干酪乳杆菌蛋白酶的性质研究

干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei,Lc）6033经增菌培养、超声波破碎、高速冷冻离心后获得粗酶液,并经70%～80%饱和度范围的硫酸铵分级沉淀初步提纯,酶活力回收率（OD275）为9.71%,酶液最适pH为6.5左右、最适温度为40℃,Co2+、Mn2+能显著增强酶液活力;Cu2+、Fe3+、乙二胺四乙酸（EDTA）和苯甲基磺酰氟（PMSF）对酶液有较强的抑制作用;而Zn2+、碘乙酸和β-巯基乙醇的抑制作用较轻微。可见,酶液中可能含金属酶、丝氨酸酶及巯基酶等多种蛋白酶。      

干酪乳杆菌蛋白酶的性质研究

干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei,Lc)6033经增菌培养、超声波破碎、高速冷冻离心后获得粗酶液,并经70%～80%饱和度范围的硫酸铵分级沉淀初步提纯,酶活力回收率(OD275)为9.71%,酶液最适pH为6.5左右、最适温度为40℃,Co2 、Mn2 能显著增强酶液活力;Cu2 、Fe3 、乙二胺四乙酸(EDTA)和苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶液有较强的抑制作用;而Zn2 、碘乙酸和β-巯基乙醇的抑制作用较轻微。可见,酶液中可能含金属酶、丝氨酸酶及巯基酶等多种蛋白酶。     

干酪乳杆菌蛋白酶的分离与性质鉴定

干酪乳杆菌(Lactobacillus casei,Lc)6033经增菌培养、超声波破碎、高速冷冻离心后获得粗酶液,并经70%～80%饱和度范围的硫酸铵分级沉淀初步提纯,酶活力回收率(OD275%)为9.71%;酶液最适pH值为6.5左右、最适温度为40℃,Co2+、Mn2+能显著增强酶液活力,Cu2+、Fe3+、乙二胺四乙酸(EDTA)和苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶液有较强的抑制作用,而Zn2+、碘乙酸和β-巯基乙醇的抑制作用较轻微,可见酶液中可能含金属酶、丝氨酸酶及巯基酶等多种蛋白酶.     

干酪乳杆菌蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

采用超声波法和液氮研磨法提取了干酪乳杆菌菌体蛋白质,通过固相pH梯度等电聚焦双向电泳对蛋白质进行分离,并分别利用硝酸银和考马斯亮蓝方法进行染色.对上述不同方法比较结果显示,超声-三氯乙酸/丙酮提取蛋白质方法简便易行,适用于快速制备蛋白质样品,液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法更适合干酪乳杆菌大规模蛋白质提取及组学检测,并且在制备的过程中不发生明显的蛋白质降解的现象.利用液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法制备的干酪乳杆菌蛋白质样品分离效果良好,可获得重复性好和高分辨率的双向电泳图谱,便于后续的质谱及差异蛋白质组的分析,值得同行及相关研究者参考和借鉴.     

干酪乳杆菌对数生长期与稳定期蛋白质组比较分析

研究建立干酪乳杆菌Lactobacillus casei XM2-1的蛋白质组双向电泳表达图谱,比较其在对数生长中期与稳定期初期的图谱差异。结果表明：有16个蛋白质点表达发生明显变化,经过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱鉴定,其中有7个蛋白质点鉴定为应激蛋白质,分别为GroEL、DnaK、Hsp 20-1、Hsp 20-2和UspA蛋白质。可见,应激蛋白质可能在L.casei XM2-1稳定期对外界环境的抵御能力增强起到重要作用。     

干酪乳杆菌胞壁蛋白酶提取条件优化及其水解特性研究

干酪乳杆菌细胞壁蛋白酶是其蛋白水解系统中一个关键的蛋白酶.采用Ca2+-free法研究干酪乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取方法,确定其最佳实验条件.菌体用含有30 mmol/L CaCl2的50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.0)缓冲液洗涤3次,然后用含有50.03 mmol/LEDTA-Na2的50 mmol/LTris-HCl(pH6.98)缓冲液悬浮,39.75℃保温,60 min后取出离心(4 500 r/min、20 min、4℃),上清液即粗酶液.用粗酶液与纯化后的酶分别水解各种酪蛋白,粗酶较纯化后的酶能产生更高的ACE抑制能力,而纯化后的酶水解β-酪蛋白产生的抗ACE活性能力最强.     

干酪乳杆菌高浓度培养的初步研究

通过选择不同中和剂调酸、补料培养等方法研究了干酪乳杆菌的高浓度培养条件.结果表明初始培养基不调酸,在培养过程中,采用饱和Ca(0H)2作为中和剂,通过调酸碱控制pH值在6.3～6.6之间,不进行补料培养,干酪乳杆菌菌数达到109/mL,可用于菌粉的干剂制造中.     

