交联壳聚糖固定化β-葡萄糖苷酶的稳定性研究

以戊二醛交联壳聚糖微球为载体通过共价连接反应固定化β-葡萄糖苷酶,研究固定化β-葡萄苷酶的稳定性。结果表明:固定化和游离β-葡萄糖苷酶的最适温度分别为706、5℃,最适pH分别为4.0、4.5。固定化β-葡萄苷酶贮存11周以后仍保持75.0%以上的相对活力,连续使用6批次后其相对活力仍保持在65.0%以上。固定化β-葡萄糖苷酶的高温、pH、贮存、操作稳定性明显高于游离酶。     

壳聚糖-戊二醛交联吸附法固定β-葡萄糖苷酶的研究

将杏仁来源的β-葡萄糖苷酶采用吸附法固定在戊二醛交联的壳聚糖上,对固定化条件进行优化,得到最佳条件:采用pH5.5浓度为1.5%的戊二醛在25℃水浴中振荡吸附4h,固定5Uβ-葡萄糖苷酶在每克干壳聚糖上,活力回收率达27.34%.     

黑曲霉3.316β-葡萄糖苷酶底物亲和性研究

β-葡萄糖苷酶属于纤维素酶系中的限速酶.为了研究酶解过程中底物与酶的连接方式和找到β-葡萄糖苷酶的最适底物,以来源于黑曲霉3.316(Aspergillus niger 3.316)的β-葡萄糖苷酶为研究对象,通过对3种底物的分子对接了解对接结构,并测定动力学参数进行试验验证.试验结果表明:3种底物与β-葡萄糖苷酶复合...     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶发酵培养基的优化

用响应面方法对黑曲霉(Aspergillusniger)ZJ1生产β-葡萄糖苷酶的培养基进行了优化。首先用部分因子设计对培养基组分稻草粉、麦麸、大麦粉、(NH4)2SO4及pH对β-葡萄糖苷酶活性的影响进行了评价,并找出主要影响因子为稻草粉和(NH4)2SO4,两者均为负影响,其它组分对酶活没有显著影响;再用最陡爬坡路径逼近最大响应区域;最后用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。经响应面分析获得的优化培养基组成(g/L)为:稻草粉7.02,麦麸16.65,大麦粉16.65,(NH4)2SO42.44,KH2PO40.5,MgSO4·7H2O0.5。经优化后,β-葡萄糖苷酶酶活性达到403.7U/mL。     

单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化

比较了海藻酸钠和壳聚糖两种栽体及不同固定化方法对单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化效果，结果表明以海藻酸钠为载体，采用交联-包埋-交联固定化方法的效果最佳。对共固定化条件进行了优化，可使单宁酶和β-葡萄糖苷酶的活力回收率分别达67．3％和46．0％。     

固定化β-葡萄糖苷酶转化甜菊糖的研究

用海藻酸钠作为包埋材料,对巨大芽孢杆菌所产β-葡萄糖苷酶进行了固定化,并对固定化酶转化甜菊糖的条件进行了研究。采用单因素分析方法探讨了温度、pH、时间、酶量、底物浓度和回收次数对转化的影响。结果表明,固定化酶在40℃、pH7.0、酶量20g/100mL时转化5d,可将1%甜菊糖(W/W)中的甜菊苷转化96.45%,固定化酶经4次重复利用后其转化活力仍能维持在原活性的57.77%,具有较好的稳定性和可回收性。该工艺操作简单、成本较低,在转化甜菊苷、提高莱鲍迪甙A纯度方面具有潜在的应用前景。     

利用黑曲霉β-葡萄糖苷酶改善葡萄酒的风味

文中研究了一株黑曲霉固态发酵生产β－葡萄糖苷酶的条件,当稻草粉：麦麸：水＝7：3：20,（NH4）2SO4浓度为1％时,31℃发酵60h,酶活最高达3214u／g干曲。用乙醇沉淀法提取酶,最终乙醇浓度为55％,最适沉淀pH4．6。将所得粗酶制剂加入干红葡萄酒,感官分析表明该酶对葡萄酒的增香有明显效果。     

