幽门螺杆菌尿素酶的提取与纯化

采用2种方法分离纯化了幽门螺杆菌尿素酶。第1种方法是以 DEAE-sepharose FF离子交换剂和Superdex 200凝胶为分离介质,用 NaCl盐浓度梯度洗脱法从幽门螺杆菌超声上清液中提取纯化尿素酶抗原,所得到的纯化尿素酶经SDS-PAGE电泳分析,表明它具有很高的纯度,只含有分子质量为64 000 u和31 000 u两种蛋白成分,分别对应于幽门螺杆菌尿素酶的A、B两种亚基。第2种方法是以 DEAE-sepharose FF离子交换剂为分离介质,采用先去掉部分杂蛋白的方法纯化尿素酶,其中的去杂步骤操作简单、快捷且处理样品量大,大大减轻了后面纯化步骤的难度,适合于尿素酶的大量制备。纯化的尿素酶作为抗原采用ELISA间接法检测抗HP蛋黄免疫球蛋白(IgY),实验表明,其仍具有良好的抗原性,是HP主要抗原物质。应用纯化尿素酶抗原或纯化尿素酶抗原与超声粉碎抗原的混合抗原刺激蛋鸡应该能够产生抗HP效价更高的蛋黄免疫球蛋白,可以将其应用于保健或各种与HP相关的胃病的抗菌免疫治疗。     

吡嗪类化合物抗幽门螺杆菌活性及机制研究

该实验研究了吡嗪类化合物（PYRs）对幽门螺杆菌（Hp）的抗菌活性及作用机制。采用PYRs处理Hp菌液,观察Hp的活性及形态变化;利用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）分析PYRs对Hp基因及相关毒力蛋白表达的影响;检测PYRs预处理Hp对胃黏膜上皮细胞（GES-1）活性、细胞凋亡的影响。结果表明,PYR-19（2,5-二甲基-3-正戊基吡嗪）可抑制Hp增殖,Hp外膜蛋白基因（BabA）和毒力基因（CagA和VacA）的转录及毒力蛋白（CagA和VacA）的表达,Hp诱导的GES-1细胞炎性细胞因子分泌及对GES-1细胞的损伤,减轻Hp对胃黏膜上皮细胞的损伤能力。     

具有拮抗幽门螺杆菌作用的植物乳杆菌特性研究

幽门螺杆菌是螺旋形或是S形的微需氧革兰氏阴性菌,是慢性活动性胃炎、消化性溃疡发病的主要病因,并与胃恶性肿瘤(胃癌、胃粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤)关系密切。本文探讨了具有拮抗幽门螺杆菌作用的植物乳杆菌的生物特性,结果表明L.plantarum 18在低酸条件下可以生长,耐受pH2.5的人工胃液,能够抑制多种幽门螺杆菌的生长。该菌株生长比较快,4h进入生长对数期,14h后进入稳定期;最适生长pH为5～7,最适生长温度为30～37℃,最适接种量为1%～2%(V/V),可在0.2%的胆盐中生长。     

具有拮抗幽门螺杆菌作用的植物乳杆菌特性研究

幽门螺杆菌是螺旋形或是S形的微需氧革兰氏阴性菌,是慢性活动性胃炎、消化性溃疡发病的主要病因,并与胃恶性肿瘤(胃癌、胃粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤)关系密切。本文探讨了具有拮抗幽门螺杆菌作用的植物乳杆菌的生物特性,结果表明L.plantarum 18在低酸条件下可以生长,耐受pH2.5的人工胃液,能够抑制多种幽门螺杆菌的生长。该菌株生长比较快,4h进入生长对数期,14h后进入稳定期;最适生长pH为5～7,最适生长温度为30～37℃,最适接种量为1%～2%(V/V),可在0.2%的胆盐中生长。      

