以变性染色皮粉为底物的蛋白酶活力检测方法研究

以活性染料Remazol brilliant blue R(RBB)对皮粉进行染色,制备了在较宽的pH范围内稳定的热变性染色皮粉。研究了反应时间、底物和蛋白酶浓度等因素对酶催化染色皮粉水解速度的影响,建立了一种基于变性皮粉-RBB底物的蛋白酶活力检测方法。用建立的方法,对几种常用的制革蛋白酶进行酶活力测定,并与常用的基于酪素底物的福林法和LVU法进行对比,结果表明:对于大部分蛋白酶,2种底物检测结果有较大差异。     

离子选择电极法测定谷氨酰胺酶活力研究

通过确定温度、pH值、铵离子强度调节剂、Na+含量等对铵离子选择性电极响应值的影响,建立一种谷氨酰胺酶活力的测定方法。结果显示:利用铵离子选择电极法测定谷氨酰胺酶活力时,pH值保证在2~4之间,尽量避免Na+的存在,选用20%氯化锂(溶于pH 2.0的无机酸)溶液作为铵离子强度调节剂。此方法测定结果准确度、精密度和稳定性均良好,实用性强。用于测定商用蛋白酶的谷氨酰胺酶活力实验发现多数商用蛋白酶具有谷氨酰胺酶活力,其中博仕奥碱性蛋白酶的谷氨酰胺酶活力达到14.4U/g,结果表明:一般商品化酶制剂中本身含有谷氨酰胺酶或者蛋白酶具有谷氨酰胺酶活力,同时也验证了此方法的可行性。     

酱油曲蛋白酶的分离及催化性质研究

酱油曲提取液,经硫酸铵盐析后,用Sephadex G-75柱层析分离,测定收集液中的蛋白含量并用两种方法测定蛋白酶活力。结果显示,福林法酶活力峰出现在蛋白吸收曲线第二高峰,酶解酪蛋白显示的酶活力峰值出现在蛋白含量第三高峰的左肩。表明酱油曲含有不同分子量大小的蛋白酶,分别作用于蛋白质的不同位点,分子量较大(在20 kDa到14.3 kDa之间)的蛋白酶福林法酶活力最高,蛋白酶水解酪蛋白产生的酪氨酸较多;分子量比较小(小于14.3 kDa)的蛋白酶福林法检测酶活力不高,但分解酪蛋白产生的氨基酸态氮(ANN)含量较高,表明该蛋白酶酶解酪蛋白产生酪氨酸之外的其它氨基酸或肽类较多。     

制革用工业酶制剂主要成分及环境风险

分析了AS1.398蛋白酶、2709蛋白酶和工业胰酶中的蛋白组分含量、不溶物含量、灰分含量、重金属含量以及挥发性物质,通过定性和定量方法评估制革用酶制剂组分对环境的风险。结果表明:工业酶制剂中95%以上为其他添加成分,蛋白组分所占的比例不到5%。3种工业酶制剂重金属含量均符合国家标准要求。顶空微萃取技术和气质联用技术测定了3种酶制剂中挥发性物质的组成及相对含量,结果未发现需特别关注的挥发性物质。说明在制革过程中使用的工业酶制剂,不含需要特别关注的有害物质,不会带来新的环境风险。     

基于弹性蛋白-RBB底物的弹性蛋白酶活力检测方法研究

以Remazol brilliant blue R染色牛颈韧带弹性蛋白粉,制成染色弹性蛋白。底物稳定性好,在较宽pH范围内染料不易洗脱。以弹性蛋白-RBB为底物,建立了一种能在较宽pH范围内测定制革蛋白酶的弹性蛋白水解活力方法。确定酶活测定条件:反应时间为30min,温度为40℃,基于5mg底物量,待测酶液中弹性蛋白酶活在90～160U/mL范围内,水解液的吸光度与酶的浓度呈良好的线性关系。方法重线性较好。几种常用制革蛋白酶在不同pH下测定的结果表明,一些细菌蛋白酶显示出较高的弹性蛋白酶活力,最适作用pH值在9左右。     

