浓缩铀内污染对小鼠脾淋巴细胞DNA损伤修复的作用

研究了不同水平浓缩铀(235UO2F2)对淋巴细胞DNA损伤修复的作用及其机理.应用紫外线诱导的非程序DNA合成 (UDS) 检测,观察浓缩铀(235UO2F2)内污染对小鼠脾淋巴细胞DNA损伤修复的影响.结果表明, 浓缩铀摄入量为0.1-20μg/kg 体重时, 脾淋巴细胞紫外线诱导的UDS显著高于对照组 (p<0.05或p<0.01); 浓缩铀内污染12d时, 脾淋巴细胞未经紫外线照射的UDS显著增加 (p<0.05或p<0.01); PHA组脾淋巴细胞紫外线诱导的UDS显著低于未加PHA组.在一定剂量范围内,低剂量浓缩铀内污染对淋巴细胞DNA损伤修复功能具有明显的刺激作用,并且该剂量范围明显大于外照射;浓缩铀内污染对淋巴细胞DNA具有持续的损伤作用,继而诱发细胞DNA修复功能的增强;PHA刺激但未增殖的脾淋巴细胞DNA损伤修复功能明显减低.     

低剂量γ射线对丝裂霉素C损伤小鼠脾细胞的影响

探讨低剂量辐射诱导哺乳动物抗丝裂霉素C(Mitomycin C,MMC)损伤的免疫适应性反应。小鼠接受低剂量γ射线作用后6h,再给予损伤剂量的MMC,然后通过脾细胞计数、流式细胞术、Con A和LPS刺激的小鼠脾淋巴细胞转化观察小鼠脾细胞数、细胞周期和DNA含量的变化。1mg/kg的MMC(B)组小鼠脾细胞数明显低于正常对照(A)组,50-100mGy照射加MMC(C、D、E)组小鼠脾细胞数明显高于B组。Con A刺激的小鼠脾淋巴细胞转化细胞周期分析表明,D组、E组G0/G1期和S期细胞相对百分率分别显著低于和高于B组。而LPS刺激组,除E组G0/G1期外,D组、E组G0/G1期和S期细胞相对百分率也分别明显低于和高于B组。低剂量γ射线可以诱导MMC损伤小鼠脾细胞数和细胞周期进程的适应性反应。     

低剂量电离辐射对小鼠松果腺细胞cGMP的影响

通过低剂量辐射免疫兴奋效应的动物模型，进一步探讨低剂量X射线全身照射对小鼠松果腺细胞cGMP的影响。采用放免分析法检测75mGyX射线全自照射后不同时间小鼠松果腺cGMP的时程变化。照射后4hcGMP含量开始下降，12h、18h显著下降（p＜0．01），24h后开始增高，7h显著增高（p＜0．05）。低剂量电离辐射可促进小鼠松果腺细胞信息传导功能激活。     

电离辐射对小鼠小肠和结肠细胞凋亡的影响

观察不同剂量ｒ射线照射对小鼠小肠和结肠细胞凋亡水平的影响。６０Ｃｏｒ射线全 身照射 ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠;剂量分别为 １、 ６、 １２Ｇｙ,于照射后 ２４ｈ内分批取材,常规石蜡包埋, ＨＥ染色, Ｏｌｙｍｐｕｓ显微镜下观察辐射诱导小肠和结肠细胞凋亡的情况。结果表明：正常小鼠小 肠细胞有自发的凋亡现象,平均每个隐窝的凋亡细胞数为０．０３８±０．０５９个,结肠在正常情况下没 有细胞凋亡发生;不同剂量ｒ射线照射后小肠隐窝细胞凋亡数目明显增加（ｐ ＜０．０５）,其中 １Ｇｙ 照射组凋亡峰在照射后 １２ｈ明显, ６Ｇｙ和 １２Ｇｙ组分别在照射后 ２４ｈ和 ６ｈ凋亡细胞最多。结 肠未见或偶见凋亡细胞;各照射剂量组及照射后不同时间（照射后 ６、 １２、 ２４ｈ）组小肠隐窝细 胞凋亡数较相应结肠组显著增加（ｐ＜０．０５）。说明在电离辐射的情况下,小肠较结肠能更有效的 清除辐射损伤的细胞,而后者在体内的蓄积可能与以后的肿瘤发生有关。     

