超高效液相色谱-串联质谱法检测中草药中赭曲霉毒素A

本研究通过优化液相色谱条件和质谱条件,并结合碳酸氢钠溶液提取稀释的方法法有效克服了基质效应的干扰,建立了中草药中赭曲霉毒素A的超高效液相色谱-串联质谱法快速检方法。试样经碳酸氢钠溶液提取,超声波提取,再经过免疫亲和柱净化后,用C18液相色谱柱分离,多级反应选择离子正离子模式检测。经方法学验证,赭曲霉毒素A质量浓度在0.1~50.0μg/L范围内呈现良好的线性关系,r0.99;样品在1.0、2.0和10.0μg/kg三个添加水平下的回收率为78.5%~98.0%;相对标准偏差为2.6%~11.8%;方法检出限为1.0μg/kg。将该方法应用于实际8批样品的检测,结果显示8批样品中检出1批的赭曲霉毒素A检测结果呈阳性(7.3μg/kg)。实际样品检测结果表明,本方法可实现中草药中赭曲霉毒素A灵敏、准确的定性定量分析。     

Reduction of Ochratoxin A Levels in White Wine by Yeast Treatments

This paper describes the abilities of 21 yeast strains isolated from six different wine‐grapes of Turkey to bind ochratoxin A (OTA). Viable (10⁸ CFU/mL) and heat‐treated yeast cells were incubated both in phosphate‐buffered saline (PBS) and white wine containing 10 ng OTA per mL for 4 h at 25°C. After centrifugation, the concentration of OTA was measured in the supernatant fraction using a high‐performance liquid chromatography system coupled with fluorescence detector. The adsorption abilities of OTA by viable yeast strains within 4 h ranged from 1.96 to 26.11% in PBS. On the other hand, a slight decrease was observed in the percentage of OTA removal by yeast strains in white wine when compared to their activity in PBS. The addition of yeasts at 10⁸ CFU/mL resulted in a reduction to a maximum of 21.40% in white wine, with respect to the control. Among the yeasts, Candida famata D7 was found to be the most efficient binder to OTA both in spiked white wine and PBS. In addition, dead yeast cells can potentially be used for removing OTA (a maximum of 30.45%) from white wine.     

葡萄酒中赭曲霉素A的研究进展

赭曲霉素A（OTA）是一种真菌毒素,常见于谷物、谷物产品、水果、咖啡、葡萄干、葡萄酒和啤酒中。由于OTA在食物中稳定且不易分解,对人体构成了一种潜在的危害,国际癌症研究机构（IARC）已将其定义为group2B类致癌物。欧洲各国已经对赭曲霉素A进行限量,也制定了相应的官方检测方法。对葡萄酒中赭曲霉素A的性质、毒性、污染现状、产生菌、影响因素和测定方法进行了综述。     

酶联适体分析法检测葡萄酒中的赭曲霉素A

建立了竞争取代酶联适体分析方法,检测葡萄酒中的赭曲霉素A(OTA)。核酸适体和OTA特异性结合导致与核酸适体杂交的短链DNA解链,解离的DNA作为捕获元素,进一步特异性结合辣根过氧化物酶(HRP),HRP催化四甲基二苯胺(TMB)底物显色,测定A450nm与浓度的线性关系,确定OTA的检出限。考察了DNA包被浓度、杂交温度和封闭液等因素对检测的影响。结果表明,在优化的条件下,所建立的竞争取代酶联适体分析法对OTA检测有高灵敏度,检测限0.88μg/L,线性范围1~100μg/L在葡萄酒中添加时,加标回收率为92.03%~106.6%,相对标准偏差RSD(n=5)小于2.1%,此方法可用于葡萄酒中OTA的快速测定。     

对SPE—HPLC检测葡萄酒中赭曲霉毒素A方法中SPE法的优化

对固相萃取-高效液相色谱检测法(SPE-HPLC)检测葡萄酒中赭曲霉毒素A方法中SPE法进行了系统优化.研究选用6mL 500mg的C18柱萃取葡萄酒样品,利用反相C18柱分离样品,使用带荧光检测器的高效液相色谱仪检测样品中的赭曲霉毒素A.确定了固相萃取方法,最佳上样速度为1.5mL/min,最佳洗脱体积为100mL,最佳淋洗液为40%的甲醇水溶液,洗脱液体积为2mL甲醇.经过以上条件净化处理,得到相对干净的色谱图,可以满足对葡萄酒中赭曲霉毒素A的定量检测.     

