固相化胃蛋白酶在抗毒素生产中的应用

以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，将胃蛋白酶固定在载体上，制备成固定化胃蛋白酶。该固相胃酶在固定化过程中酶活性损失较少，回收率高，稳定性好，并可在生产中重复使用。将其代替液相胃酶用于抗血清类制品的生产，其消化所需条件与现有的生产条件无明显差异，但可克服液相胃酶的缺点，在适宜的温度、时间、pH等条件下，取得理想的效果。     

Cu(Ⅱ)螯合壳聚糖磁性微球固定化胃蛋白酶的制备及性能研究

将Cu(Ⅱ)螯合壳聚糖磁性微球用作固定化胃蛋白酶的载体,讨论了固定化时间、pH值和给酶量对酶固定化的影响.确定最适固定化条件为:固定化时间1.0 h、pH值4～5、给酶量150 mg·(g载体)-1.与自由酶比较,固定化胃蛋白酶的催化特性和稳定性均令人满意.     

氨基树脂固定胃蛋白酶的方法及性质研究

采用氨基树脂作为载体,戊二醛作为交联剂,对胃蛋白酶的固定化进行了研究,并对固定化条件和固定化胃蛋白酶的部分酶学性质进行了分析。确定固定条件为：戊二醛浓度为5%,载体处理温度为室温（25℃）,处理时间为5h,m（胃蛋白酶）：m（氨基树脂）为1：25,pH为3.0,固定时间为12h。此条件下固定化的胃蛋白酶活力为30U/g,酶的活力回收率为60%。与非固定化相比最适水解温度由50℃升高到60℃,最适pH值由2.0升高到4.0,游离酶米氏常数3.08g/L,固定化酶米氏常数1.2g/L,固定化胃蛋白酶的储存半衰期约为25天。对珠蛋白的操作半衰期为9天。     

固定化酶技术及其载体材料研究

固定化酶技术已经成为酶应用领域中的一个重要研究方向，此技术可以有效地提高酶的催化性能和操作稳定性，为酶在大规模生产中提供有利条件。载体作为固定化酶技术的关键组成部分，其材料的选择对于固定化酶技术的性能至关重要。本文对比了目前载体材料的特点并总结了固定化酶筛选方法，以期为后续固定化酶技术的研究提供基础。     

反胶束体系中固定化胃蛋白酶的催化性质研究

将胃蛋白酶加至CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)/环己烷/正辛醇反胶束体系中得到固定化胃蛋白酶,研究了反胶束含水率、乙醇体积分数对固定化胃蛋白酶活力的影响,并对固定化胃蛋白酶和游离胃蛋白酶的催化性质进行了比较研究.结果表明,反胶束含水率为12％、乙醇体积分数为30％时,固定化胃蛋白酶的活力达到最佳;固定化胃蛋白酶和游离胃...     

淀粉载体固定化酶的研究

双醛淀粉是一种淀粉的衍生物，价廉无毒，可作为直接法固定化酶的良好载体。研究ｐＨ值，载体醛基含量，淀粉与酶的重量比，时间以及温度等条件对于固定化酶的影响，以寻求最佳反应条件。固定化酶的稳定性优于原酶，其Ｋｍ值比相应的原酶高。     

固定化胃蛋白酶的工艺优化

利用海藻酸钠-壳聚糖对胃蛋白酶进行固定化,以酶活回收率为指标,探讨不同的氯化钙浓度、固定化时间、游离胃蛋白酶稀释倍数、海藻酸钠浓度对固定化胃蛋白酶效果的影响。采用响应面分析法进行固定化工艺优化。结果表明:海藻酸钠浓度最佳固定化浓度为0.9%,游离酶稀释倍数为10倍,氯化钙浓度为3.6%,固定化时间为1.5 h,该条件下固定化酶的酶活回收率为73.42%,连续反应5次,相对酶活力仍为61.20%。     

酶自固定化方法研究进展

固定化酶有诸多优势,传统酶固定化方法通常需要外界辅助,但额外的固定化流程无疑会增加酶使用成本。近年来提出的酶自固定化则可在温和条件下实现自身固定化,简化固定流程,为降低酶的成本、促进酶的广泛应用提供了新思路。本文系统、深入介绍了无载体类型、自催化类型和自结合类型酶自固定化的方法,并指出其各自特点：无载体类型无需载体成本;自催化类型能有效降低载体成本,获得机械强度较高的固定化酶;自结合类型可在温和条件下易实现多酶固定。结合本文作者课题组的相关研究,阐述了酶自身催化的自固定化和蛋白或多肽介导的融合酶自固定化最新研究进展。最后指出当前研究的重点应致力于自固定化新方法的研发,为后期理性选择、合理组合自固定化方法奠定基础,以加快自固定化酶实际应用。     

