绍兴黄酒混浊蛋白的分离鉴定及其氨基酸组成、二级结构分析

采用双向电泳及基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱法分析了绍兴黄酒混浊蛋白的主要组成及来源,结果表明:绍兴黄酒混浊中的蛋白质主要包括来源于小麦类燕麦蛋白b1、类燕麦蛋白、二聚-α淀粉酶抑制剂、病程相关蛋白、病程相关蛋白-4、几丁质酶II,以及来源于水稻的类燕麦蛋白和β-淀粉酶。高效液相色谱与傅里叶变换红外线光谱分析法分析绍兴黄酒上清蛋白质和混浊蛋白质的氨基酸组成与二级结构发现,绍兴黄酒混浊蛋白中谷氨酸含量最高,占总氨基酸含量的20.48%,疏水性的氨基酸含量比酒体蛋白高24.2%。高α-螺旋含量、低β-折叠和无规则卷曲是黄酒混浊中蛋白质的主要结构特征。     

腰果过敏原Ana o 2结构及抗原表位预测

腰果是引起人们过敏的主要食物之一。作者采用生物信息学方法,通过Pubmed网络服务器、生物信息分析软件SOPMA、swiss-model网络服务器、DNAStar生物分析软件等对腰果主要过敏原Ana o 2的结构和抗原表位进行预测,分析Ana o 2蛋白的抗原表位可能是108-111,181-186,217-218,234-238,244-255,283-287。这为腰果过敏原的进一步研究提供理论参考,并对开发低过敏腰果制品提供帮助。     

腰果蛋白的提取工艺条件优化

以腰果为原料,分析腰果仁的主要成分,比较研究不同提取方法对蛋白质提取率的影响;以料液比、提取液pH值、提取温度、提取时间为单因素,运用单因素和正交试验设计,优化腰果蛋白提取的最佳工艺条件。结果表明：腰果仁中粗脂肪含量最高,达44.13%,其他组分含量为：碳水化合物22.91%、蛋白质19.41%、水分3.07%、灰分2.45%;研究发现碱提法提取效果最佳,并确定其最佳工艺条件为料液比1∶40（g/mL）、提取液pH 9、提取温度35 ℃、提取时间1.5 h,此条件下获得的腰果蛋白提取率可达79.0%,腰果蛋白质的纯度为86.62%。腰果蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明：腰果蛋白主要含有22、26.2 kD的亚基,其次是14.1、16 kD,少量亚基为67.5、88 kD。     

盐提和碱提酸沉两种方法提取腰果蛋白的结构及其功能性质分析

使用盐提和碱提酸沉两种提取方法从腰果脱脂粉中提取分离蛋白,并对比研究盐提腰果蛋白(CNSPI)和碱提酸沉腰果蛋白(CNPI)的结构和功能性质。结果表明CNPI和CNSPI在结构、微观形态、功能性质和营养价值等方面有明显差异,CNSPI蛋白含量较高,溶解性和乳化性也优于CNPI,CNPI表现出较好的起泡性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明两种提取方法对分离蛋白的亚基组成没有显著影响;本研究使用氨基酸分析仪来测定分离蛋白的营养价值,结果表明两种方法提取的腰果蛋白氨基酸含量无明显差异,其营养价值都远高于腰果脱脂粉。表面疏水性测定结果表明CNPI的表面疏水性显著高于CNSPI。扫描电子显微镜结果表明CNSPI呈现出大量的片状微观结构,而CNPI呈现出少量球状和薄片结合成的不规则形状。圆二色光谱结果显示CNSPI和CNPI中主要二级结构是β-折叠,CNPI中有较多的无规卷曲,约占29.3%,CNSPI有较多的α-螺旋(27.0%)。在中性条件下,CNPI的起泡性为119.00%,CNSPI的乳化性达到30.14 m2/g。     

莲子中不同蛋白的结构及理化特性对比分析

该研究分别制备了莲子分离蛋白与莲子分级蛋白（清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白）,并对比研究了不同莲子蛋白的溶解性、乳化性、分子特性等结构变化。研究结果表明,莲子中蛋白质约占干基总量的16.14%,4种分级蛋白所占比例依次约为55:6:0.1:25。对比5种不同莲子蛋白,清蛋白溶解性最高,Zeta电位最低值为-21.3 mV,粒径最小值为75.47 μm,分离蛋白乳化性最好,五种不同蛋白的等电点均在4.9附近。光谱研究表明,醇溶蛋白和谷蛋白荧光更强,清蛋白和球蛋白α-螺旋含量更低,醇溶蛋白和谷蛋白β-转角含量更高。光谱研究表明,分离蛋白、清蛋白（球蛋白）的波长蓝移,清蛋白和球蛋白的α-螺旋含量更低,且α-螺旋、β-折叠、β-转角含量也发生不同变化。这些研究结果也表明清蛋白和球蛋白分子柔性相对更高,与其溶解性、乳化性、疏水性密切相关。通过实验有助于揭示莲子分离蛋白和分级蛋白理化特性与分子结构间的构效关系,并为深入研究莲子蛋白的功能特性提供理论依据。     

人乳、牛乳、羊乳中乳清部分氨基酸组成及乳清蛋白中蛋白质二级结构的对比

采用全自动氨基酸分析仪分别测定人乳、牛乳、羊乳氨基酸组成。应用模糊识别法和氨基酸比值系数、氨基酸比值系数分等指标全面评价3种乳乳清部分营养价值。采用傅里叶红外光谱的酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅲ带测定3种乳中乳清蛋白的天然二级构象。结果表明:羊乳乳清部分必需氨基酸与总氨基酸比值为0.450,全鸡蛋蛋白贴近度与联合国粮食及农业组织/世界卫生组织贴近度分别为0.919 7、0.925 0,2种氨基酸比值系数分分别为68.47、76.56,在氨基酸营养评价上营养价值较高。羊乳乳清蛋白二级结构中的α-螺旋比例为20.26%,与人乳的27.37%更为接近,一定程度上更利于人体吸收。因此,羊乳是相比牛乳较好的婴幼儿功能性食品原料。     