抗幽门螺杆菌乳酸菌的筛选

通过测定干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）的自凝聚、疏水性及抑菌实验来筛选粘附性高、对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）有强抑制作用的益生菌株,并通过干酪乳杆菌与幽门螺杆菌的交互凝集和对幽门螺杆菌尿素酶活性的抑制进一步探讨其抑菌机制。结果表明,在4株干酪乳杆菌中,菌株JY300-8的自凝聚百分比在24 h达到71.7%,比菌株JY、JY160-15、JY300-10分别高19.7%、28.8%、29.6%（P＜0.05）;疏水性百分比为72.3%,比菌株JY、JY160-15、JY300-10分别高4.1%、8.0%、7.5%（P＜0.05）。同时,菌株JY300-8在24 h时的共凝集百分比为64.4%,较菌株JY提高了5.3%;而且菌株JY300-8对幽门螺杆菌尿素酶活性的抑制率达到62.3%。结果表明,在4株干酪乳杆菌中,菌株JY300-8具有良好的益生性能,对胃癌的生物致病菌具有良好的抑制效果,可用于后续胃癌动物模型的研究和抗胃癌的益生菌制剂的开发。     

酱香型白酒中有机酸类成分抗幽门螺杆菌活性及机制研究

为了评价酱香型白酒中的有机酸类化合物(Organic acid compounds,OACs)抗幽门螺杆菌(He-licobacter pylori,Hp)活性及潜在的机制,检测OACs抑制Hp的最小半数抑菌浓度(MIC50)及OACs抑制Hp对GES-1细胞损伤活性的影响;分析OAC-18对Hp脲酶活性的影响;RT-...     

苦瓜水提物抗幽门螺杆菌作用及其浸提工艺研究

为研究苦瓜水提物对幽门螺杆菌的抑制作用,以纸片扩散法的抑菌圈大小为指标,设计正交试验优化苦瓜水提物抗幽门螺杆菌活性的最佳浸提工艺,并进一步探究苦瓜水提物的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和杀菌动力学。结果表明:苦瓜水提物抗幽门螺杆菌的最佳浸提工艺为浸提温度80℃、料液比1:50(g/mL)、浸提时间1.5h。MIC为32 mg/mL;MBC为128 mg/mL;在4倍MIC下杀菌动力学时间为30min。     

食品添加剂对牛初乳免疫球蛋白(IgG)稳定性的影响

探讨了几种常用食品添加剂对牛初乳免疫球蛋白稳定性的影响,根据食品添加剂对IgG的变性率的影响,选择了几种在食品加工中常用的添加剂进行正交试验,考察其相互综合作用。结果表明:随着柠檬酸、乳酸和磷酸二氢钠浓度的增大,免疫球蛋白的稳定性逐渐降低,变性率逐渐增大;山梨酸钾对免疫球蛋白的稳定性影响较小;磷酸氢二钠、乳酸钙、增稠剂和甜味剂对免疫球蛋白有一定的保护作用。添加剂最佳用量为:乳酸用量为0.3%,乳酸钙用量为0.015%,黄原胶用量为0.5%,蔗糖用量为8%,此时IgG的变性率为14.7%,在4℃的贮藏条件下最佳保存期为30天。     

酱香型白酒醇类活性成分抗幽门螺杆菌损伤胃黏膜上皮细胞活性的研究

为研究酱香型白酒醇类活性成分(active alcohols,AAs)抑制幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)损伤胃黏膜上皮(GES-1)细胞活性及潜在的机制,检测了AAs抑制H.pylori的最小半数抑菌浓度(50％minimun inhibitory concentration,MIC50)及苯乙醇...     