环氧树脂固定化拟南芥腈水解酶NIT的研究

游离酶不易回收,很难重复利用,而固定化酶重复利用度高。利用LX-1000EP(C)环氧树脂作为载体对腈水解酶进行固定化,研究了其最优固定化条件及其稳定性。最佳固定化条件为:固定化温度为20℃,固定化过程中缓冲液为磷酸钾缓冲液,pH8.0,浓度为0.1mol/L,加量为每克载体加10mL的粗酶液。固定化腈水解酶的最高酶活回收率达到98.1%,固定化酶在重复使用6次后,酶活仍能保持在初始酶活的30%以上。     

黏土吸附法固定化脂肪酶的初步研究

为研究天然黏土为载体固定化脂肪酶的可行性,采用羟基化、硅烷化处理,对黏土进行改性,并以此为载体吸附固定化脂肪酶,探讨黏土固定化脂肪酶的条件对酶活及蛋白吸附量的影响,优化固定化脂肪酶条件。研究结果表明:黏土经羟基化、硅烷化改性处理后能显著提高固定化酶活和蛋白固定量,其中硅烷化改性最优;载体固定脂肪酶最优条件为:加酶量50 mg/g,载体粒径180—250μm,pH值为4.0,固定化温度25℃,固定化时间2.0 h;与游离酶相比,固定化酶显示出更广的pH值适应性。黏土固定化脂肪酶重复使用10批次后,仍能保留76.85%的初始活力。以天然黏土为载体固定化脂肪酶,具有较好的实际可应用性及操作稳定性,在较低pH值条件下应用具有一定优势。     

载体固定化酶的应用及前景展望

载体固定化酶可以提高酶的稳定性,并可大大提高回收利用率。固定化酶的载体从传统类型向新型发展,传统类型主要是天然高分子产物,新型载体主要包括人工合成高分子材料、无机新型材料、智能型载体等。载体可通过化学或物理方法固定到酶上,化学方法主要是共价键结合法和交联法;物理方法包括吸附法、包埋法、热处理法。载体固定化酶在生物医学、食品行业、环境工程中具有广泛的应用前景,其发展将和互联网、大数据联系起来。     

假丝酵母产脂肪酶在壳聚糖和硅胶上的固定化研究

本实验分别壳聚糖和氨基化后的硅胶作为固定化载体,用戊二醛作为交联剂,将脂舫酶共价固定化于载体上,壳聚糖的最佳固定化条件是戊二醛浓度2．5％,给酶量为4125U／g,氨基化硅胶的最佳固定化条件为戊二醛浓度2％,最佳给酶量在3456U／g,固定化酶活为2952U／g,最佳酶活表现率为85％。两种方法所得的固定化酶的耐温性和储藏稳定性都有了显著提高。氨基化硅胶固定化酶在50℃下保温3小时后仍保留有14％的酶活。结果显示假丝酵母产脂肪酶固定于弱亲水性载体上要比固定于强亲水性载体上效果更好。     

大孔载体固定化脂肪酶

用自制大孔载体固定化脂肪酶,对固定化条件进行了优化,比较了固定化酶与游离酶的酶学参数. 结果表明,酶粉与载体质量比为1:1、固定化温度在20~25℃之间、固定化时间1.5 h的条件下,所得固定化酶的酶活最高. 固定化酶的最适pH为8.5,最适温度为40℃,其热稳定性、操作稳定性都比游离酶高,4℃下保存7 d后,酶活仍剩余94%.     

磁性中性蛋白酶的固定化研究

为了克服游离酶在实际工业生产中稳定性不好、活性易丧失、不易回收、重复利用率较低的缺点,对中性蛋白酶进行了固定化研究。将具有磁性的二氧化硅包覆的Fe_3O_4(Fe_3O_4@SiO_2)材料作为载体进行中性蛋白酶固定化实验。考察了交联剂戊二醛的质量分数、交联时间、给酶量、固定化时间、温度和酸碱度对于固定化酶活力的影响,筛选出最佳固定化条件。结果表明,在交联剂质量分数为3%,交联时间为2 h,给酶量为0.20 g/g,固定化时间为3 h的条件下,固定化中性蛋白酶的活性最好。固定化酶的最适温度为50℃,固定化酶的最适pH为7.5,而且一定范围内其热稳定性和pH稳定性都比游离酶有所提高。     

α-淀粉酶在MCM-41介孔分子筛上的固定化研究

采用浸渍法将α-淀粉酶固定在介孔分子筛MCM-41上。考察了吸附时间、给酶量和pH对α-淀粉酶固定化性能的影响,并对固定化酶的活性、稳定性和载体结构等进行了研究。结果表明,在固定化时间为11 h,给酶量为70 mg.g-1,pH=5.9的条件下,固定化酶活性回收率可达48%。与游离酶相比,固定化酶的耐热能力增强,温度达到70℃时,固定化酶相对活性可达到75%,而游离酶只有14%;在pH=3.3～8.0的内,固定化酶相对活性为62%～100%,而游离酶的相对活性为5%～100%,固定化酶具有更宽的pH适应性;此外,固定化酶储存稳定性明显增强,并具有一定的可重复操作性,且固定后载体仍然保持了良好的介孔结构。     

