里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及酶学性质

采用冻干浓缩,硫酸铵盐析,Sephacryl S-200 High Resolution凝胶柱层析,HiTrap Desalting凝胶柱脱盐,HiTrapTMSP(HP)离子柱层析对里氏木霉EIM-30的发酵液进行分离纯化,获得两个纯化的木聚糖酶组分,分别命名为Xylanase A和Xylanase B。纯化倍数分别为3.58和3.29,回收率分别为7.02%和28.29%。SDS-PAGE结果均为单一条带,分子质量分别为29.6 ku和20.9 ku。酶学性质研究结果表明:Xylanase A和Xylanase B的最适反应温度分别为55℃和60℃;温度低于50℃,两种酶的稳定性都很好;最适pH一样,都为5.0;pH稳定范围也一样,都为3.5⁷.0;Mn2+、Tris对Xylanase A有激活作用,Fe2+、Cu2+、SDS则对该酶有抑制作用;Mn2+对Xylanase B有激活作用,Zn2+、Ca2+、Fe2+、Cu2+、Ba2+、Mg2+及SDS则对该酶有抑制作用。     

巨大芽孢杆菌产胞外核糖核酸酶的分离纯化及部分酶学性质研究

巨大芽孢杆菌发酵液经硫酸铵沉淀、CM-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,纯化得到核糖核酸酶电泳纯品,并对其性质进行研究。该酶比活力为54272.27U/mg,回收率为11.37%,纯化倍数为606.67倍。该酶分子质量约为33.3kD,最适温度为52.5℃,最适pH值为8.5,在20～40℃以及pH6.0～7.0范围内稳定性较好。Fe2+、Cu2+、SDS、抗坏血酸和草酸对该酶活性有抑制作用。     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化,获得接近电泳纯蛋白.通过SDS PAGE测得相对分子质量为24500.木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白,含有质量分数20.24%的糖.O 糖基化能增加木聚糖酶的活性,O 和N 糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性.5min反应,草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高.在此条件下,该酶的Km值为3.87mg/mL,Vmax为1250IU/mg.纯酶的稳定pH值为6.54,57℃时半衰期为1h.     

木聚糖酶产生菌——类芽孢杆菌的筛选及其酶学性质研究

从富舍半纤维素的土壤中分离、纯化木聚糖酶的高产细菌.并对其酶学性质进行研究.采用平板法及DNS法分离筛选菌株,利用16S rDNA鉴定菌种;研究不同pH、温度、金属离子等因素对木聚糖酶酶学性质的影响.最终筛选出1株木聚糖酶高产细菌,经鉴定其为类芽孢杆菌.对其酶学性质的研究表明.其最适温度50 ℃,最适pH 5.0;在pH 4.0-10.0、温度20～50℃之间有较好的稳定性,其野生型菌株的木聚糖酶活力可达到122.77 IU.     

短短芽孢杆菌几丁质酶的分离纯化及酶学性质

探讨来源于短短芽孢杆菌FM4B的几丁质酶（chitinase）分离纯化过程及其性质。菌株FM4B摇瓶发酵液经过离心、乙醇分级沉淀及葡聚糖凝胶G-100层析纯化,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳确定其分子质量。结果获得几丁质酶纯品,酶的纯化倍数为7.19,酶活回收率为30.6%,分子质量为66 kD;酶活力在pH 5.0～9.0和80 ℃以下稳定,最适pH值为6.0,最适温度为50 ℃;Cu2+、Hg2+、Pb2+、Co2+以及Zn2+对该酶有强烈的抑制作用,Mg2+ 和Ca2+对该酶的活力具有一定的促进作用;该几丁质酶对多种霉菌有显著的抑菌效果。菌株FM4B分泌的几丁质酶稳定性好,且对多种霉菌抑制效果明显,具有较高的潜在利用价值。     