茶多酚与葡萄多酚协同抑制幽门螺杆菌的研究

采用含毒介质法测试不同浓度茶多酚和葡萄多酚对幽门螺杆菌（H．pylori）的体外抑制效果，并将茶多酚与葡萄多酚以不同比例混合，测试两种物质对H．priori抑制效果是否具有协同效应，结果表明，一定比例混合的茶多酚与葡萄多酚对于体外抑制幽门螺杆菌具有增效作用，当混合物中以不同浓度的茶多酚与2mg／mL的葡萄多酚配伍时，增效效果明显；而以不同浓度的葡萄多酚与0．08mg／mL的茶多酚配伍时，增效效果显著。     

酸法提取猪胃蛋白酶的工艺研究

目的：优化猪胃蛋白酶的酸法提取工艺。方法：在单因素试验的基础上,应用二次回归正交旋转组合设计,以猪胃蛋白酶活力为指标,建立猪胃蛋白酶活力与盐酸浸提液量、盐酸浓度、提取温度、浸提时间等因素间的数学模型。结果：回归模型较好的反应了猪胃蛋白酶活力与盐酸浸提液量、盐酸浓度、提取温度、浸提时间的关系;酸法提取工艺最佳条件为：浸提液量6.2ml、盐酸浓度1.6%、温度45℃、浸提时间59.9min,提取的猪胃蛋白酶粗酶液活力可达4751.0U/g。结论：本方法可作为天然猪胃蛋白酶的提取工艺。     

磁性壳聚糖微球固定化胃蛋白酶的研究

利用反相悬浮交联法制备壳聚糖微球,然后采用化学共转化法制备了磁性壳聚糖微球(magnetic chitosan microspheres,M-CS),并对胃蛋白酶进行固定化研究。结果表明,制备的M-CS呈规则圆球形,有很好的磁响应性,并且在弱酸弱碱环境下能稳定保存。磁性壳聚糖微球对胃蛋白酶的吸附性实验表明,磁性壳聚糖微球能吸附胃蛋白酶,可是吸附胃蛋白酶的量受到载体与酶比例、溶液的离子浓度、溶液的pH值影响很大。胃蛋白酶动力学性质研究表明,相对于游离的胃蛋白酶,固定化后的酶的最适温度有所升高,最适温度在60℃、酸碱稳定性略有改善,最适pH4.0,故固定化后的酶的热稳定性和酸碱稳定性都得到明显改善。     

酪蛋白水解肽对家兔细胞因子的影响

为了探索酪蛋白水解肽对家兔血清中IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-1ra、IL-4、IL-10、TGF-β细胞因子的影响,采用胰蛋白酶水解得到酪蛋白水解物溶液,经超滤后得酪蛋白水解肽。将所得水解多肽以3种方式(口服、腹腔注射、耳静脉注射)对家兔给药,分别在给药3、2、2h后,用ELISA试剂盒测定血清中IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-1ra、IL-4、IL-10、TGF-β细胞因子的浓度。结果表明,各种作用方式IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β在家兔体内的含量都明显上升,但腹腔注射酪蛋白水解多肽较其他方式作用明显,而IL-1β、IL-1ra、IL-12、IFN-γ的含量降低,最明显的作用方式为腹腔注射,说明酪蛋白水解肽通过肠黏膜系统对细胞因子网络起着重要的调节作用。从给药途径看,腹腔注射的作用效果最为显著,其次是静脉注射,口服灌胃虽达到显著水平,但变化相对较小。说明酪蛋白水解肽主要是通过肠黏膜发挥作用,可通过制备肠溶性保健食品调节人体亚健康,同时为营养组学得研究奠定基础。     

饱和硫酸铵法提取血清中IgG最佳条件的研究

利用饱和硫酸铵法对牛血清中的免疫球蛋白进行分离提取。得到免疫球蛋白的粗提物，研究不同单因素对IgG质量浓度厦IgG纯度的影响，确定最佳提取参数如下：提取温度为50℃，静置时间为50min，血清-PBS比例2：1（体积比），缓冲溶液pH值7．4，离心机转速4500r／min。     

