均匀设计优选双酶法分步水解甲鱼蛋白质最佳条件

采用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶2种酶分步水解技术,对甲鱼蛋白质进行水解.利用均匀设计法研究上述2种酶分步水解甲鱼蛋白质的最佳工艺条件为:原料∶水=1∶3.5,木瓜蛋白酶用量18.0 g·kg-1,温度50 ℃,pH值6.9,水解时间5.5 h;而胰蛋白酶用量28.0 g·kg-1,温度50 ℃,pH 7.5,水解时间4 h.所得水解液的氨基氮含量为7906.5 mg·kg-1,水解液游离氨基酸的含量为626.7 mg·(100 mL)-1,其中必需氨基酸的含量为211.35 mg·(100 mL)-1.     

首批Vero细胞蛋白质标准品的研制

目的制备首批Vero细胞蛋白质国家标准品,用于人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主残留量检测。方法采用Vero细胞分泌蛋白质为原料,加入蔗糖冻干制成Vero细胞蛋白质国家标准品。本标准品的赋值由两步完成:第一步采用Lowry法对Vero细胞蛋白质标准品原液进行蛋白含量测定;第二步采用酶联免疫法以Vero细胞蛋白质标准品原液绘制标准曲线对标准品进行蛋白含量赋值。随机选取16支蛋白质标准品,测定pH值,采用方差分析统计检验其均匀性;随机选取标准品,分别在不同温度(4、25、37℃)下放置不同时间(1、2、3和4周),各时间点取3支,酶联免疫法检测抗原含量,采用方差分析统计检验其稳定性。结果经协作标定,Vero细胞蛋白质标准品的标示量为2.6μg/mL,标准偏差为0.4,95%可信区间为2.51～2.78μg/mL。该批标准品的均匀性及稳定性良好。结论目前该Vero细胞蛋白质标准品已获批使用,批号为250022-201901,该标准品的建立,对提高人用狂犬病疫苗的质量控制具有重要意义。     

首批Vero细胞蛋白质对照品的研制

目的建立首批Vero细胞蛋白质国家对照品,用于人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主蛋白残留量检测试验的验证。方法本对照品系采用狂犬病病毒固定株接种Vero细胞,经培养、收获、浓缩、灭活病毒、纯化后,加入适量的人血白蛋白、右旋糖酐40冻干制成。本对照品蛋白含量溯源于Vero细胞蛋白质标准品(250022-201901),应用Vero细胞分泌型蛋白检测试剂盒(ELISA)对其进行标定后赋值。随机选取16支标准品,测定其pH值,采用方差分析统计检验均匀性;随机选取对照品,分别在4、25和37℃放置不同时间(1、2、3和4周),不同时间点取3支,以Vero细胞蛋白质标准品(250022-201901)绘制标准曲线,ELISA法测定蛋白含量,采用方差分析统计检验稳定性。结果经协作标定,本对照品标示量值为7.7μg/mL,参考范围为(7.7±3.6)μg/mL,均匀性及稳定性良好。结论Vero细胞蛋白质对照品已获批使用,批号为250023-201901,该对照品的建立,对加强人用狂犬病疫苗的质量控制具有重要意义。     

高效液相色谱法检测蛋白改性纤维中的氨基酸

采用酸水解、衍生的提取方法,建立了一种测定四种蛋白改性纤维中氨基酸含量的液相色谱(HPLC)分析方法。大豆蛋白改性聚乙烯醇纤维(SPPAF)、牛奶蛋白改性聚丙烯腈纤维(ASFMP)、粘胶基牛奶蛋白纤维(VBMPF)、蚕蛹蛋白改性黏胶纤维(PPMVF)。实验结果表明,氨基酸回收率为95.8%~117.8%,相对标准偏差为1.1%~6.57%,方法检出限为0.625μmol/g,定量限为2.5μmol/g,该方法准确度和精密度均较高,各峰分离较好,能够满足蛋白改性纤维类氨基酸含量的检测要求。     

动物毛发酸水解工艺和生态环境保护剂的研究

以动物毛发为原料,采用酸水解的方法,对毛发进行水解,通过对水解条件的研究确定的最佳工艺条件为:毛发水解的最佳盐酸浓度为28%~30%,最佳温度为114℃、最佳水解时间为11 h。氨基酸分析结果表明:鸡毛和猪毛水解液均中含有17种氨基酸,这些氨基酸对水体中的有毒有害物质具有很强的吸付与分解能力。此外,本实验初步确定了毛发水解液环境保护剂的生产应用工艺技术参数。     

