漆酶的抑制剂

<正> 漆酶研究的早期文献已涉及漆酶活性的抑制问题。1908年,Gabriel Bertrand 等发现盐酸、磷酸、砷酸和甲酸等能够抑制漆酶的活性,而某些酸(如磷酸、碳酸、硼酸等)的单钠盐则无此抑制作用,这种现象说明酸中存在具有抑制作用和不具抑制作用的两种不同类型的氢。四十年代末,Didier Bertrand 报导2,3—双巯基丙醇(DMP)对漆酶具有抑制作     

漆酶催化儿茶素及儿茶酚合成黑色素的研究

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,具有广泛的底物催化性。在漆酶的介导下对不同酚类底物合成带色产物进行了研究,发现儿茶素和儿茶酚能够合成黑色素。重点研究了黑色素合成的影响因素:底物的比例对黑色素的影响很大,1∶1为最佳比例;光照对黑色素的合成几乎无影响;漆酶活力越高对反应越有利;不同来源的漆酶催化反应的最适温度和最适p H不同;有机溶剂乙醇、正丙醇、正丁醇和丙酮对黑色素合成有促进作用,而有机溶剂甲醇和异戊醇又起抑制作用;金属离子Na+、Mn2+、Mg2+、Sr2+、K+有一定的抑制作用,并且浓度越高抑制作用越强,而加入Cu2+、Fe2+、Fe3+时分别产生青灰色、绿色、灰黑色沉淀,没有黑色素生成;底物浓度对黑色素合成的影响呈钟形,0.1 mol/L最适宜;震荡有利于漆酶催化黑色素的合成。通过漆酶合成的黑色素有望用于改进染发剂的配方。     

不同离子对漆酶酶活的影响

设置一系列不同种类、不同浓度的离子溶液,探究其对漆酶酶活的影响。结果表明,阳离子中Fe~(2+)、Fe~(3+)对漆酶的抑制作用显著,并分析了离子浓度对漆酶的影响以及不同离子对漆酶的抑制机理。分析表明Fe~(2+)可能是通过与2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基结合影响漆酶酶活,Fe~(3+)可能是通过影响或置换漆酶中的部分铜离子影响漆酶活性,其中因为漆酶的活性中心是由四个铜离子组成,特别分析了Cu~(2+)对漆酶活性的影响,Cu~(2+)可能是通过与漆酶中的酸性氨基酸残基作用或通过影响漆酶的电荷平衡影响漆酶活性。在常见的阴离子溶液中,CO_3~(2-)抑制漆酶酶活,NO_3~-和SO_4~(2-)对漆酶有一定程度的激活,Cl~-轻微抑制漆酶酶活。分析表明阴离子的抑制作用可能是通过与底物分子竞争Ⅱ铜中的某一个位点来实现,激活作用可能是通过修饰漆酶氨基酸残基来实现。还研究了不同类型离子的复配,结果显示不同类型的复配对漆酶的影响方式也不同,但主要是通过作用于漆酶活性位点来影响酶活。     

漆酶催化偶氮染料酸性橙脱色的研究

利用米曲霉菌漆酶对偶氮染料酸性橙进行脱色实验,考察反应时间、pH、加酶量、温度、染料质量浓度等因素对脱色率的影响。结果表明,漆酶催化酸性橙的适宜条件为:反应时间为50 min、pH=6、加酶量为2 mL、反应温度为50℃、染料质量浓度为0. 1 g/L,最适条件下酸性橙的脱色率达88. 32%。同时研究了金属离子、酶抑制剂对酸性橙脱色的影响,结果发现十二烷基硫酸钠(SDS)显著抑制漆酶的催化活性,Fe²⁺对漆酶脱色有完全抑制作用; Mg²⁺对脱色有一定的促进作用。     

漆酶的催化反应体系

漆酶是最简单的含铜多酚氧化酶,能溶于水,在不同的体系中特性各异。其反应体系主要包括水溶液反应体系、有机溶剂反应体系、微乳液体系、固定化体系以及在此基础上衍生出来的介导反应体系和协同反应体系等。漆酶的催化能力还受多方面因素的影响,如漆酶来源、缓冲体系、金属离子、抑制剂、温度、pH等因子的影响。     

