滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),两株识别人促甲状腺素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血-新生儿促甲状腺素生物素-亲合素酶联免疫分析(NeonatalTSH-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIU/L,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%,回收率为90.1%～103.3%。本方法所制备的试剂盒与NeonatalTSH-IR-MA(磁颗粒法)试剂盒具有良好的相关性,相关方程为y=1.01x+0.34,相关系数为r=0.873。本试剂盒无放射性,操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH)酶联免疫分析试剂盒

本工作以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）、二株识别人促甲状腺激素（hTSH）高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素-亲合素酶联免疫分析（sTSH-BA-ELISA）试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为0.02mIU/L,批内变异系数<7.8％,批间变异系数<9.6％,回收率为93.3％～1078％,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素（如 FSH,HCG,LH）无明显的交叉反应性。正常参考值范围为0.3～4.1。本方法所制备的试剂盒与同位素研究所53室的     

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH) 酶联免疫分析试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素 (SA) ,二株识别人促甲状腺激素 (hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化 ,以四甲基联苯胺 (TMB)为底物 ,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素 亲合素酶联免疫分析 (sTSH BA ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为 0 0 2mIU/L ,批内变异系数 <7 8% ,批间变异系数 <9 6% ,回收率为 93 3 %～ 1 0 7 8% ,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素 (如FSH ,HCG ,LH)无明显的交叉反应性。正常参考值范围为 0 3～ 4 1mIU/L。本法所制备的试剂盒与中国原子能科学研究院同位素研究所的TSH IRMA试剂盒的相关方程为 y =1 .2xIRMA 0 1 4,相关系数r =0 969。本试剂盒较常规ELISA灵敏度高、简便、快速 ,适用于临床检测和科研应用     

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸(T_3)酶联免疫检测试剂盒

以T_3抗体包被微孔,经处理的T_3生物素化,辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),四甲基联苯胺(TM)为底物,建立了T_3生物素-亲合素酶联免疫分析(T4-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为0.2ng/mL,批内变异因数<8.3％,批间变异因数<10.5％,回收率为98.3％～107.3％,正常参考值范围为1.4～3.8ng/mL,本试剂盒具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。     

TG Ab酶联免疫分析试剂盒的研制

固相包被TG,TG与辣根过氧化物酶偶联制备TG酶标记物,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,采用二步法,建立了TG Ah酶联免疫分析(ELISA)试剂盒制备方法。本方法的灵敏度为0.4μg/L,批内变异因数<10.0％,批间变异因数<15.0％,特异性鉴定显示与TM无明显交叉反应。正常参考值<50.0IU/mL(n=100)。该方法具有简便、快速和定量准确的特点,适用于临床检测和科研应用。     

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),T₃抗体包被微孔,T₃生物素化,四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T₃）生物素-亲合素酶联免疫分析(T₃-BA-EL1SA)方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2 μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1％～8.3％和6.5％～10.5％,回收率为98.1％～107.2％;高浓度T₃血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

催乳素酶促化学发光免疫分析试剂盒的研制

采用两株催乳素(PRL)单克隆抗体,一株包被化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,研制了测定人血清PRL浓度的酶促化学发光免疫分析试剂盒。本试剂盒测定范围50~4 000 mIU/L,灵敏度4.26 mIU/L,批内、批间变异系数分别小于10%、15%,回收率90.3%~100.8%;血清样品倍比稀释后的测定值和稀释度的相关系数为1;本试剂盒正常参考值范围:女性43.2~513.1 mIU/L(n=52),男性54.8~334.3 mIU/L(n=68)。     

人血清总甲状腺素(T_4)酶联免疫分析试剂盒

本试剂盒引入生物素-亲合素系统,采用竞争性ELISA法检测人血清中T_4含量。以抗T_4抗体包被96孔微孔板,经处理的T_4与生物素结合形成生物素化T_4,链亲合素与辣根过氧化物酶结合形成链亲合素化酶标记物,四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了T_4生物素-亲合素酶联免疫分析     

胰岛素酶联免疫分析方法的建立

采用两株抗胰岛素单克隆抗体，一株包被聚苯乙烯板、另一株标记辣根过氧化物酶，建立了人胰岛素测定的双抗体夹心酶联免疫分析法。方法学研究表明本方法的灵敏度为1.7mIU/L，曲线范围5～160mIU/L，批内、批间变异分别小于11%、15%，回收率96.4％～111.1％；高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定，测定值与稀释度呈线性相关，相关系数0.998；38例健康人血清样品测定值为3.6～10.8mIU/L，该方法与人胰岛素放射免疫分析法测定结果的相关性良好，r=0.97。     