黑曲霉产β-葡萄糖苷酶培养基的优化研究

利用黑曲（Aspergillus Niger）固态发酵生产β-葡萄糖苷酶,采用单因素实验对发酵培养基进行初步优化。结果表明,麦麸与稻草粉比例为1：1,固体（麸皮稻草粉）与液体（营养液）比例为1：2,营养液pH值是自然值（4．44）,氮源为2％硫酸铵,表面活性剂为0．1％吐温80,金属离子为1umol Mn^2＋,诱导物为0．1％鼠李糖,此备件下β-葡萄糖苷酶酶活较高。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的食品增香应用

将黑曲霉 β 葡萄糖苷酶应用于果汁、茶汁、果酒等的增香 ,经感官鉴评 ,样品间存在显著差异 ,显示较好增香效果。     

突变黑曲霉高产β-葡萄糖苷酶的培养基优化

对实验室筛选出产β- 葡萄糖苷酶的黑曲霉进行辐射诱变处理得到高产酶突变菌株,同时采用单因素和正交实验对黑曲霉产酶培养基进行优化研究.结果表明:经过X射线辐射诱变的黑曲霉产的β- 葡萄糖苷酶活力提高了18.86 U/mL.该菌株最适宜产酶的培养基为(质量分数%): 麸皮与玉米粉(1∶1)1.5、 (NH 4 ) 2 SO 4 0.15、 KH 2 PO 4 0.2、吐温80 0.1,所得酶活力最大可达到59.86 U/mL.     

吸附-交联法固定化脂肪酶的研究

用X-5大孔树脂和戊二醛进行吸附交联固定脂肪酶,确定固定化脂肪酶的工艺条件为35℃下,用0.05mol/L的磷酸二氢钾/氢氧化钠缓冲溶液,控制体系pH为7.0,树脂与酶的最佳质量比为9∶1,在170r/min的恒温摇床上振摇吸附3h,用0.5mL0.12mol/L戊二醛交联处理2h后得到活性较高的固定化脂肪酶,固定化脂肪酶活力为631.8U/g,活力回收率为62.4%,半衰期大于15d。      

吸附-交联法固定化脂肪酶的研究

用X-5大孔树脂和戊二醛进行吸附交联固定脂肪酶,确定固定化脂肪酶的工艺条件为35℃下,用0.05mol/L的磷酸二氢钾/氢氧化钠缓冲溶液,控制体系pH为7.0,树脂与酶的最佳质量比为9:1,在170r/min的恒温摇床上振摇吸附3h,用0.5mL 0.12mol/L戊二醛交联处理2h后得到活性较高的固定化脂肪酶,固定化脂肪酶活力为631.8U/g,活力回收率为62.4%,半衰期大于15d.     

壳聚糖/海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的研究

以壳聚糖、海藻酸钠为包埋材料,戊二醛为交联剂,固定化β-葡萄糖苷酶,研究了固定化条件与固定化酶的活力回收的关系。通过单因素和正交实验确定了最佳的固定化方法,即:壳聚糖（脱乙酰度=85%）浓度为1.5%、海藻酸钠浓度为2%、戊二醛浓度为1.0%、钙离子浓度为0.7mol/L、pH为5,固定化酶的活力回收达到83.8%。固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为5,该固定化酶重复使用5次后,其活力仍能保持70%。由于β-葡萄糖苷酶比较昂贵,采用固定化技术将其固定在载体上反复使用,可以达到简化工艺、降低成本的目的,作用于大豆异黄酮的水解方面具有潜在的应用前景。      

壳聚糖/海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的研究

以壳聚糖、海藻酸钠为包埋材料,戊二醛为交联剂,固定化β-葡萄糖苷酶,研究了固定化条件与固定化酶的活力回收的关系.通过单因素和正交实验确定了最佳的固定化方法,即:壳聚糖(脱乙酰度=85%)浓度为1.5%、海藻酸钠浓度为2%、戊二醛浓度为1.0%、钙离子浓度为0.7mol/L、pH为5,固定化酶的活力回收达到83.8%.固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为5,该固定化酶重复使用5次后,其活力仍能保持70%.由于β-葡萄糖苷酶比较昂贵,采用固定化技术将其固定在载体上反复使用,可以达到简化工艺、降低成本的目的,作用于大豆异黄酮的水解方面具有潜在的应用前景.     