嗜酸乳杆菌胞外蛋白调控MAPK和PI3K-AKT信号途径关键蛋白活化水平

探讨并揭示嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005分泌的相关蛋白质促进肠道健康及分子机制具有重要研究价值。本实验在确定了L.acidophilus CICC6005分泌的胞外蛋白抑制HT-29结肠癌细胞增殖的基础上,进一步探讨67 ku和37 ku的胞外蛋白通过何种途径发挥抑制结肠癌细胞增殖。研究以HT-29细胞作为靶细胞,用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信号通路为考察对象,以Western Blotting为手段,分析两个通路中关键的靶点蛋白p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化p38(phosphorylated p38,p-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)、PI3K的表达水平,以探讨并阐述源于L.acidophilus CICC6005胞外蛋白调控结肠癌细胞增殖状况的分子机制。结果表明,不同质量浓度的67 ku和37 ku胞外蛋白分别作用HT-29细胞一定时间后,两种胞外蛋白均具有下调两个信号通路途径中p-ERK1/2、p-p38、p-AKT、PI3K蛋白的表达,且存在浓度依赖关系;但对p-JNK、ERK1/2、p38、JNK蛋白的表达没有影响。因此,源于L.acidophilus CICC6005分泌的37 ku和67 ku胞外蛋白表现出显著的抑制HT-29细胞增殖的功能,其机制可能与调控MAPK和PI3K-AKT两个信号通路中几个关键的靶点蛋白的活化水平相关。该研究结果提示,食用嗜酸乳杆菌其分泌的胞外蛋白质将达到维护肠道健康的目标。     

茶多酚对面团中面筋蛋白结构的影响

本研究通过对面团面筋中自由氨基和二硫键含量的检测,并采用拉曼光谱和扫描电镜对面团结构的分析,探究茶多酚对面筋蛋白结构的影响。结果表明,茶多酚在面团中添加量为0.5%、1.0%、2.0%时,面团中湿面筋的含量分别降低了17.8%、66.3%和93.3%;游离氨基含量分别增加了57%、151%和313%;自由巯基含量分别增加了48%、69%、111%。拉曼光谱分析表明茶多酚的添加使得面团中的氢键作用有所增强;蛋白质二级结构的分析表明,2.0%的茶多酚降低了α-螺旋的相对含量(21.9%),而β-折叠和无规则卷曲结构则分别增加了17.2%和5.1%;随着茶多酚添加量的增加,色氨酸残基I₇₅₇相对强度逐渐降低,并且二硫键的扭-扭-反结构分别增加了3.0%、6.0%、13.4%。综上所述,茶多酚的添加破坏了面筋蛋白网络结构,与扫描电镜和激光共聚焦显微镜的结果一致。因此,防止茶多酚与面筋蛋白的相互作用是开发含有多酚类功能性面制品的基础。     

Differential Scanning Calorimetry Analysis of the Effects of Heat and Pressure on Protein Denaturation in Soy Flour Mixed with Various Types of Plasticizers

The effects of heat and pressure on protein denaturation in soy flour were explored by an experimental design that used pressure (atmospheric to 600 MPa), temperature (room to 90 °C), time (1 to 60 min), and type of aqueous plasticizer (NaCl, sucrose, betaine, and lactobionic acid (LBA)) as factors. When 50% (w/w) soy flour‐water paste was high hydrostatic pressure (HHP)‐treated for 20 min at 25 °C, the treatment at 200 MPa showed a small effect on denaturation of only the 7S soy globulin, but the treatment at 600 MPa showed a significant effect on denaturation of both the 7S and 11S soy globulins. The treatment at 60 °C showed a less‐pronounced effect on denaturation of the 11S globulin, even at 600 MPa, but that at 90 °C showed a similar extent of denaturation of the 11S globulin at 600 MPa to that at 25 °C. Chaotropic 2N NaCl, 50% sucrose‐, 50% betaine‐, or 50% LBA‐water solutions showed protective effects on protein denaturation during HHP treatment at 25 °C. Although LBA enhanced the extent of thermostability of soy protein less than did 2N NaCl, LBA exhibited better stabilization against pressure. The results from DSC analysis demonstrated that thermostable soy proteins were not always barostable.     

The interaction of sesamol with DNA and cytotoxicity,apoptosis, and localization in HepG2 cells

Sesamol, a nutritional antioxidant phenolic compound present in sesame seed, has a potential therapeutic molecule effect against cancers. In this study, the interaction between sesamol and DNA was investigated by employing ultraviolet/visible (UV/Vis), fluorescence, circular dichroism (CD), Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), and molecular modeling. The fluorescence analysis indicated that the fluorescence quenching mechanism of sesamol by calf thymus DNA (ctDNA) occurred through static quenching. The UV/Vis, CD, FT-IR spectra and molecular docking results implied that the primary binding mode was minor groove binding. Furthermore, the intracellular interaction of sesamol with DNA and its bioactivity effect were explored. The cell activity results demonstrated that sesamol induced hepatic cell line (HepG2) death. The acridine orange (AO)/ethidium bromide (EB) staining assay and DNA fragmentation confirmed that sesamol could efficiently induce the apoptosis of HepG2 cells. Moreover, addition of sesamol to HepG2 cells resulted in nuclear localization, as visualized by confocal microscopy.