人促甲状腺激素酶联免疫吸附分析试剂盒的研制

TSH多抗用于固相包被，一株TSH单抗与辣根过氧化物酶偶联制备TSH标记物，以四甲基联苯胺（TMB）为底物，采用二步法，建立了TSH酶联免疫吸附分析法（ELISA）。本方法灵敏度为0.06mIU/L，批内CV≤5.9%(n=8)，批间CV≤9.1%(n=7)。回收率为（98．4－101．4）％。77例正常人血清的TSH均值为1.96mIU/L，用本法与IRMA法同时23例病人血样，两者相关方程为Y＝1．01X－0．47，相关系数r=0.992。本方法具有简便，快速和准确的特点，适于临床检测和科研应用。     

游离三碘甲腺原氨酸(FT3)生物素-亲合素酶联免疫分析

采用T3抗体包被酶标板微孔、生物素化T3和辣根过氧化物酶(HRP)标记链亲合素作为信号放大体系,一系列定量游离T3(FT3)为标准品,并以四甲基联苯胺-过氧化氢为显色底物,建立了FT3的生物素-亲合素(BA)酶联免疫分析(FT3-BA-EIA)法。其灵敏度为0.90pmol/L,标准曲线范围0.9～45.0pmol/L,批内变异系数3.1%～8.1%,批间变异系数4.9%～10.6%。测定了101例临床血样,其中正常人46例,实测范围2.5～11.1pmol/L,均值为5.1±2.0pmol/L;27例甲亢病人,实测范围9.7～37.3pmol/L,均值为20.5±7.1pmol/L;20例甲低病人,实测范围0.9～3.8pmol/L,均值为2.0±0.9pmol/L;8例孕妇,实测范围为3.4～8.5pmol/L,均值为6.0±2.5pmol/L。通过对临床血样的检测,本法与化学发光法(CIA)及放免法(RIA)的测定结果有良好的相关性。应用本法可有效地诊断甲状腺疾病,具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。     

人促甲状腺激素酶促化学发光免疫分析方法的建立

采用双抗体夹心法建立了定量检测人血清中促甲状腺激素含量的酶促化学发光免疫分析方法,其中,1株抗TSH抗体包被96孔微孔板,另1株与辣根过氧化物酶结合形成酶标记物,鲁米诺-过氧化氢作为发光底物。该方法测量范围为0.1～100 mIU/L,分析灵敏度为0.04 mIU/L,批内、批间变异系数分别为3.98%～6.48%和4.61%～13.1%,回收率为95.8%～117.4%,高浓度TSH样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数大于0.99。与LH的交叉率＜1.62%,与FSH和HCG的交叉率分别＜0.05%和＜0.02%。与罗氏化学发光免疫分析方法测定的临床值进行比较,相关性方程为y＝1.10x-0.207,相关系数r＝0.969。与免疫放射分析试剂盒进行比较,相关性方程为y＝1.00x+0.191,相关系数r＝0.965。本方法操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

促黄体生成激素酶促化学发光免疫分析方法的建立

采用双抗体夹心一步检测法和鲁米诺-过氧化氢发光体系建立了血清促黄体生成激素(LH)的酶促化学发光免疫分析方法。结果显示,本方法测量范围为1.5~200 IU/L,灵敏度为0.08 IU/L,批内变异系数9%,批间变异系数11%,回收率为96.3%~112.1%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.995。与进口酶促化学发光免疫分析试剂盒测定的临床值进行比较,线性相关方程为y=0.967x+0.0689,相关系数r=0.975,相关性良好。方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。     

血清游离3，5，3’-三碘甲腺原氨酸（FT3）酶联免疫试剂盒研制

三碘甲腺原氨酸是人体中随血流循环的一种甲状腺激素,在血液中,它几乎全部(>99.5％)结合于载体蛋白,但只有游离三碘甲腺原氨酸(0.3％)具有生物学活性。而且与总三碘甲腺原氨酸浓度水平相比,游离三碘甲腺原氨酸浓度水平不受载体蛋白浓度的影响,可对临床状态显示可靠的相关性。本法采用T_3抗体包被酶标板微孔、生物素化T_3,辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),以配     

游离前列腺特异性抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

采用双抗体夹心法建立了定量测定血清游离前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法,其中,1株抗总前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为包被抗体,另1株抗游离前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为标记抗体.总测量范围为0.2～10 ng/mL,灵敏度为0.01 ng/mL,批内变异<10%,批间变异<20%.本方法与Monobind游离前列腺特异性抗原化学发光测定试剂盒比对的相关方程为y＝0.72x-0.22,相关系数r＝0.90.     