Burkholderic cepecia 1003产海因酶固定化条件

海因酶是利用海因酶法制备手性氨基酸的关键酶。采用Eupergit C、Eupergit C250 L及其氨基化后的载体作为固定化介质,对酶液pH值、蛋白浓度、固定化时间以及EDC用量等参数对海因酶固定化过程的影响进行研究,并在实验范围内,得到了上述参数的最优值。研究表明,环氧基载体的最适固定化条件为:酶液pH值为7.0,酶液蛋白质量浓度为0.4 mg/mL,固定化时间为20 h;氨基载体最适固定化条件为:酶液pH值为8.0,酶液蛋白质量浓度为0.4 mg/mL,固定化时间为10 h,EDC用量:Eupergit C(NH2)为70μL,Eupergit C250 L(NH2)为120μL。其中以Eupergit C250 L为固定化载体,海因酶的活性回收率可高达87%,且固定化酶的稳定性也较好,酶活半衰期长达2 500 h左右,具有较好的稳定性。     

磁性壳聚糖微球的制备及其用于甲酸脱氢酶的固定化

分别采用乳化交联法和共沉淀法制备磁性壳聚糖微球载体,并对形貌结构进行比较,结果表明,采用共沉淀法制备的磁性壳聚糖微球负载Fe3O4的效果好,故将其作为载体固定甲酸脱氢酶。最佳固定化条件:添加酶量9 U.g-1,pH=7.0,固定化时间5 h。游离酶和固定化酶的最适宜反应温度分别为50℃和30℃;游离酶的最适宜pH=7.0,固定化酶的最适宜pH=6.0;将游离酶和固定化酶分别置于60℃恒温水浴放置180 min后,游离酶和固定化酶的相对酶活力分别为0.78%和40.39%;将游离酶和固定化酶置于不同pH的缓冲液中保存1 h后,在强酸(pH=2.0)和强碱(pH=10.0)条件下,固定化酶的相对酶活力分别为11.03%和38.43%,游离酶已全部失活;固定化酶重复使用6次后,相对酶活力为73.53%,表明固定化酶具有较好的热稳定性、酸碱稳定性和操作稳定性。     

固定化葡萄糖氧化酶的研究

用对苯二酚和甲醛在酸性条件下制得新一类凝胶，此凝胶可作为载体对多种酶及蛋白质给予固定。本文研究了对葡萄糖氧化酶的固定，在最佳条件下固定的固化酶，其酶活可达760U／g（干载体）；同时研究了固化酶的热稳定性，结果表明固定化葡萄糖氧化酶具有较好的稳定性及应用前景。     

融合蛋白CR2-GDH固定化及不对称还原制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

比较介孔分子筛材料SBA-15、MCM-41、海藻酸钙、改性二氧化硅4种载体固定化融合蛋白CR2-GDH其酶固载量和酶活回收率,选择SBA-15为固定化载体。研究固定化条件对固定化融合酶量的影响以及固定化酶的稳定性,固定化酶在双相体系催化不对称还原反应。结果表明,在pH值为5.5、酶浓度为1.4mg/mL、反应1h条件下,固定化酶量为27.7mg/g。加入25mmol/L的Ca²⁺,固定化酶的酶活回收率由58.6%提高到78.1%。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性显著提高,40℃条件下酶活回收率提高19.1%。固定化酶水相中反复使用7批次后,剩余活性仍超过30%,具有较好的操作稳定性。与游离酶相比,固定化酶更耐受烷烃类有机溶剂。在水/有机溶剂双相反应体系中,Ca²⁺/SBA-15固定化酶和游离酶催化相比,产物得率提高23.8%。     

海藻酸钠-明胶协同固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

以海藻酸钠和明胶为载体,对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行固定化。再用戊二醛对其进一步交联,增强固定化酶的稳定性。考察了海藻酸钠和明胶质量分数、CaCl2质量分数、酶和载体比例以及交联剂戊二醛体积分数等因素对固定化酶的影响。结果表明,最佳固定化条件为:海藻酸钠质量分数2.0%、明胶质量分数1.0%、CaCl2质量分数4.0%、固定化酶量为2.5 g/L凝胶、戊二醛体积分数0.6%。交联固定化酶热稳定性得到大幅度提高,在50℃下保温5 h仍保留72%的活力,而游离酶则完全失活。交联固定化酶在碱性溶液中的稳定性较高,在pH=8.0～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留87%以上。将交联固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应8批次后酶活性仍保留65%。