壳聚糖季铵盐微球作为注射疫苗佐剂的安全性评价

以小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等为动物模型,对壳聚糖季铵盐微球作为注射疫苗佐剂进行安全性评价. 结果表明,小鼠急性毒性实验中50倍临床拟给药剂量(5.0 mg/只)下动物耐受性良好;大鼠重复毒性实验中即使50倍高剂量多次注射微球,动物各组织器官仍无病理性变化;异常毒性实验中小鼠给药后体征正常、体重明显增加,壳聚糖微球注射豚鼠后未见过敏反应及症状;家兔注射部位未发生肌肉组织溃烂、化脓等,佐剂未引起红细胞溶血.     

人用疫苗佐剂作用机制的研究进展

与传统疫苗相比,新一代疫苗特别是亚单位、合成疫苗,其免疫原性有所下降。使用佐剂增强这些疫苗的免疫原性,是加强疫苗保护性免疫效力的必要策略。佐剂的研究是现代亚单位疫苗发展的重要环节。迄今为止,除了铝佐剂,已有多个新型人用疫苗佐剂(MF59、AS04)批准进入临床应用。本文对人用疫苗佐剂的研究进展进行综述,重点对佐剂的作用机制进行阐述,并对疫苗佐剂的发展趋势进行展望。     

Al(OH)_3佐剂对不同抗原含量肠道病毒71型灭活疫苗免疫效果的影响

目的分析Al(OH)3佐剂对不同抗原含量肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗免疫效果的影响。方法将ICR小鼠随机分为9组,每组8只:常规剂量(160 EU/0.1 ml EV71)、1/2剂量(80 EU/0.1 ml EV71)、1/5剂量(32 EU/0.1 ml EV71)无佐剂及佐剂[Al(OH)31.0 mg/ml]疫苗组,并设佐剂、生理盐水及空白对照组,分别于0、28 d经肌肉免疫小鼠,分别于初免及加强免疫后28 d,经尾静脉采血,分离血清,采用体外微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞仪检测IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-10、IFNγ及TNF水平。结果初免后28 d,1/2剂量疫苗组中佐剂组小鼠血清抗体阳性率明显高于无佐剂疫苗组,差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间差异无统计学意义(P>0.05);加强免疫后28 d,常规剂量疫苗组中,佐剂及无佐剂组小鼠血清抗体阳性率均为100%,抗体GMT分别为1∶152.2和1∶139.6,1/2剂量疫苗组中,佐剂组小鼠血清中抗体GMT与无佐剂组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其余组间抗体阳性率及抗体GMT差异均无统计学意义(P>0.05)。常规剂量、1/2剂量、1/5剂量疫苗组,均诱导产生IL-6、IL-10、IFNγ及TNF 4种细胞因子,与佐剂对照组和生理盐水对照组相比,差异有统计学意义(P﹤0.05),未检测到IL-2、IL-4、IL-17A。结论 EV71灭活疫苗可诱导小鼠产生IL-6、IL-10、IFNγ、TNF 4种细胞因子及特异性的抗EV71抗体,加入佐剂后免疫效果更好。     

铝佐剂及佐剂吸附疫苗质量标准的探讨

<正>1926年,Glenny首次以铝盐吸附白喉类毒素,发现其免疫效果远超过液体类毒素,标志着铝佐剂出现,佐剂疫苗诞生。随着生物技术的迅速发展,重组亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗、核酸疫苗及合成肽疫苗等得到开发,这些疫苗抗原纯度高,相对分子质量小,疫苗的不良反应少,而这些抗原的免疫原性普遍较弱。为提高抗原的有效性,须在抗原中添加佐剂,以增强其诱导免疫反应能力,因此佐剂疫苗     

疫苗用氢氧化铝佐剂的研究现状

氢氧化铝佐剂是使用最为广泛的疫苗佐剂,在其使用过程中,疫苗抗原表位、缓冲体系及添加剂,在一定程度上会对氢氧化铝吸附疫苗的免疫效果造成影响。对氢氧化铝佐剂实行严格的质量控制,对确保佐剂效果及疫苗质量均具有非常重要的意义。本文主要对氢氧化铝佐剂在疫苗中的应用及研究现状作一综述。     

新疫苗佐剂的研究

<正>由于新一代疫苗抗原分子小，纯度高，免疫原性较弱，因此，研究既安全又有效的佐剂来增强疫苗的效力很有必要。近年来的研究表明，CpG寡核苷酸、MpL、QS21；和 MF59等佐剂均有较好的效果，尤其是它们能选择性地激发免疫应答。现将研究进展情况综述如下。     

