肽于室温下放置0h-8h后仍呈现良好的稳定性。分离纯化结果显示，Sephadex G-25凝胶过滤层析的分离纯化效果优于D301离子交换层析，更适合于分离复杂体系发酵液中的风味肽。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化及酶学性质研究

研究采用DEAE-Sepharose F.F离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析对嗜酸乳杆菌发酵液中的亚油酸异构酶进行了分离纯化,酶回收率为6.39,纯化倍数为37.9倍。经研究确定酶最适pH为6.0,最适反应温度为30℃。在pH 6~8之间,亚油酸异构酶可保持较高活力,超出此范围,酶活力明显下降;该酶对高温敏感,50℃保温2 h,酶活力即变得很低;亚油酸异构酶受底物LA的抑制,酶反应最适LA浓度为1.5×10-5g/mL,过高LA则对酶产生抑制作用。     

韦伯灵芝漆酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级盐析、透析、聚乙二醇浓缩和高效液相色谱柱层析从韦伯灵芝TZC-1 发酵液中分离纯化得到电泳纯漆酶,其纯化倍数为37.1 倍,酶活性回收率为21.3%。活性-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)结果表明该漆酶由一种同工酶组成,纯化漆酶经SDS-PAGE 检测显示为单一条带,其分子质量约为40kD。该漆酶催化底物ABTS 的最适反应温度为50～60℃,最适反应pH 值为4.6,在60℃以下和pH3.0～5.0 范围内保持稳定,以ABTS为底物的表观Km 值为13.8μmol/L。Fe2+ 完全抑制酶活,Al3+ 和Mn2+ 对该漆酶也有明显抑制作用,Hg+、Cu2+ 和Mg2+ 对该酶有明显激活作用,而Zn2+、Ba2+ 及K+ 对该酶活性影响不大。     

毛云芝菌产漆酶液体培养条件的优化

探索了不同的培养条件下毛云芝菌产漆酶的情况,发现该菌漆酶属于组成型漆酶,其酶活力高,产酶周期短,酶的合成与菌体生长没有明显相关性;以漆酶的酶活为指标,采用正交试验设计方法对毛云芝菌液体培养的摇瓶生长条件进行了优化研究.结果表明:优化培养基的组成(质量分数)为麸皮3%,蛋白胨0.2%,牛肉膏0.3%,MgSO4·7H2O 0.05%, KH2PO4 0.3%; TE 6%(体积分数),VB1 20 mg/L;自来水,pH自然.该营养条件下的酶活为1 668 U/mL,约是优化前培养基酶活的16倍,为工业化生产提供了一定的理论依据.     

中心组合试验优化毛云芝菌固体发酵培养条件

为了优化毛云芝菌固体发酵培养条件,采用中心组合试验设计方法,研究初始加水量、接种量、培养温度及其交互作用对漆酶活力的影响.应用SAS软件和响应面分析相结合的方法,模拟得到回归方程的预测模型和可信度,并通过岭脊分析得到最佳的发酵条件为:装量为10 g干料的250 mL三角瓶中加蒸馏水38 mL,种子液4.3 mL,培养温度26.6℃.该条件下酶活达到1.4778×104 U,约是优化培养条件前酶活的11.75倍.     

云芝漆酶粗酶液降解2-氯苯酚的研究

研究了影响云芝液培养所产的漆酶粗酶液降解2-氯苯酚的主要因素(如降解时间、酶用量、2-氯苯酚浓度、pH值、温度),并对粗酶液和经Sephadex G-75初步纯化后的酶液的降解效果进行了对比.结果表明,在适宜的条件下,漆酶粗酶液可有效降解2-氯苯酚.一般而言,一定的反应体系下,2-氯苯酚的降解率随酶剂量的增加和时间的延长而增加,但在较低的酶用量下(＜0.20U/mL),延长反应时间并不能得到较高的降解率.在相同酶用量条件下,氯酚的平均降解速率随底物浓度的增加而增加,浓度小于3000 mg/L时,对漆酶没有抑制作用,但总降解率却随之下降.粗酶液降解2-氯苯酚时较佳的pH值和温度范围分别为5.0～7.0和45～70℃.经过初步纯化后的酶液,其降解2-氯苯酚的效率反而略低于粗酶液的降解效率.     