高效液相色谱-串联质谱法测食品中的赭曲霉毒素A

研究建立高效液相色谱-串联质谱联用技术检测食品中赭曲霉毒素A的方法。根据不同样品,用甲醇-2%碳酸氢钠溶液(60:40,V/V)或甲醇-水(80:20,V/V)提取样品中的赭曲霉毒素A,经OchraTest亲和柱净化,以甲醇-5mmol/L(含0.1%甲酸)乙酸铵为流动相,采用正离子模式对赭曲霉毒素A进行检测。结果回收率在82.3%～98.5%之间,检出限为0.1μg/kg。该方法适用不同基质样品,准确性好、灵敏度高、抗干扰能力强,方法检出限可满足欧盟等最新限量要求。     

葡萄与葡萄酒中赭曲霉毒素A检测方法研究进展

赭曲霉毒素A(OTA)是一种具有强烈致癌性的毒素,对人类和动植物的危害也最大,首次检测出存在于葡萄与葡萄酒中的OTA.赭曲霉毒素对农作物的污染比较严重,广泛存在于谷类、豆类、花生、香料、干果和咖啡豆中,在饮料(啤酒、葡萄酒和葡萄汁)中也已经检测到.葡萄与葡萄酒中OTA的检测方法有液相色谱一荧光检测法(HPLC-FD)、液相-质谱联用法(LC-MS-MS)、酶联免疫法(ELISA)和毛细管电泳一二极管阵列检测法(CE-DAD).(孙悟)     

粮食中赭曲霉毒素A的快速定量检测-超高效 液相色谱法

建立了免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法快速定量测定粮食中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A, OTA)的检测方法。样品经提取后,用免疫亲和柱净化、浓缩, Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(50 mm?2.1 mm, 1.7 μm)色谱柱分离,以乙腈∶水∶冰醋酸(体积比 100∶98∶2)为流动相,流速为0.2 mL/min,进样量为1μL,用Acquity荧光检测器激发波长为310nm,发射波长为465 nm处进行检测,赭曲霉毒素A的保留体积小于1.15mL,从样品前处理到分析整个过程小于45 min。根据3倍信噪比的峰响应值,确定赭曲霉毒素A的检出限为0.25pg,在1～50.0 pg范围内呈线性相关,相关系数R₂值为0.998;在小麦、玉米、稻谷样品中加标回收率分别为81.5%～101.2%,81.3%～85.5%,87.8%～97.5%,精密度为3.3%～6.4%。本方法简便快速、灵敏度高、重现性好、溶剂用量少,适用于粮食中赭曲霉毒素A的快速测定。     

谷物类食品中赭曲霉毒素A分析方法的研究进展

赭曲霉毒素A是由真菌产生的次级代谢产物,由于其具有极强的肾脏毒性、致癌性、致畸性,且对食品污染的范围广泛,许多国家对其制定了严格的限量标准。目前对谷物中赭曲霉毒素A的检测方法主要有薄层色谱分析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、毛细管电泳法和胶体金试纸条法等。随着检测水平的提高,对食品中的赭曲霉毒素A限量标准的要求也在不断地提高。建立安全、准确、灵敏度高、重现性好的检测体系将成为今后研究的重点。     

葡萄酒酿造过程中赭曲霉毒素A迁移规律的研究

赭曲霉毒素A(OTA)是葡萄酒中常见污染毒素,本研究旨在探明葡萄酒酿造过程中OTA含量的变化规律.对红葡萄酒酿造过程中5个工艺环节取样分析,采用C18固相萃取柱(C18-SPE)净化,高效液相色谱(HPLC)检测各样品中OTA含量.结果表明,葡萄样中OTA含量为6.2 μg/kg、榨汁样中为0.7 μg/kg、浸渍样中为1.79 μg/kg、除皮渣样中为0.59 μg/kg、酒样中为0.06 μg/kg;葡萄酒酿造过程中的OTA主要来自于酿酒葡萄,在浸渍过程中OTA含量会有所升高,但大部分OTA会随着皮渣被除去,最终可使葡萄酒中的OTA含量降至很低.     

进口葡萄酒中赭曲霉毒素A的含量分析

为了解进口葡萄酒中赭曲霉毒素A的含量和污染状况,本研究建立了无需净化、浓缩,直接进样,采用液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS)测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法。赭曲霉毒素A空白基质标准溶液在1.0～20.0 ng/mL浓度范围内线性良好,方法检测限达到0.05 ng/mL,添加浓度为2.0 ng/mL质控样品的回收率为98.7%～113.2%,精密度<5.7%。应用该方法测定了84个进口葡萄酒样品中赭曲霉毒素A的含量,结果表明,赭曲霉毒素的检出率为100%,含量为0.14～1.10 ng/mL,平均含量为0.32 ng/mL。     

γ射线对赭曲霉毒素A 的辐照降解与产物分析

介绍了赭曲霉毒素A 的毒性及其在我国农产品中的污染状况,在分析辐照降解技术优点的基础上,与赭曲霉毒素的传统降解方法进行了比较;结合国内外各类真菌毒素辐照降解的研究进展,针对γ射线对赭曲霉毒素A的辐射降解研究和产物分析方法进行综述。     

液相色谱-质谱联用技术测定葡萄酒中的赭曲霉毒素A残留

建立葡萄酒中赭曲霉毒素A的高效液相色谱-串联四极杆质谱联用测定方法,该方法经HLB固相萃取柱净化样品,以ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(3.0×50 mm,1.8μm)分离,流动相为0.1%甲酸水溶液和甲醇(梯度洗脱),电喷雾正离子MRM模式检测.该方法的检出限0.20 μg/L,方法定量下限0.20 μg/L,线性范围0.20 μg/L～100 μg/L,加标回收率86.6%～91.0%,相对标准偏差为1.67%.     