壳聚糖微球及其与白油混合乳液对禽用新流二联疫苗佐剂的免疫效果

用不同粒径的壳聚糖季铵盐凝胶微球及其与白油的混合乳液吸附新城疫及禽流感灭活抗原,评价其对新流二联灭活疫苗的免疫增强效果.结果表明,吸附时间2 h、微球浓度2 mg/m L、微球粒径1μm为吸附新流二联灭活抗原的最佳条件,抗原吸附率达90%.免疫SPF鸡后,壳聚糖季铵盐微球及混合乳液均能显著提高新城疫及禽流感病毒特异性抗体效价,且混合乳液组显著优于微球组.与白油佐剂相比,壳聚糖季铵盐微球及混合乳液均能显著增强细胞免疫,淋巴细胞增殖水平为纯抗原组的1.5倍,具有用作禽类疫苗佐剂的巨大潜力.     

无佐剂狂犬病疫苗的反应及免疫效果观察

目的观察无佐剂狂犬病疫苗的反应及免疫效果。方法以巴斯德PV2061为生产毒株,以143代以内的Ve-ro细胞为培养基质,采用生物反应罐灌流方式培养,连续收获病毒液,经浓缩、灭活、纯化,制成无佐剂Vero细胞狂犬病纯化疫苗。作为受试疫苗,按暴露后程序接种,无佐剂疫苗502人(A组),进口疫苗100人(对照组B组),观察反应和免疫效果。结果所有接种对象均未出现局部和全身强副反应。首剂免疫后14d,A组与B组抗体阳转率均达100%,中和抗体几何平均滴度为5.2IU/ml和5.6IU/ml。第45天A组抗体几何平均滴度上升到9.5IU/ml,B组9.8IU/ml。结论无佐剂狂犬病疫苗具有良好的安全性和免疫原性。     

铝佐剂颗粒化乳液制备及其免疫效果研究

铝佐剂是我国唯一临床批准使用的疫苗佐剂，但其自身难以引发有效的细胞免疫应答，无法对机体产生综合性的保护，难以满足日益增长的疫苗佐剂需求。因此，如何合理化改造铝佐剂，保证疫苗佐剂的安全及高效诱导免疫反应是亟待解决的问题。本工作通过对商品化铝佐剂制备乳液超声条件的优化，最终研究表明当颗粒浓度为2.0 mg/mL，水相缓冲液选择蒸馏水且pH为7.0时能制备得到稳定的颗粒化乳液(Alum Particulate Emulsion, APE)，制备得到的乳液平均粒径为2723.7±435.3 nm，Zeta电位为+40.5±1.5 mV。离心发现此时体系中没有游离的铝佐剂，表明2.0 mg/mL是能稳定乳液的最小颗粒浓度。将乳液与抗原共混，测量抗原的吸附率，结果显示，抗原的吸附率接近100%，共聚焦的结果也验证了乳液对抗原的高吸附特性。当乳液与DC (Dendritic Cells)细胞共孵育，可以观察到乳液的内吞及溶酶体逃逸，而传统的铝佐剂无法实现。ELISpot结果显示，APE组脾细胞中分泌IFN-γ的T细胞数量比铝佐剂组增加300%左右。将铝佐剂通过颗粒化的策略制备得到APE以后，改变了佐剂增强抗原的免疫效果，显著提升了传统铝佐剂的细胞免疫效果。     

乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展

目前使用的乙型肝炎疫苗均为重组乙肝表面抗原(HBsAg)疫苗,疫苗中需添加免疫佐剂才能诱导机体产生有效的免疫应答。铝盐佐剂可显著增强HBsAg的体液免疫效果,但不能很好地诱导细胞免疫应答。研究发现,除铝佐剂之外,仍有多种物质具有免疫佐剂效应。本文就免疫刺激性佐剂、可生物降解的颗粒性佐剂、微生物来源的佐剂、植物来源的佐剂及其他类型的佐剂用于乙型肝炎疫苗的效果作一综述。     

皮卡狂犬病疫苗的实验研究

将灭活提纯狂犬病疫苗（IPRV）加皮卡佐剂,与单纯使用IPRV相比,可使半数有效抗原量降至原来的1／5～1／10.显著提高抗狂犬病毒IgG和中和抗体滴度;促进诱生IL－2,促进免疫细胞增殖,提高细胞免疫;显著降低感染狂犬病毒野毒株小白鼠的死亡率,具有抗血清样和疫苗的双重效果;皮卡IPRV能通过小白鼠脑内注射的安全性检查和腹腔注射的毒性检查。     

SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应

目的评价SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应。方法用SV40灭活疫苗经肌肉注射免疫0.5~1周岁的恒河猴,分别于第1次和第2次免疫后2周,检测血清中和抗体效价,免疫18个月后检测SV40基因组成分。结果免疫的12只恒河猴在第1次免疫后2周,血清抗体全部阳转,平均抗体滴度为1∶16,第2次免疫2周后血清抗体滴度明显增长,平均达到1∶64~1∶128。用PCR方法未检测到SV40基因组成分。结论SV40灭活疫苗可以有效诱导恒河猴产生特异性抗体反应。     

HBV壳聚糖微球疫苗鼻腔免疫的初步研究

目的　研究HBV表面抗原亚单位微球疫苗及DNA微球疫苗鼻腔免疫的效果 ,为新型鼻腔疫苗的研制提供实验基础。方法　选取HBV表面抗原亚单位疫苗及HBVDNA疫苗作为模型 ,以壳聚糖作为载体 ,通过沉淀 凝聚法制备壳聚糖微球疫苗 ,分别通过鼻腔、腹腔及肌肉免疫小鼠 ,在不同时间点收集小鼠血清 ,用ELISA检测血清中抗HBVIgG ,分析不同免疫途径的免疫效果。结果　在HBV亚单位微球疫苗免疫组中 ,腹腔与鼻腔免疫效果差异无显著意义 ;而在HBVDNA疫苗免疫组中 ,肌肉免疫后 12周IgG达到峰值 ,随后开始出现下降趋势 ;而微球疫苗则在 16周才达峰值 ,且鼻腔免疫组要高于肌肉免疫组。结论　鼻腔免疫可作为亚单位疫苗及DNA疫苗的免疫途径 ,且相对于DNA疫苗而言 ,壳聚糖微球具有保护作用及缓释作用。     

A Novel Prophylaxis Strategy Using Liposomal Vaccine Adjuvant CAF09b Protects against Influenza Virus Disease

The SARS-CoV-2 pandemic caused a massive health and societal crisis, although the fast development of effective vaccines reduced some of the impact. To prepare for future respiratory virus pandemics, a pan-viral prophylaxis could be used to control the initial virus outbreak in the period prior to vaccine approval. The liposomal vaccine adjuvant CAF^®09b contains the TLR3 agonist polyinosinic:polycytidylic acid, which induces a type I interferon (IFN-I) response and an antiviral state in the affected tissues. When testing CAF09b liposomes as a potential pan-viral prophylaxis, we observed that intranasal administration of CAF09b liposomes to mice resulted in an influx of innate immune cells into the nose and lungs and upregulation of IFN-I-related gene expression. When CAF09b liposomes were administered prior to challenge with mouse-adapted influenza A/Puerto Rico/8/1934 virus, it protected from severe disease, although the virus was still detectable in the lungs. However, when CAF09b liposomes were administered after influenza challenge, the mice had a similar disease course to controls. In conclusion, CAF09b may be a suitable candidate as a pan-viral prophylactic treatment for epidemic viruses, but must be administered prior to virus exposure to be effective.     

气相色谱法测定甲型肝炎灭活疫苗中三氯甲烷残留量

目的应用顶空气相色谱法测定甲型肝炎灭活疫苗中三氯甲烷残留量。方法采用毛细管色谱柱DB-WAX(30m×0.53mm×0.50μm),ECD检测器,以氮气为载气,顶空进样。以不同基质稀释的三氯甲烷工作液绘制标准曲线,并对方法进行适用性及专属性、线性关系、精密度、定量限、检出限和准确性验证。结果通过绘制的2条标准曲线可见,存在基质效应的影响。甲肝疫苗中三氯甲烷与其他杂质峰的分离度为2.58;三氯甲烷在20～100ng/ml的浓度范围内线性关系良好(R2=0.9993);精密性良好,检测结果的RSD均小于5%;最低检出限为1.2ng/ml,最低定量限为4.8ng/ml;检测高、中、低3种浓度样品的加标回收率分别为(95.6±1.8)%、(95.5±3.1)%和(101.9±2.1)%。结论顶空气相色谱法简便灵敏,结果准确可靠,适用于甲型肝炎灭活疫苗中三氯甲烷残留量的测定。     