癌胚抗原（CEA）酶联免疫分析试剂盒的研制

一株CEA单克隆抗体（McAb）用于固相包被,另一株McAb与辣根过氧化物酶偶联制备抗CEA酶标记物,以四甲基联苯胺（TMB）为底物,采用二步法,建立了CEA酶联免疫分析（ELISA）试剂盒制备方法。 本方法的灵敏度为0.4μg/L,批内变异系数<10.0％,批间变异系数<15.0％,回收率为99.4％～108.7％,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应。正常参考值小于10.0μg/L。该方法具有简便、快速和准确的特点,适用于临床检测和科研应用。     

β2-微球蛋白酶联免疫分析试剂盒的研制

以β₂-微球蛋白（β₂-MG）抗体包被微孔板，四甲基联苯胺（TMB）为底物，用辣根过氧化物酶标记β₂-MG，建立了β₂-微球蛋白酶联免疫分析试剂盒，并对该方法进行了方法学分析。结果显示：本方法分析灵敏度为0.15 mg/L，批内、批间变异系数分别为4.1％～11.2%和14.1％～16.0％，回收率为93.3%～115.9%，高浓度β₂-MG样品系列倍比稀释后，测定值与稀释度呈线性相关，相关系数为r=0.997 4。特异性结果显示：本试剂盒与铁蛋白基本无交叉反应，与白蛋白及甲胎蛋白在浓度分别低于10 mg/L及5 mg/L时有交叉反应，但反应很小。与放射免疫分析法（RIA）同时测定人血清样品，方法间有良好的相关性，相关方程为y_ELIA=1.006x_RIA+0.406，r=0.900(n=59)。以上参数均符合临床免疫分析的要求。本试剂盒操作简便、快速，适用于临床检测和科研应用。     

一种新型酶促化学发光增强液的发光性能及其在免疫分析中的应用

在辣根过氧化物酶／鲁米诺／增强剂／过氧化氢(HRP／luminol／enhancer／H2O2)增强化学发光体系中，加入一系列辅助试剂，获得了一种灵敏度高、发光持续稳定、可长期贮存的新型酶促化学发光增强液。该增强液灵敏度为2．4amol／孔，发光半衰期为40min，工作液在室温可稳定存放1个月，在37℃下可稳定存放14d。在此基础上，在TSH-BAS ECLEIA和AFP ECLEIA上进行了应用。TSH-BAS ECLEIA测量范围为0．17～35mIU／L．信噪比大于5；分析灵敏度为0．04mIU／L，功能灵敏度为0．06mIU／L；批内变异系数为2．96％～5．05％，批间变异系数为4．01％～7．56％；回收率为101％～119％；稀释实验相关方程为y=44．650x 0.352,r=0.352,r=0.996；与Bayer ACS：180系统进行方法学比较，相关方程为y=0．889x=0．351，r=0．984。AFP ECLEIA测量范围为5～2000ng／mL，信噪比大于4。动力学实验表明，加入发光液之后15min测量，结果准确可靠。     

前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

应用鲁米诺-过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法。该方法测量范围为1.5～80μg/L,灵敏度为0.12μg/L,批内变异＜5%,批间变异＜15%。回收率为83.8%～118.7%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.999。本方法与免疫放射分析方法的相关方程y=1.07x+0.68,相关系数r=0.97。     

癌胚抗原（CEA）酶联免疫分析试剂盒的研制

以一株CEA单克隆抗体(McAb)用于固相包被,另一株McAb与辣根过氧化物酶偶联制备抗CEA酶标记物,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,采用二步法,制备了CEA酶联免疫分析(ELISA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.4μg/L,批内变异系数＜10.0%,批间变异系数＜15.0%,回收率为99.4%～108.7%,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参考值＜10.0μg/L.该方法具有简便、快速和准确的特点,适用于临床检测和科研应用.