漆树漆酶催化单宁酸的氧化反应研究

用分光光度法考察漆树漆酶催化单宁酸的氧化情况,探讨了pH值、反应温度、单宁酸浓度、有机酸和金属离子等对催化反应的影响.结果表明,当反应温度为30℃时,漆树漆酶催化反应效果较好;在pH值为4.2～ 9.8的范围内,反应速率随pH值增大而加快;单宁酸浓度在1.47×10-5 ～ 2.94×10-4 mol·L-1时,反应速率随底物浓度的增大呈线性增加;Cu2 、Mg2 和Ni2 三种金属离子对催化反应有激活作用,其中Cu2 影响最大;而柠檬酸和乙二胺四乙酸对酶催化反应均有抑制作用.     

Klebsiella sp. 601细菌漆酶的鉴定及性质

从森林树木根部土壤中分离得到一株具有2,6-二甲氧基酚(DMP)和2,2′-连氮基-双(3-乙基苯丙噻唑啉-6磺酸(ABTS)氧化活性的细菌.Cu2 、Ca2 、Mn2 、Fe2 和Mg2 可诱导细菌表达活性的胞质可溶性单体酶蛋白.该酶进行DMP或ABTS氧化时需要铜离子的协助,在pH5.0～7.5范围内氧化DMP,在pH4.0～4.5范围内氧化ABTS,但不能氧化酪氨酸.SDS-PAGE估测酶蛋白分子量大约为55 kD.经60℃处理4 h或pH10条件下透析20 h仍能保持酶活性.16S rDNA序列分析结合常规细菌形态学分析,表明该细菌属于克雷伯氏菌(Klebsiella)属,并命名为Klebsiella sp.601.这是首例报道Klebsiella细菌菌株具有漆酶活性.     

灰树花漆酶的酶学性质及其脱色作用研究

通过对液体发酵灰树花漆酶的酶活、Km常数、温度和p H值的测定,探讨了Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶酶活的影响,观察了漆酶对5种染料的脱色作用效果。结果表明:灰树花发酵液中漆酶氧化ABTS的Km为1.35×10-5mol·L-1,在p H值2~6的范围内均表现酶活,最适p H值为3.0,在25~70℃温度时范围内均有酶活,在50~55℃时酶活性最高。Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶的活性均有抑制作用,Ca2+离子的抑制作用较弱。灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿、甲基蓝和亚甲基蓝染料的脱色率分别为85.77%,81.10%,72.68%,22.02%和4.22%。介体ABTS对漆酶处理甲基蓝的脱色有促进效果,而对亚甲基蓝、溴甲酚绿和甲基红的脱色促进效果较弱,对甲基橙的脱色无促进作用。结论:本研究中灰树花漆酶最适p H值为3.0,在50~55℃时酶活性最高;灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿染料的脱色效果理想。     

金属离子对纤维素酶内切酶和外切酶活性的影响

金属离子可以影响纤维素内、外切酶的活性,且不同金属离子对其活性影响程度也不同。据此,本实验选取三种纤维素酶进行单因素实验,对其内、外切酶活性进行研究。实验结果表明,当金属离子的质量浓度为:K+0.9 mg/mL,Ca2+0.3 mg/mL,Zn2+1.2 mg/mL,Cu2+1.2 mg/mL,能较好地提高纤维素内切酶活;而Mg2+﹑Ca2+﹑Ba2+﹑Cu2+﹑Zn2对纤维素外切酶活都有抑制作用;Al3+对纤维素内、外切酶活都有抑制作用;不同价态阴离子对纤维素内、外切酶活影响不大。     