两种脱毛蛋白酶活力的研究

本文对两种常用的脱毛蛋白酶（2709碱性蛋白酶与A．S1398蛋白酶）在不同pH值、温度等条件下的活力变化情况进行了研究。结果表明：2709蛋白酶的活力最适pH值为9．5～10，A．S1398蛋白酶为7．5～8．0且2709酶的pH值适应范围更广，对pH值的敏感度更低；两种酶活力的温度变化曲线具有相似性，温度越高，它们的活力衰减得也越快；两种蛋白酶受Mn抖强激活，Cu^2＋、Cr^3＋、Fe^2＋、Zn^2＋等离子则对其有抑制作用；表面活性剂如洗衣粉、平平加和JFC等对两种酶具有一定的激活作用。     

H2O2和NaHS对几种脱毛酶活力的影响

采用福林法和紫外分光光度法分析了几种蛋白酶活力的pH值曲线,并探讨了H2O2及NaHS对它们酶活力变化的影响.结果表明H2O2对NOWOLASE PE酶的活力影响较小,且具有一定的激活作用,而对2709酶、A.S1398酶和Basozym L10酶的影响极大;NaHS对2709酶和A.S1398酶的活力影响较小,且对2709酶的活力具有稳定作用,而对NOWOLASE XL酶、NOWOLASE PE酶和Basozyme L10酶的影响大.此结果为研究H2O2和NaHS辅助蛋白酶脱毛,以解决酶脱毛中小毛不易脱净的缺陷打下基础.     

改良甲醛法测定酱油成曲的蛋白酶活力

通过缩短反应时间和添加反应底物,对蛋白酶活力甲醛测定法进行了修改,并且通过实验证明经修改的方法(简称改良甲醛法)的检测结果和福林法具有很好的相关性(r=0.992)。改良甲醛法的酶解条件为:成曲量<6g,大豆粉12g,去离子水100mL,55℃水浴酶解30min。采用甲醛滴定法检测氨基酸态氮的含量。蛋白酶活力规定为:1g曲在55℃、自然pH条件下,1min之内水解大豆粉产生1μg氨基酸态氮定为1个活力单位。     

蛋白酶在獭兔皮浸水工艺中的应用研究

测定了1398蛋白酶和胰酶及其复配酶制剂在20℃、pH 7.5下的活力.通过浸水獭兔皮的水分含量、蛋白质含量(TP)、感官性能测试以及成品皮物理力学性能确定出最佳酶配方.结果显示:复配酶具有明显的协同作用,50%1398酶+50%胰酶制备的复合酶用于浸水工艺能得到充水度高、皮板清洁柔软、毛被坚牢度好且易于揭里的的浸水皮...     

复合酶中蛋白酶测定法的探讨

1前言蛋白酶种类繁多、有来自动物性原料，如胰蛋白酶，胃蛋白酶；来自植物性原料，如木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶；有来自微生物原料，如曲霉微生物蛋白酶；有来自细菌原料如枯草杆菌细菌性蛋白酶等。酶活力测定是通过最适宜PH值的选择来确定蛋白酶来自何种酶源，再选择其检测方法。委托检验复合酶产品所加入的蛋白酶是混合蛋白酶，首先应先确定来自何种酶源，再确定其中检测方法，我站受万康达酶制剂公司委托，对复合酶产品进行多种酶活力的测定，现主要介绍蛋白酶活力测定，据厂方提供，其中一种是植物性蛋白酶，采用木瓜酶测定方法测定，另…     

生物质降解酶酶活的测定方法

生物质原料的酶降解，条件温和、对设备要求低、对环境的污染小，是未来生物质原料水解的主要方式，该文研究了生物质降解酶的各酶活测定方法，该方法操作较为简单、准确性好，精确度高，各实验室皆可应用。     

以ABTS为底物测定漆酶活力的方法

以2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（简称ABTS）为底物，采用分光光度计在420nm下测定漆酶活力，研究了酶活测定条件对酶活值稳定性的影响，确定了测定漆酶活力的方法：选择漆酶适宜的温度和pH，适当稀释漆酶（使漆酶稀释液的活力为27．7～55．3U／mL），测定漆酶催化分解0．5mmol／LABTS使吸光度值从0．15增加到0．20所经历的时间t，改变稀释倍数使t值在10-20s，根据相应的公式计算漆酶活力（漆酶活力误差为3％）．     