交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及应用

交联酶聚集体(CLEAs)是一种新型的无载体固定化方法.本研究利用该法对来源于西梅籽的β-葡萄糖苷酶进行了固定化研究.优化了制备交联β-葡萄糖苷酶聚集体的条件,并探讨其在丙基β-D-葡萄糖苷合成中的应用.研究发现,最适的沉降剂及其比例、最适交联剂(戊二醛)浓度以及交联时间分别为正丙醇、2/1(V/V)、10 mmol/...     

交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及其性质

交联酶聚集体法是一种新型的无载体酶固定化方法。本实验用该法固定化黑曲霉β-葡萄糖苷酶,对其制备条件、结构特征、酶学性质进行了研究。结果表明,β-葡萄糖苷酶酶液在冰水浴中经90%的硫酸铵沉淀30min后,以5%戊二醛水溶液进行酶聚集体交联反应,可获得较高活性的交联酶聚集体,酶活回收率达75%,对对-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷作用的最适温度、最适pH值和Km值分别为60℃、pH4.0和4.61×10-3mol/L,与游离酶相比,表现更高的底物亲和力。将其用于大豆异黄酮活性苷元染料木素的合成,40min内对染料木苷转化率达到66%。     

黑曲霉产β-葡萄糖苷酶发酵培养基的优化研究

利用响应面方法对黑曲霉产β-葡萄糖苷酶的发酵培养基进行了优化,研究碳源、氮源、无机盐和pH对β-葡萄糖苷酶活力的影响.利用Box-Benhnken设计和响应面方法对碳源浓度、氮源浓度、初始pH进行试验分析.结果表明,β-葡萄糖苷酶的最佳发酵培养基为:麸皮2%,蛋白胨0.1%,KH2PO40.1%,初始pH6.0.经发酵后的β-葡萄糖苷酶活力达325.62 u/mL.     

橡胶籽β-葡萄糖苷酶固定化酶学性质的研究

采用戊二醛交联的方法将来源于橡胶籽的β-葡萄糖苷酶固定到壳聚糖球上,对比研究了固定化酶和游离酶的酶学性质。固定化后的β-葡萄糖苷酶最适温度为65℃,比游离酶提高了10℃;固定化酶热稳定性相比于游离酶,在55～70℃范围内有所提高;固定化酶的最适pH为6.0,游离酶的pH为5.5;固定化酶与游离酶相比,其耐酸耐碱性有所提高;金属离子对固定化酶的抑制作用与游离酶相比有所改变;葡萄糖对固定化酶的影响相对于游离酶更为明显;以p-NPG为底物,固定化酶的Km为3.5 mmol/L,游离酶的Km为1.75 mmol/L;固定化酶在操作和贮藏方面的性质都有明显提高。固定化酶相对游离酶部分酶学性质得到显著提高和改善,有效拓宽了其使用范围,提高了其应用价值。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

利用硫酸铵盐析、季氨乙基-琼脂糖凝胶FF（Q-Sepharose FF）离子交换层析、苯基-琼脂糖凝胶6 FF（Phenyl-Sepharose 6 FF）疏水层析和丁基-琼脂糖凝胶HP（Butyl-Sepharose HP）疏水层析对黑曲霉来源β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子质量,并对其酶学性质进行研究。结果表明,经分离纯化后得到分子质量约为116 kDa的β-葡萄糖苷酶,纯化倍数达到50.39倍,回收率为4.65%,比酶活为103.80 U/mg,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH值为5.0,在温度30～50 ℃,pH 2.0～8.0之间具有较好的稳定性。     

一株产β-葡萄糖苷酶黑曲霉菌株的分离筛选

从酿造砖曲中通过富集培养分离到一系列真菌单菌落,利用纤维二糖固体分离平板初筛、发酵产酶复筛,得到一株高产β-葡萄糖苷酶真菌菌株R16,根据该菌落形态学观察和分子生物学18S rDNA基因序列分析,将该菌株初步鉴定为黑曲霉菌.