灵芝超高压突变株漆酶的纯化和酶学性质

灵芝超高压突变株G1502的发酵液经浓缩、DEAE-纤维素柱层析,纯化出一种漆酶。其最适作用温度为45℃,在不高于45℃的条件下保存5 h,残余酶活在97%以上;最适pH为4.4,在pH=3.8~6.6内保存,残余酶活在80%以上。漆酶催化愈创木酚的υmax和Km分别为2.28μmol.L-1.min-1和1.94×10-4mol.L-1。金属离子K+和Cu2+对酶有激活作用,Fe2+、Co2+、Ca2+、Na+、Ba2+对酶活有很大的抑制作用。     

生漆化学文摘

<正> 在试管及天然条件下由Covilus versicolor漆酶降解木质素活性的研究。 Evans.Christi(?)e S.;FEMS Microbiol,Lett.1985,27(3),339-43(Eng). 在含有木质素的C.versicolor的液体培养基中,漆酶的活性受加入的抗体的抑制,而木质素的降解速率及降解程度却不受影响,用这种培养基中的漆酶活性同正常漆酶活性的培养基进行比较,在有过氧化氢的存在下,尽管在玻璃试管内木粉木质素可被漆酶催化解聚,然而这个反应也能被抗体所抑制,因此可以推断,在天然条件下,这种漆酶的降解活性并不是漆酶的催化功能。     

测定漆酶活性的通气比色法

<正> BARUAH等曾以邻苯二酚为底物,通过比色(邻苯二酚的酶促氧化产物显黄色)测定多酚氧化酶的活性,其特点是反应溶液中有空气流通。本文研究了通入的空气量对漆酶活性测定的影响,并应用这种通气比色法于漆酶活性的测定,获得了成功。     

直接降解木质素的漆酶/木聚糖酶体系的合成

对一株高产漆酶及伴有木聚糖酶和少量纤维素酶的菌株,用不同的碳源和氮源对其调控培养,合成漆酶/木聚糖酶体系。实验结果表明,最佳的碳源是可溶性淀粉,用它作碳源,漆酶活性高达730IU/mL,木聚糖酶活性是4.49IU/mL,纤维素酶活性只有0.23IU/mL;最佳的氮源是蛋白胨,用其作氮源,合成漆酶活性可达812IU/mL,木聚糖酶活性是4.68IU/mL,纤维素酶活只有0.09IU/mL。     

国漆精制过程中漆酶活性的变化

<正> 漆酶是生漆的重要组分之一,这种广泛存在于植物机体中的氧化酶,由于其性能优异,越来越引起人们的关注。本文主要是围绕国漆精制过程中漆酶活性变化的一些问题进行了一些初浅的研究工作。从多次试验结果看,国漆精制过程中,漆酶活性部不同程度地发生了一些变化,而且这种变化与制漆时间、漆液温度和漆酚聚合程度等因素密切相关。针对漆酶的这些特性,有可能寻找一些比较好的制漆途径。通过这些途径既可使漆酚得到比较理想的聚合,又可使漆酶活性在制漆过程中的消耗降到最低限度。     

糙皮侧耳菌漆酶的分离纯化及部分性质研究

对糙皮侧耳菌5.42产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、DEAE-Cellulose和SephadexA-50纯化,得到纯化18.1倍漆酶,得率36%,用PAGE检测为单一条带,用SDS-PAGE证明漆酶的分子量为61.4 kD,而用经过高效液相色谱分离的酶液进行质谱检测分子量为60.5 kD。该酶最适温度为40℃,最适pH为5.0。金属离子对酶活有很大的影响,其中K+、Mn2+、Cu2+有明显促进作用,Hg2+、Ag+、Ba2+等对酶活有明显的抑制作用。该酶与果胶酶按比例组合在一起,对荨麻生物脱胶取得良好的脱胶效果——木质素去除率为85%。     