梨汁酶褐变控制方法研究

采用不同抑制条件对梨汁进行处理,分析梨汁中多酚氧化酶活性的变化。结果表明:在实验所涉及的温度区域,20℃时多酚氧化酶活性最强,100℃时酶活几乎可以完全被抑制,抗坏血酸、柠檬酸等都在不同的浓度范围内对多酚氧化酶的活性有不同程度的抑制。     

血管紧张素转化酶抑制剂抑制率的测定方法

如何高效、简便、快速地测定血管紧张素转化酶抑制率有着重要意义。近年来,许多学者对血管紧张素转化酶抑制剂抑制率的测定方法开展了大量的研究工作。就血管紧张素转化酶抑制率的测定方法进行了分类和阐述,比较了不同测定方法的特点。     

香菇多糖脱蛋白工艺的研究

从香菇菌丝体中提取的香菇多糖经脱蛋白提纯后,其生物活性更高。对酶法、Sevag法、三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白效果进行了比较研究,确定了最佳的脱蛋白工艺为酶法和三氯乙酸．正丁醇结合法,脱色4次,蛋白含量为1．97％,多糖损失率为4．58％。     

酶法提取鲍鱼多糖的研究

选用木瓜蛋白酶酶解鲍鱼肉,提取多糖,确定了温度、时间、pH值、料液比、加酶量对鲍鱼多糖得率的影响。结果表明,木瓜蛋白酶的适宜反应条件为温度55℃,时间2h,pH8.0,料液比1∶40,加酶量2.0%,在此条件下,鲍鱼多糖的得率为19.60%。     

酶法制取龙口粉丝专用淀粉工艺优化及性质研究

以豌豆为原料,采用中性蛋白酶优化了高纯度豌豆淀粉的制取工艺.结果表明,酶处理温度49.0℃、酶处理时间266 min、酶添加量222 mg/kg,淀粉的得率达41.0％.酶法提取豌豆淀粉的糊化温度较酸浆法的高,但是峰值黏度、末值黏度、回生值和衰减值皆低于酸浆法淀粉,淀粉糊更稳定,更耐剪切.酶法淀粉制备的粉丝蒸煮损失比酸浆法淀粉明显降低,由于煮沸损失可以在很大程度上表现出粉丝的质量,因此酶法淀粉制取的粉丝品质优于酸浆法制取的粉丝品质.     

一种ε-聚赖氨酸降解酶活性测定的新方法

针对现有ε-聚赖氨酸降解酶活力测定中存在的问题。建立了一种利用甲基橙法测定ε-聚赖氨酸量的变化,从而测定ε-聚赖氨酸降解酶酶活的新方法。通过对反应温度、时间、底物浓度和缓冲体系的研究.确定了新方法的酶活测定条件。验证实验表明,新方法有较好的精确性和准确性,为ε-聚赖氨酸降解酶的研究提供了一种安全简便的测定方法。     

响应面法优化牛皮酶法脱毛工艺

研究旨在探求复合酶脱毛的最优工艺条件,并为牛皮的开发利用提供了一定的理论基础。本试验以牛皮酶法脱毛过程中加酶方式、酶活力配比、酶液浓度、酶解时间、酶解pH、酶解温度等为研究因素,在单因素实验基础上进行复合酶脱毛方法,结合响应面法对复合酶脱毛工艺进行优化。结果表明,碱性蛋白酶和中性蛋白酶采用先后加入的酶解方式,得到了碱性蛋白酶和中性蛋白酶的最适酶活力配比、酶解温度、酶液浓度、酶解时间、pH值,测得综合评分为0.756。响应面法分析结果表明,酶解温度和酶液浓度的交互作用对脱毛效果的影响显著,而其他因素交互作用不显著。     

鸭血清胆碱酯酶抑制法检测果蔬农药残留的研究

对农药残留快速检测方法——胆碱酯酶抑制法进行了研究。以二次盐析后的鸭血清丁酰胆碱酯酶(BChE)为农药残留的检测用酶,碘化硫代丁酰胆碱(BTChI)为底物,5-5'-二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂,410nm比色测定吸光值变化,计算胆碱酯酶的抑制率,从而推算农药残留情况。当抑制率大于35%时,表明农药含量超标。检测过程只需20～40min,可同时检测多个样品,与气相色谱检测结果的符合率大于85%。