干酪乳杆菌发酵过程的研究

发酵过程中干酪乳杆菌(L.casei)经过约12h由迟滞期后进入对数期,并保持几何增长直至发酵终点(72h),终点活菌数为(2.21±0.14)×1012g-1。发酵开始pH值为6.42±0.05,发酵终点pH值降至3.7±0.01。pH值降到6.30±0.01时,黏度开始变大且在发酵后期处于稳定状态。发酵过程中发酵乳中的氨基酸态氮的质量浓度从(0.022±0.002)g/100mL升至(0.0389±0.0005)g/100mL。     

干酪乳杆菌粉末发酵剂的研制

研究了干酪乳杆菌粉末发酵剂的制备及活化的条件.将高浓度培养后的干酪乳杆菌离心浓缩,以10%脱脂乳加2.7%甘油作保护剂制成悬浮液后冷冻干燥,采用4%脱脂乳粉作为活化液,活化时间150min,在此条件下粉末发酵剂活化完全,活力恢复较好.     

一种植物乳杆菌对干酪模型成熟中微生物及蛋白质水解的影响

采用无菌条件下生产的新鲜干酪凝块制作干酪模型,以WSN,12%TCASN和氨基酸含量等为指标测定植物乳杆菌SP-3对其的促熟作用。微生物测定表明SP-3在干酪模型的成熟过程中(12d)能保持较高的浓度;WSN结果表明SP-3对干酪中蛋白质的初级水解无显著影响;12%TCASN的结果表明SP-3影响了干酪中小肽的形成;5%PTA-SN和总游离氨基酸浓度测定结果表明植物乳杆菌SP-3促进了体系中游离氨基酸的产生;游离氨基酸的分析显示谷氨酸、亮氨酸、组氨酸的含量明显高于对照组,而丝氨酸、赖氨酸、脯氨酸的含量低于对照组。以上结果表明,植物乳杆菌SP-3能加快干酪体系中蛋白质的水解进程,具有促进干酪成熟的作用。     

干酪乳杆菌KM-16的筛选及其降胆固醇活性研究

从西藏传统发酵乳(西藏灵菇)中分离筛选到1株高效降胆固醇乳酸菌KM-16。应用VITEK-32全自动微生物分析系统鉴定该菌为干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)。在液体培养基中KM-16乳酸菌对降胆固醇达51.8%。用KM-166灌胃高脂血症模型小鼠研究其对血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)的影响。结果表明,灌胃14d后,实验组小鼠血清中TC、TG浓度较对照组显著降低(P<0.01),同时HDL-C浓度有所增加,动脉硬化指数(AI)低于对照的水平。     

干酪乳杆菌LCR6013中NiR和电子供体的分离纯化及其协同降解亚硝酸盐

干酪乳杆菌LCR 6013经10.00 mg/L的亚硝酸钠诱导和溶菌酶破壁,粗酶溶液分别经过30%和60%饱和硫酸铵溶液分级沉淀,沉淀被溶解和透析后分别得蛋白液Ⅰ和蛋白液Ⅱ,通过阴离子DEAE Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶G-100层析柱分离纯化。蛋白液Ⅱ纯化得亚硝酸盐还原酶蛋白(NiR),在加入细胞色素C才能降解亚硝酸盐,LCR6013的每升发酵液得到0.54 mg活性酶蛋白,其NiR比酶活为1851.20 U/mg,得率为2.08%,纯化后其NiR比活力提高16倍,经SDS-PAGE电泳确定LCR6013 NiR的单体分子质量约为45 ku。同时,由蛋白液Ⅰ纯化的蛋白加入LCR6013的NiR中,表现降解亚硝酸盐的活力,经鉴定为电子供体蛋白(El D),经SDS-PAGE电泳确定LCR6013中ElD的单体分子质量约为13 ku,与细胞色素C的单体分子质量相同。LCR6013的ElD、细胞色素C、FeSO_4和Na_2SO_3分别协同NiR能在48 h内将75.00 mg/L的亚硝酸钠完全降解,而LCR6013的ElD和细胞色素C降解效果最好。     

干酪乳杆菌KW3产胞外多糖的研究

从西藏农家开菲尔粒中筛选出1株高产胞外多糖(EPS)的乳酸菌KW3,生理生化试验和16S rDNA测序结果经鉴定其为干酪乳杆菌,在乳清培养基中的胞外多糖产量达到178mg/L。体外抗氧化试验表明:KW3胞外多糖总还原力达到(138.28±5.35)mgVC/g;当其质量浓度达到200μg/mL时,对DPPH自由基的清除率37.53%,FRAP值为(600.16±15.23)FeSO4.7H2Oμmol/L。体内抗氧化试验显示KW3胞外多糖可显著降低衰老小鼠血清、肝和脑组织中的MDA含量,提高其SOD活性和GSH-Px活性。     

干酪乳杆菌胞外多糖LCP1的流变性研究

通过对干酪乳杆菌LC2W胞外多糖LCP1溶液流变性质研究发现,高浓度LCP1溶液呈剪切变稀,低浓度时,剪切速率对黏度没有影响,溶液黏度随温度升高下降明显,pH对LCP1溶液黏度影响很小,盐可以降低LCP1溶液黏度,但黏度降低与盐浓度有关,通过黏弹性研究发现LCP1水溶液不能形成胶体,乌氏黏度计测得LCP1水溶液固有黏度[η]为1.930 dL/g。     