耐热解淀粉芽孢杆菌BA-DES4产纤维素酶的分离纯化及酶学性质

目的：本研究以一株产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌BA-DES4为材料,纯化并研究了其纤维素酶的酶学性质。方法：研究采用硫酸铵分级沉淀及SephadexG-75凝胶过滤层析方式对其所产纤维素酶进行分离纯化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）确定其分子量,并对纯化后纤维素酶的酶液进行酶学性质研究。结果表明：发酵液中分离纯化获得纤维素酶系组分（内切葡聚糖酶）,对纯化的电泳内切葡聚糖酶进行酶活测定,其比活力为51.08 U/mg。发现其分子量为22.4 kDa;初步酶学性质研究表明：该酶的最适反应温度和最适pH分别为65℃和6.0,且在pH5.0～7.0和温度55～65℃下稳定性较高;Mn2+对纤维素酶活力激活作用较为显著,Cu2+的抑制作用最大。结论：该菌株可作为产内切葡聚糖酶的潜在菌株,内切葡聚糖酶可在Mn2+、Fe2+的作用下促进酶活力,同时在高温及酸性环境中发挥作用,能够参与高效降解高温酸性环境中的纤维素,提高生产率,同时将分解成的葡萄糖供发酵使用,具有应用高温大曲发酵酒生产的潜力,为该酶的进一步研究奠定了基础。     

枯草芽孢杆菌纳豆激酶分离纯化及酶学性质

利用30%～70%饱和度的硫酸铵沉淀,Sephadex G-50凝胶过滤层析对浅盘发酵纳豆激酶进行分离纯化并对其酶学性质进行初步研究。以纤维平板法测定纳豆激酶活力,SDS-PAGE检验纯化效果。结果表明:纯化后纳豆激酶为电泳纯,分子质量约27.518kD,纯化倍数和酶活回收率分别为19和42.1%,纳豆激酶最适温度为50℃,最适宜pH值为8.0。     

苏云金芽孢杆菌精氨酸酶的纯化及酶学性质研究

从L-精氨酸诱导的苏云金芽孢杆菌SK20.001中分离纯化出SDS-PAGE电泳纯的精氨酸酶[EC3.5.3.1]。纯化酶的比活力为589.2U/mg,纯化过程酶的回收率为22.4%。酶经过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到亚基的相对分子量约31000u。该酶的最适pH为9.8,最适温度为40℃,并且Mn2+显示出对酶有最强的激活作用。通过Lineweaver-Burk双倒数作图得到的精氨酸酶Km为15.2mmol/L。      

枯草芽孢杆菌纤溶酶的纯化及性质研究

以从牛肉酱中筛选的1株高产纤溶酶的枯草芽孢杆菌为材料,进行发酵产酶。其发酵液经过硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、C M SepharoseCL-6B离子交换层析和电泳制备,得到电泳纯的枯草芽孢杆菌纤溶酶;其分子质量为32.5ku;pI10.9～11.8;具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用;胰蛋白酶对此酶无降解作用,对其纤溶活性无影响;该酶在pH4.0～13.0稳定,对温度的适应范围较广。     

芽孢杆菌碱性蛋白酶的沉淀分离特性和酶学性质研究

土壤中筛选获得1株产碱性蛋白酶的芽孢杆菌.该蛋白酶发酵16 h达到产酶高峰,蛋白酶热稳定性较好,50℃条件下处理50 min,酶活性残留86% ,最适作用pH值7.7,丙酮、PEG等可有效沉淀蛋白酶,(NH4)2SO4在5℃、pH9.0条件下可沉淀分离蛋白酶,回收率达95%.     

一株高产木聚糖酶菌株的筛选鉴定及酶学特性研究

以木聚糖为唯一碳源,在富集培养基的基础上,通过初筛和摇瓶复筛,筛选到一株高产木聚糖酶的菌株RX-9,对菌株RX-9进行菌落形态、生理生化实验及16S rRNA序列遗传分析,该菌株的序列与Enterbacter(肠杆菌属)的多株菌具有99%以上的同源性,将该菌株归属为肠杆菌属(Enterbacter),命名为Enterbacter RX-9。对菌株所产木聚糖酶的酶学特性进行研究,发现该菌株所产的木聚糖酶在100 ℃下保温30 min,其酶活力仍达到2310.03 U/mL;当pH在7.5~9.5之间,木聚糖酶的活性基本稳定在3200 U/mL以上,表明该酶具有较好的热稳定性和pH稳定性。     