生漆成膜的分子机理

生漆是由漆酚、漆酶、树胶质、糖蛋白以及水分、金属离子等组成的非水相微乳系统,漆酚是其非水相介质,疏水性的糖蛋白自组装成反相微乳球形胶团的外壳,水分子、亲水性多糖、漆酶及金属离子聚集其内形成"微水池",漆酶是其生物催化剂。生漆的成膜过程由酶促起始,是一个典型的生物化学反应过程。漆酚在漆酶的催化作用下形成漆酚自由基,其后发生随机的非酶促自由基氧化反应,漆酚的二聚反应是其最重要的基元反应,漆酚侧链双键的自动氧化反应与其相偶联,聚合成结构单元间以-C-C-或-C-O-连接的无轨漆酚高聚体,最后再通过漆酚-多糖-糖蛋白的超分子化学作用,聚集成具有超耐久性、生物活性、磨光性、葆光性、抗溶剂性、抗氧化性以及热力学稳定的、可光氧化降解等特性的超分子结构膜。     

生漆中漆酶活性与温度的关系

<正> 漆膜的干燥速度主要决定于生漆中漆酶(催化)活性,而漆酶活性常随温度变化而变化。因此弄清漆酶活性与温度的关系是必要的。我们新建立的折光法,可测任意温度下的漆酶活性,而且结果与恒温恒湿下漆膜表面干燥时间有明显的对应关系。我们用这种方法研究了代表性漆样约70个,发现一、漆酶活性和温度的关系复杂,其图形多数     

生漆化学文摘

<正> 漆酶活性动力学特征的滞流研究 Pepanyan’G.S.;Yaropolov,A.I.;Deposited Doc.;1984,VINITI,407—84,88-91(Russ) 本文作者用滞流法研究了从Coriolus versicolor中提取分离的漆酶,该漆酶和Fe(CN)_6~(3-)及邻苯二酚反应的稳态前动力学研究结果表明,在漆酶催化反应起始前有一段滞后期,这一滞后期的长短与漆酶及底物的浓度有关。据此作者提出了一个漆酶催化反应的机理,作者认为无活性的漆酶形式与底物弱结合后,能被活化,活化后的漆酶分子可与无活性的漆酶发生相互作用,结果使无活性的漆酶活化。 (CA101(5):34104X)     

Klebsieila sp．601细菌漆酶的鉴定及性质

从森林树木根部土壤中分离得到一株具有2，6-二甲氧基酚（DMP）和2，2＇-连氮基-双（3-乙基苯丙噻唑啉-6磺酸（ABTS）氧化活性的细菌。Cu^2＋、Ca^2＋、Mn^2＋、Fe^2＋和Mg^2＋可诱导细菌表达活性的胞质可溶性单体酶蛋白。该酶进行DMP或ABTS氧化时需要铜离子的协助，在pH5．0～7．5范围内氧化DMP，在pH4．0～4．5范围内氧化ABTS，但不能氧化酪氨酸。SDS-PAGE估测酶蛋白分子量大约为55kD。经60℃处理4h或pH10条件下透析20h仍能保持酶活性。16S rDNA序列分析结合常规细菌形态学分析，表明该细菌属于克雷伯氏菌（Klebsiella）属，并命名为Klebsiella sp．60l。这是首例报道Klebsiella细菌菌株具有漆酶活性。     

生漆化学文摘

<正> 漆酶在有机溶剂中催化特性的研究Study of catalytic properties of laccase in organic solvents Pepangan,G.S.;Bagdasargan,Z.N.;et.Organ Redaktivg dlya Nauch Issled,M.1988,44—8(Russ).From Ref.zh,Khim,1989,Abstr NO17B4033只转有标题,CA112:3385Neurospora crassa 去阻抑漆酶的分离及其特性研究。Tamara,Hisashi;et.J.Bacterial,1989,101(11),6288—93(eng)来自 N.Crassa 担子菌的漆酶属于分泌酶。在植物性培养基中,这种漆酶的产生就会被抑制。但却能够经过低浓度的放线菌素诱导而产生。该担子菌突变体 lab—1的去阻抑漆酶的分离和特性在文章中进行了描述。仅管这种担子菌突变体没有受到放线菌酮的诱导,但也具有产生漆酶的能力。lah—1突变是在 nif—2和 leu—3键合基团Ⅰ而