Stress Responses in Probiotic Lactobacillus casei

Survival in harsh environments is critical to both the industrial performance of lactic acid bacteria (LAB) and their competitiveness in complex microbial ecologies. Among the LAB, members of the Lactobacillus casei group have industrial applications as acid-producing starter cultures for milk fermentations and as specialty cultures for the intensification and acceleration of flavor development in certain bacterial-ripened cheese varieties. They are amongst the most common organisms in the gastrointestinal (GI) tract of humans and other animals, and have the potential to function as probiotics. Whether used in industrial or probiotic applications, environmental stresses will affect the physiological status and properties of cells, including altering their functionality and biochemistry. Understanding the mechanisms of how LAB cope with different environments is of great biotechnological importance, from both a fundamental and applied perspective: hence, interaction between these strains and their environment has gained increased interest in recent years. This paper presents an overview of the important features of stress responses in Lb. casei, and related proteomic or gene expression patterns that may improve their use as starter cultures and probiotics.     

干酪乳杆菌细菌素的抗菌机制分析

目的：分析和预测干酪乳杆菌细菌素基因及其编码蛋白的分子结构和理化性质,明确细菌素的抗菌机制。方法：利用生物信息学软件进行细菌素编码蛋白的结构预测和功能分析,采用氨基酸定点突变技术对预测的氨基酸位点进行点突变,检测突变体的抗菌活性。结果：干酪乳杆菌细菌素（LacA和LacB）属于热稳定、分泌信号肽的跨膜蛋白,LacA蛋白存在典型的抗菌结构域GxxxG,构建LacA蛋白中第40位V和第57位I的突变载体,两个位点中任何一个发生突变都明显影响细菌素的抗菌活性。结论：推测V40和I57是干酪乳杆菌细菌素发挥抑菌活性的关键氨基酸位点,为今后探索干酪乳杆菌细菌素（class IIb）抗菌机制提供理论依据。     

益生乳酸菌Lactobacillus casei Zhang从基础研究到产业化开发

2001年-2009年,内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室从采集自中国西部7个省市及蒙古国14个省市不同少数民族地区951份自然发酵乳制品等样品中分离鉴定出3 388株乳酸菌,建立了中国首个原创性乳酸菌菌种资源库;从菌种库中分离自传统发酵酸马奶(koumiss)的243株乳杆菌中筛选获得1株性能优良的乳酸菌—Lactobacillus casei Zhang(L.casei Zhang)。采用5种动物模型和人体试验进行了功能评价,并利用基因组学和蛋白质组学研究技术对L.casei Zhang益生分子机制进行了深入剖析。经过多年系统的基础研究,自主解决了其产业化的关键技术问题,包括其直投式发酵剂、发酵乳制品和发酵豆乳益生菌饮料的研发并实现了产业化。     

自然发酵肉制品中干酪乳杆菌的分离和鉴定

从自然发酵香肠和自制腌肉中分离得到68株乳酸菌,通过对菌株发酵适应性的研究,筛选出2株性能优良,适用于肉制品发酵的乳酸菌C67和R6,初步生化鉴定表明,2株均为干酪乳杆菌。文中还对所获得的菌株的相关发酵性能进行了测试。     

干酪乳杆菌纯种发酵大豆乳培养基的优化调配

从益生菌乳制品中自行分离选育出的生长繁殖力强、发酵活力高的干酪乳杆菌(05-20)为试验菌株,研究了牛乳和蔗糖在大豆乳中的添加量对干酪乳杆菌在大豆乳中发酵的凝乳时间、凝乳时活菌数、pH值、滴定酸度及产品感官风味的影响,通过方差分析确定了发酵培养基中牛乳和蔗糖的最适添加量分别为20%和7%,完成了以大豆乳作为干酪乳杆菌最佳载体的初步探索,为进一步研制开发益生菌发酵大豆乳制品奠定了基础.     

低聚果糖对干酪乳杆菌生长和代谢的影响

为研究干酪乳杆菌体外利用低聚果糖的生长代谢过程,分别以0.5%、1.5%、3%低聚果糖替代0.5%葡萄糖作为培养基碳源,取0、4、8、12、18、24h发酵液测p H、菌落数、代谢产物。结果表明:随着培养时间的延长,培养基中p H降低;0.5%低聚果糖培养基中干酪乳杆菌数量在8h时达到最高值,增加低聚果糖浓度到1.5%,干酪乳杆菌的数量随之增加;继续增加低聚果糖浓度到3%,干酪乳杆菌数量没有明显差异(p>0.05)。干酪乳杆菌代谢低聚果糖在4h时乙酸产量达到最高值,且3%低聚果糖培养基中乙酸产量是0.5%、1.5%低聚果糖的2倍;乳酸产量随着培养时间的延长逐渐积累,3%低聚果糖培养基中乳酸产量最多,干酪乳杆菌利用低聚果糖的主要代谢产物为乙酸和乳酸。