首批黄热减毒活疫苗病毒滴度国家标准品的研制

目的制备我国首批黄热减毒活疫苗病毒滴度国家标准品。方法委托北京天坛生物制品股份有限公司制备1批经全面检验合格的黄热减毒活疫苗作为候选国家标准品(批号为:20111201)。由3家实验室采用空斑法对黄热减毒活疫苗病毒滴度标准品进行协作标定,以黄热病疫苗国际标准品为溯源,确定本国家标准品以LgIU/ml为标示单位的病毒滴度,并分析标准品的分装精度、稳定性、均匀性。结果制备的国家标准品分装精度为-0.68%~0.95%。3家实验室20次协作标定结果显示,标准品病毒滴度的IU赋值为5.4 LgIU/ml。37℃2周加速破坏试验病毒滴度下降0.5 LgPFU/ml;长期稳定性考察(-30℃),病毒滴度2年内下降0.5 LgPFU/ml,而第3、4年病毒滴度基本无下降。均匀性参考量值——pH的CV值为0.17%、卵清蛋白含量的CV值为4.4%,病毒滴度CV值为2.0%。结论研制的黄热减毒活疫苗病毒滴度国家标准品符合国家标准品要求,可作为国家标准品进行发放和使用。该国家标准品批准文号为(2016)国生标字0032,其批号编码为250017-20111201。     

HPLC-ELSD法快速测定枸杞多糖的单糖组成及含量

采用热水提取法对枸杞中的多糖成分进行提取,并用三氟乙酸对多糖提取液进行水解。利用蒸发光高效液相色谱(HPLC-ELSD)技术,使用单标葡萄糖溶液进行液相方法的优化,并对糖单标以及混标进样分析,确定标准品出峰时间。对多糖提取液以及水解液进样分析,根据标准品出峰情况,确定了水解液中枸杞多糖的单糖组成主要为葡萄糖、果糖,含量分别为8.15%、4.75%。     

微波消解离子色谱法测定锂云母中铷、铯

建立了微波消解离子色谱法测定锂云母中铷、铯含量的方法。通过实验确定了样品处理条件、淋洗液浓度和淋洗液流速。方法对铷和铯的检出限分别为0.012 mg/L和0.013 mg/L,线性相关系数r大于0.999 9。对实际锂云母样品进行重复6次测定,并做了加标回收实验,相对标准偏差RSD为0.38%,加标回收率为97.39%~102.8%。经国家标准品验证,测定值与标准值相符。该方法快速准确,能达到测定锂云母中铷、铯含量的分析要求。     

辽刺参不同部位氨基酸及牛磺酸含量分析

对辽刺参内容物(肠、性腺、呼吸树)的氨基酸及牛磺酸成分进行含量测定分析。样品采用盐酸水解法处理,使用柱前衍生化反相高效液相色潽法对18种氨基酸及牛磺酸成分含量进行测定。并对其18种氨基酸含量与联合国联农组织/世界卫生组织FAO/WHO公布的标准氨基酸模式进行比较,计算氨基酸评分AAS、化学分CS、必需氨基酸指数EAAI、营养指数NI,综合评估辽刺参内容物(肠、性腺、呼吸树)蛋白质的营养价值。其中辽刺参内容物的18种氨基酸成分中必需氨基酸占氨基酸总量的比值(E/T值)为39%～44%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值(E/N值)为63%～75%,辽刺参内容物E/N值、E/T值均高于FAO/WHO理想蛋白质标准。必需氨基酸比例高于辽刺参体壁,辽刺参内容物中牛磺酸含量远高于辽刺参体壁。辽刺参内容物蛋白质营养评价较海参体壁更高,具备较大的保健食品开发价值。     

一种新的聚丙烯酰胺后水解技术

以丙烯酰胺(AM)单体为主要原料,采用后加碱水解工艺,制备了抗温抗盐型聚丙烯酰胺。考查了p H值、AM含量及水解温度和水解时间对聚合产物性能的影响。实验证明最佳的工艺条件为:AM含量为23%,溶液p H值为6.20~6.40,水解温度为85℃,水解时间为80min。