猪胃蛋白酶制备新鲜干酪及其特性分析

以新鲜猪胃黏膜为原料,提取并初步纯化得到猪胃蛋白酶(PPe),分别从化学成分、产率、质构3 方面研究PPe 在新鲜干酪中的作用效果。结果表明：在化学成分上,PPe 优于微生物凝乳酶,尤其中剂量效果最好;在质构特性方面,PPe 制得的干酪比微生物凝乳酶及市售猪胃蛋白酶制得的干酪更接近皱胃酶(CR)制得的干酪,且高剂量PPe 制得的干酪硬度、弹性、内聚性、胶黏性和咀嚼性均与小牛皱胃酶制得的干酪无显著差异(P ＞ 0.05)。PPe 优于微生物凝乳酶及市售猪胃蛋白酶,可以作为小牛皱胃酶的替代物应用于新鲜干酪的生产。     

鹅血中SOD、IgG的提取工艺研究

鹅血是家禽食品加工时的下脚料。试验对鹅血的血红蛋白和血清分别提取SOD、IgG的工艺方法选择优化;将提取的粗制品分别冷冻干燥,再混合为成品。提高了鹅血开发利用价值,将方便某些癌症患者的治疗或缓解化疗反应,有一定的实用价值。     

Whey Protein Antigenicity Reduction by Fungal Proteinases and a Pepsin/Pancreatin Combination

Whey protein components were hydrolyzed with Corolase 7092? (peptidases from Aspergillus strains), pepsin and Corolase PP? (a mixture of pancreatic enzymes), either individually or in combination, in trials to eliminate protein allergenicity. The hydrolysates were characterized by physico-chemical and by immunological techniques using sera from patients allergic to milk proteins. Enzyme specificity rather than degree of hydrolysis or molecular mass distribution of hydrolysates determined the residual antigenicity of the whey proteins. Ultrafiltration was a prerequisite for obtaining hypoallergenic whey protein hydrolysates.     

羊初乳免疫球蛋白(IgG)稳定性的研究

研究了酸、碱、糖、加热对羊初乳中免疫球蛋白（IgG）稳定性的影响.结果表明,IgG在pH值为5.0～10.0范围内比较稳定,在pH值为低于5.0条件下,随pH值降低,变性率剧烈上升;在加热或pH2.0的环境下,糖醇化合物对IgG具有保护作用,随着糖类浓度的升高IgG的变性率降低,其中蔗糖、果糖、麦芽糖的效果较好,葡萄糖、乳糖的效果较差;羊初乳中IgG对加热比较敏感,随着加热温度的上升,其变性率增大.于55℃加热30 min,变性率为25.5%;于65℃加热30 min,变性率为38.1%;于75℃加热7 min时,变性率已达100%;于85℃加热2.0 min时变性率也已达100%.     

胃蛋白酶提取猪皮胶原蛋白的工艺优化与过程模拟

实时检测胃蛋白酶提取猪皮胶原过程中的羟脯氨酸含量,通过计算机软件的处理和模拟,进一步优化胃蛋白酶提取猪皮胶原的工艺条件,同时推测胃蛋白酶的一些重要特性。分别在水解0、2、6、10、14、18、22、26h时,对4组不同胃蛋白酶用量(分别为1%,2%,2·5%,3%)的试样取样检测。采用一阶Hill方程可以较好地模拟胃蛋白酶提取猪皮胶原蛋白的进程,并且符合米氏方程的特征;用一阶指数衰减方程则可以表征胃蛋白酶水解速率的衰减过程。最后得出2%的胃蛋白酶用量和6~7h的水解时间较为合理。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对米糠蛋白体外胃蛋白酶消化性质的影响

研究表没食子儿茶素没食子酸酿(Epigallocatechin gallate,EGCG)对米糠蛋白(Rice bran protein,RBP)体外胃蛋白酶消化性质的影响.结果表明,随着EGCG添加量的增加,RBP的初始消化速率和消化率逐渐下降.电泳结果显示,EGCG通过诱导RBP形成共价交联聚集体影响RBP消化性,...