樟绒枝霉中一种低分子量木聚糖酶的纯化及性质研究

本文研究了樟绒枝霉（Malbranchea cinnamonmea）S168中一种低分子量木聚糖酶（McXyn25）的纯化和酶学性质。采用硫酸铵沉淀和DEAE-52阴离子柱层析两步纯化,得到电泳级纯酶,分子量为25ku。该酶的最适pH为8.0,在pH 4.5¹1.0范围内稳定;最适温度为65℃,在60℃以下具有较高的稳定性。McXyn25表现出严格的底物特异性,在纸浆漂白方面具有较好的应用前景。此外,McXyn25能够水解木聚糖产生低聚木糖,且无木糖产生,说明该酶适合应用于低聚木糖生产。      

木聚糖酶的研究进展

木聚糖是仅次于纤维素的第二丰富的可再生资源,通过筛选出产木聚糖酶的菌株,利用基因工程技术,将木聚糖酶基因进行异源表达,提高木聚糖酶产量。该文综述了菌株产生的木聚糖酶酶学性质,并对酶学性质进行改善使木聚糖酶更符合应用的条件,同时研究木聚糖酶分离纯化的步骤,来提高木聚糖酶的酶活。文章重点介绍了木聚糖酶的产生菌和木聚糖酶在基因工程技术等方面研究进展,并对木聚糖酶的分离纯化方法做了简要地介绍。     

嗜热真菌发酵产木聚糖酶培养基的优化及部分酶学性质的研究

采用响应面法对嗜热真菌发酵产木聚糖酶的培养基进行优化以及对该酶液的基本性质进行研究。首先对初始培养基中的8种影响因素进行Plackett-Burman设计,筛选出3种重要影响因素,即玉米芯、尿素和KH2PO4;再利用最陡爬坡实验为中心组合实验确定最大响应区间,最后经响应面分析获得最优化结果:玉米芯浓度为4.570%（w/v）,尿素浓度为1.797%（w/v）,KH2PO4浓度为0.497%（w/v）,酶活提高了18%。该酶对玉米芯为底物的专一性较好,最适酶促反应温度为65℃且在该温度下较稳定,最适反应pH为6.8,并且pH稳定性较好。      

黑木耳酪氨酸酶的分离纯化与酶学性质研究

本文分离纯化了黑木耳酪氨酸酶,并对酶学性质进行了研究。采用经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100和DEAE-Sepharose-FF柱层析对粗酶液进行分离纯化,得到电泳纯的黑木耳酪氨酸酶,比活力提高了21.43倍,酶活回收率为27.41%。该酶的酶学性质研究表明:蛋白亚基分子量为12.62ku;最适pH7.0,在中性和碱性条件下稳定;最适温度为40℃,50℃以下温度条件较为稳定;以酪氨酸为底物,米氏常数K m为5.88mmol/L,V max为64.10μmol/min。实验结果表明黑木耳酪氨酸酶具有其它酪氨酸酶相似的酶学特性。      

宇佐美曲霉木聚糖酶的纯化及其性质

宇佐美曲霉E001固态发酵成熟曲经水浸提、硫酸铵盐析、Phenyl-SepharoseCL-4B疏水层析、SephadexG-75凝胶过滤层析、DEAESepharosefastflow阴离子交换层析等提纯步骤,获得了比酶活3047IU/mg蛋白的纯木聚糖酶,其SDS-PAGE呈单一条带。用SDS-PAGE和凝胶过滤测得木聚糖酶的相对分子质量分别为23.2kD和23.0kD,表明该酶蛋白为单亚基。纯木聚糖酶的最适作用温度和pH值分别为50℃和4.6;以燕麦木聚糖为底物的酶动力学常数Km和Vmax值分别为5.27mg/ml和6494μmol/(min·mg);Ca2+、EDTA对酶有激活作用,而Sn2+、Pb2+、Fe3+有强烈的抑制作用。     