DNA疫苗佐剂Poly（LacNAc／Gln—co—Glu）的合成

报道了合成Ｐｏｌｙ（ＬａｃＮＡｃ／Ｇｌｎ－ｃｏ－Ｇｌｕ）的方法,首先用ＮＨ４ＨＣＯ３与乙酰乳糖合成出β－Ｎ－乙酰乳糖基胺,然后将β－Ｎ－乙酰乳糖基胺与聚Ｌ－谷氨酸反应合成出Ｐｏｌｙ（ＬａｃＮＡｃ／Ｇｌｎ－ｃｏ－Ｇｌｕ）,最后利用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱对产品进行了分离,带有ＬａｃＮＡｃ基团的Ｐｏｌｙ（ＬａｃＮＡｃ／Ｇｌｎ－ｃｏ－Ｇｌｕ）有一些特殊的生物识别功能。我们将进一步报道用它来做ＤＮＡ疫苗     

国产流行性感冒裂解疫苗临床反应与免疫原性观察

目的　评价国产流行性感冒裂解疫苗的临床反应和免疫原性。方法　按整群随机抽样原则 ,以进口同类疫苗作为对照开展现场临床观察 ;比较两种疫苗免疫后的反应率、抗体阳转率、保护率及几何平均滴度(GMT)。结果　试验组及对照组 1针接种后全身反应率分别为 1 .79%和 3. 32 % ,局部反应率分别为 1 .5 4 %和2 . 37% ;试验组、对照组中的婴幼儿 2针全程免疫后全身反应率分别为 5. 0 8%和 7 .6 9% ,局部反应率分别为 5 . 0 8%和 3.85 %。试验组免后H1N1、H3 N2 、B型抗体阳转率分别为 91. 36 %、86 . 36 %和 83. 18% ,对照组分别为 93 .13%、84 . 73%和 75 .5 7% ,两组比较差异无显著意义。非易感者免后H1N1、H3 N2 、B型抗体GMT与免前相比 ,试验组分别为免前的 18 2 8、9 30和 8 6 1倍 ,对照组分别为免前的 18 16、8 4 5和 5 . 77倍。试验组免后H1N1、H3 N2 、B型抗体保护率分别为 86 . 82 %、99. 0 9%和 96 . 36 % ,对照组分别为 96. 18%、96 .18%和 92 . 37%。结论　国产流感裂解疫苗具有与进口同类疫苗相似的临床反应及良好的免疫原性。     

流感病毒在Vero细胞上的适应性

目的研究WHO指定流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上的适应性,为用Vero细胞制备流感疫苗奠定基础。方法优化不同培养基、胰酶浓度、pH值等培养病毒的条件及收毒时间,将流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上连续传代,并进行血凝效价检测及RT-PCR分析。结果在病毒维持液为F12+DMEM、pH为7.5、胰酶含量为1.5μg/ml、培养3 d收获病毒时,可获得较高的病毒血凝效价,连续传4代,病毒血凝效价降为0,RT-PCR检测结果为阴性。结论WHO推荐的流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上连续传代,病毒血凝效价逐渐降低。     

流感亚单位疫苗裂解剂残留量检测及安全性试验

目的检测流感亚单位疫苗的裂解剂残留量,并观察其安全性。方法制备3批流感亚单位疫苗,采用比色法检测其裂解剂Tween-80和CTAB的残留量,通过动物实验观察其安全性。结果制备的3批疫苗样品,Tween-80的残留量平均在68.3~72.0μg/ml之间,CTAB残留量平均在36.3~38.7μg/ml之间。在安全性试验中,豚鼠未出现过敏反应,小鼠和豚鼠未出现异常毒性反应。结论制备的流感亚单位疫苗的裂解剂残留量符合拟定规程要求,安全性良好。     

婴幼儿对地鼠肾细胞培养乙型脑炎灭活疫苗的中和抗体应答

应用蚀斑减少中和试验法，测定乙脑流行区婴幼儿对地鼠肾细胞培养乙型脑炎灭活疫苗的中和抗体应答，4～17个月龄婴幼儿在免疫前中和抗体阳性率为2．4％，两针基础免疫后阳性率为57.23％；1年后加强注射1针阳性率为95－95％；1岁基础免疫两针，2、4岁分别加强1针，6岁时抗体阳性率为70．59％，再加强注射1针为94．12％；1岁基础免疫两针，2、4和6岁分别加强注射1针·到10岁时抗体阳性率为96·67％，再加强注射1针上升为100％。作者认为乙脑灭活疫苗基础免疫应注射3针，2～3岁和6岁时再分别加强注射1针，小学阶段可不再加强注射。