Ochratoxin A in Wines

Mycotoxins are produced by fungi, commonly known as mold. Ochratoxins are a dangereous group of mycotoxins produced as secondary metabolites by several fungi of the Aspergillus or Penicillium families. Ochratoxin have been detected in foods and beverages, including grape juice and wine. Several analytical methods have been developed for detection of Ochratoxin A [OTA] in wine. In this article, the chemical structure, biosynthesis, formation, microorganisms, determination methods, regulations and the removal of OTA have been reviewed.     

化学发光酶免疫分析法检测食品中赭曲霉毒素

目的：建立检测食品中赭曲霉毒素(OA)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法：采用棋盘滴定法确定OABSA抗原的包被质量浓度、包被量以及一抗和二抗的工作稀释度,建立间接竞争抑制曲线,确定线性范围、检出限和回收率。结果：确定的检测工作条件为：OA-BSA 最佳包被质量浓度60ng/mL,抗OA 单克隆抗体的最佳工作稀释度1:400,校正曲线线性范围6～400ng/mL,赭曲霉毒素的检出限为0.02ng/mL,50% 抑制质量浓度145ng/mL,在100～2000ng/g 添加水平的回收率范围为83.6%～105.8%。用所建方法对质控样品进行了分析,检测结果符合率达到100%。结论：所建方法准确、灵敏,适用于食品中OA 的筛选。     

Ochratoxin A in liquorice as affected by processing methods

A study of the effect of several processing methods on the concentration of ochratoxin A (OTA) in liquorice and derived products was carried out. The effect of the sorting, washing and peeling of fresh liquorice roots was investigated; as well as the production at a laboratory scale of liquorice extract and block liquorice from dry roots. Finally, the thermal stability of OTA was assessed. The OTA content was analysed by high-performance liquid chromatography-fluorescence and confirmed by methyl ester formation. The OTA level in liquorice extract was stable to heat treatment at 150°C for 60 min. The OTA concentration was unaffected by sorting or washing, but it was much reduced by peeling (a 53.1% reduction). A great reduction in the OTA level was found during the production of liquorice extract (78.6%) and block liquorice (91.8%).     

抗赭曲霉毒素A五价纳米抗体的表达及分析

利用霍乱毒素B亚基(B subunit of Cholera toxin,CTB)能自组装形成五元环状结构,将霍乱毒素B亚基与纳米抗体(VHH28)进行融合从而达到纳米抗体多聚化的目的。将重组载体pET25b(+)-CTB-VHH28转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,对诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,SDS-PAGE凝胶电泳分析融合蛋白表达情况。结果显示CTB-VHH28为可溶表达,其中单体分子量大小约30 kDa,五聚体分子量大小约150 kDa,均与预测的分子量大小一致;确定了其最优表达条件为:IPTG浓度为0.05 mmol/L,诱导温度为16℃,诱导时间为10 h。经过镍柱纯化后成功得到了纯度较高的五价纳米抗体,表达量为20 mg/L。对其活性进行测定,结果表明CTB-VHH28能与赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)特异性结合,在2.5%甲醇条件下,间接竞争ELISA半抑制浓度(IC₅₀)为0.38 ng/mL。热稳定性及甲醇耐受性结果显示,CTB-VHH28在25~55℃具有良好的热稳定性,反应体系中甲醇浓度低于20%时,竞争抑制率变化不大,具有较好的甲醇耐受性。结论:本研究所制备的五价纳米抗体可以用于OTA检测。     

Ochratoxin A content in blood

The purpose of this study was to investigate the ochratoxin A content in blood plasma. The analysis of ochratoxin A were performed by immunoaffinity column clean-up and HPLC with fluorescence detection. The detection limit was 0.05 microg/l. Ochratoxin A was detected in all of 50 plasma samples up to 7.44 microg/l. Mean level was 1.54 microg/l. Ochratoxin A level was higher in men than in women and in August than in December. Calculations made on the basis of the obtained mean showed that the daily ochratoxin A dietary intake awere 3.03 ng/kg b.w.     

赭曲霉毒素A降解酶Af-OTd的酶学性质分析

赭曲霉毒素A(OTA)是一种广泛分布在食品中的真菌毒素,减少或脱除食品及其原料中的赭曲霉毒素A,对提高食品质量、保障国民食品安全具有重要意义.本实验室前期从粪产碱菌中获得可降解OTA的酰胺水解酶Af-OTd,本研究通过基因重组实现Af-OTd蛋白的高效表达,并对纯化的Af-OTd蛋白进行酶学性质分析.结果表明:纯化的A...