大肠杆菌工程菌产木聚糖酶工艺优化及酶学性质研究

对大肠杆菌工程菌产木聚糖酶的工艺进行优化,并对木聚糖酶的酶学性质进行研究。确定了提取工艺路线,即依次经过细胞破碎(高速珠磨法)、固液分离及除菌(中空纤维膜过滤)、超滤浓缩及烘干包衣步骤后得到肠溶木聚糖酶产品。该产品热稳定性好,在pH 2.5磷酸盐缓冲液中释放度为5.0%,在pH 5.5磷酸盐缓冲液中释放度为98.5%,产品外观光泽性好,能够很好地满足饲料酶市场要求。该木聚糖酶的最适pH值为6.4,最适温度为55℃。该酶具有较好的热稳定性,含水分17%的酶在90℃条件下2.5min仅失活13.6%。对木聚糖酶降解产物进行检测表明该木聚糖酶是一种内切酶。     

横梗霉产酯化酶的纯化及酶学性质

在研究浓香型白酒的过程中为了提高出酒率以及优质酒率可以从酯化酶的研究入手,酯化酶对提高出酒率和产优质酒有着积极的影响。本实验从五粮液大曲中经过严格的筛选得到一株高产酯化酶的菌株横梗霉。纯化分离横梗霉酯化酶发酵液使用盐析、透析、层析等步骤得到纯化的酯化酶,纯化提高到35.66倍,且具有2.54%的活性回收率,相对分子质量约为43000 u。通过酶学性质研究得出,酯化酶作用时的最佳温度是40℃,存在热敏感特性;60℃条件下反应30 min后有67.97%酶活残留;当p H为6～8时,酶活性较佳,当p H达到7.5时,最优;使用纯化后的酯化酶进行酶学性质研究发现金属离子对酯化酶有抑制作用的是Fe~(2+)、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)对酯化酶。得到结论该横梗霉所产的酯化酶有着高产、耐热性差、对热敏感、具有良好的耐碱性的性质,在使用过程中应该注意高温以及酸性环境对活性的影响。     

产木聚糖酶菌株的筛选、鉴定及其酶学性质研究

以木聚糖为唯一碳源,采用平板筛选和摇瓶发酵相结合的方法,从腐朽木头中分离、筛选到一株高产木聚糖酶菌株XE-13-1,根据菌株的形态特征,并结合18S rDNA序列分析,初步鉴定菌株XE-13-1为桔绿木霉（Trichoderma citrinoviride）。经测定,菌株XE-13-1所产木聚糖酶的最适反应温度为50 ℃,最适反应pH值7,具有较好的pH稳定性。在30 ℃、pH 5～10的条件下保温2 h,该酶仍具有78%以上的酶活力。Mg2+、Fe2+、K+、Zn2+对该酶具有明显的促进作用,Cu2+对该酶具有明显的抑制作用。酶学性质研究结果表明,该酶在工业应用上具有较好的前景。     

绿色木霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

针对绿色木霉AS3.3711产生的β-葡萄糖苷酶组分,先后运用包括乙酸铵沉淀、透析、Sephadex G-150葡聚糖凝胶柱层析在内的一系列分离纯化技术对该纤维素酶进行纯化,得到β-葡萄糖苷酶纯化组分,并对该酶的酶学性质进行研究。纯化后酶液的蛋白质量浓度为8.12 mg/mL、酶活力为4.08 U/mL,纯化倍数达到18.48,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定分子质量为66.0 kD。绿色木霉β-葡萄糖苷酶在酸性条件下稳定性良好,最适pH值为5.0;在温度60～70 ℃能长时间保持较高酶活力,最适反应温度为60 ℃。金属离子中,Ca2+、Mg2+、K+对绿色木霉AS3.3711 β-葡萄糖苷酶活力起到促进作用,Ca2+促进作用最强;而Zn2+、Fe3+对该酶有抑制作用,Ag+、Cu2+、Hg2+重金属离子使β-葡萄糖苷酶几乎丧失了全部活性。