云芝用于糖蜜废水脱色处理的研究

对云芝进行糖蜜废水脱色处理的培养条件进行了研究.结果表明,摇瓶脱色培养最佳条件为:粗玉米粉15g/L;无需添加额外的氮源、磷源、镁源,过量的氮源反而会抑制脱色作用;最佳的培养温度、初始pH、装液量、转速以及接种量分别为:30℃、5.0、20%、150 r/min和2%;锰离子、铜离子和木质素的结构类似物(如单宁酸、愈创木酚和苯酚)有促进脱色作用;而添加表面活性剂吐温-80不仅能大大提高脱色率,而且能明显提高菌体量.     

桑黄漆酶发酵条件的优化及其分离纯化

本文利用单因素和正交试验分析方法,研究了温度、培养基初始pH值、装液量和摇床转速等条件对漆酶产量的影响。采用盐析、透析、离子交换层析（IEC）、葡聚糖凝胶层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等技术将发酵得到的漆酶进行分离纯化。结果表明：最佳工艺条件是温度28℃,培养基初pH为5.8,摇床转速180r/min,装液量130mL/500mL。对发酵所得粗漆酶液进行了分离纯化,最终漆酶的回收率为24.4%,纯化倍数为8.3。纯化后的漆酶经SDS-PAGE检测,证实为单一蛋白,并与标准蛋白比较计算得到此漆酶的表观分子量为约为69.3KD。     

漆酶产生菌的原生质体诱变选育

利用紫外线对杂色云芝原生质体进行诱变,经原生质体再生培养和筛选再生菌株,获得一株高产漆酶突变株,突变株比出发菌株的漆酶酶活提高了54.32%.而且,突变株继代遗传稳定,说明利用原生质体紫外诱变育种是获得漆酶高产菌的一种有效方法.     

Laccase and Mn-peroxidase production by Coriolus hirsutus strain 075 in a jar fermentor

The white-rot fungus Coriolus hirsutus strain 075 excretes considerable amounts of laccase and Mn-peroxidase into culture broth over a brief production time. The effects of agitation speed, temperature, aeration and inoculum amount on laccase production using a 10-l fermentor were studied. The optimum fermentation conditions were a 15% inoculum, an aeration rate of 0.88 vvm, an agitation speed of 160 rpm, and a temperature of 28 degrees C. By optimizing the fermentation conditions, the laccase activity reached 80+/-3 U/ml in 3 d and the purified enzyme output was 30 mg/l. The laccase and Mn-peroxidase were purified by means of isoelectrofocusing and ion-exchange chromatography. The pIs of the laccase isoenzymes were 4.2 and 4.5. Mn-peroxidase had only one isoenzyme with a pI of 3.2. The optimum pH was 4.5 for laccase with syringaldazine as the substrate and 5.0-5.3 for Mn-peroxidase with Mn(+2) and H2O2 as the substrates. The laccase and Mn-peroxidase retained 50% of their activities at 50 degrees C after 55 h and 12 h of incubation time, respectively.     

云芝菌固态发酵产漆酶及其对二氯酚脱氯作用的研究

利用云芝菌固态发酵产漆酶,当玉米皮和麸皮的比例为6:4,培养基含水量65%,接种量10%,培养温度30℃时,发酵10 d,漆酶活力可达到1.51×10~5U/g(干曲)。利用云芝漆酶对2,4-二氯酚进行脱氯反应,其适宜温度为35℃,pH 6.0,当底物浓度为1 mmol/L时,反应8 h,2,4-二氯酚的去除率达到95%以上。