低剂量~(12)C~(6+)离子束预辐照对小鼠肝脏细胞DNA损伤和周期进程的影响

研究低剂量重离子束预辐照对小鼠肝脏辐射损伤程度的影响.分别用低剂量12C6+离子束全身均匀预辐照处理小鼠,剂量分别为0、0.05、0.1、0.25、0.5 Gy,剂量率为1 Gy/min,4 h后用4 Gy的12C6+离子束全身均匀辐照,照射8 h后用流式细胞仪检测辐照小鼠肝脏细胞在各细胞周期时相的百分率,并用单细胞电泳技术检测辐照损伤小鼠肝脏细胞的DNA损伤程度.结果显示,和对照组相比,低剂量预辐射处理可以减轻辐照损伤小鼠肝脏细胞G0/G1期和G2/M的阻滞,促进肝脏细胞在S期的积累.此外,辐照小鼠肝脏细胞的拖尾率及拖尾长度也显著减少,其中以0.1 Gy处理组效果最为显著(P(0.01).提示:低剂量重离子预辐照能使细胞产生适应性反应,有效减轻辐照小鼠肝脏细胞G0/G1期和G2/M的阻滞,并显著减轻肝脏细胞DNA的辐射损伤程度.     

低剂量12C6+离子辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期及DNA损伤的影响

研究低剂量12C6+子全身辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期进程及DNA损伤的影响.以0、10、50、75、100和250mGy 12C6+离子全身辐照小鼠,照射后6h处死小鼠,用流式细胞仪检测受辐照小鼠胸腺、脾脏细胞在各细胞周期的百分率,用彗星电泳技术检测受辐照小鼠胸腺脾脏细胞的拖尾率和拖尾长度.所有照射组G0/G1期胸腺细胞百分率明显低于对照组,(p<0.05),10～100mGy照射组S期胸腺细胞百分率显著高于对照组(p<0.01),所有照射组(G2/M)期胸腺细胞百分率明显高于对照组(p<0.05);所有照射组G0/G1期脾细胞百分率明显高于对照组(p<0.01),S期脾细胞百分率显著低于对照组(p<0.05).彗星电泳结果显示低剂量12C6+离子辐照以剂量依赖的方式引起小鼠胸腺脾脏细胞DNA迁移长度及拖尾率的增加.低剂量的碳离子辐射可促进小鼠胸腺细胞DNA合成,对小鼠脾脏细胞产生抑制作用,使其发生G1期阻滞;同时对胸腺及脾脏细胞造成具有明显剂量效应关系的DNA损伤.     

当归红芪超滤物对重离子12C6+辐射肝癌细胞DNA损伤修复的影响

将人肝癌H22细胞分成4组,分别为对照组、药物组(100 mg/L)、辐射组(2 Gy)及联合组(100 mg/L药物 + 2 Gy照射),采用CCK-8法、单细胞凝胶电泳、γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术以及Western Blotting印迹法,研究当归红芪超滤物(Radix Angelicae Sinensis and Radix Hedysari, RAS-RH)对重离子¹²C⁶⁺辐射引起人肝癌H22细胞DNA损伤修复的影响和其可能的机制。结果表明,在0～72 h和给药剂量为5～200 mg/L范围内,RAS-RH对人肝癌H22细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,其20%抑制浓度IC₂₀为(117.6±2.15)mg/L;单细胞凝胶电泳显示联合组头部DNA含量低于辐射组,而尾部DNA含量、尾距TM、Olive尾距OTM均高于辐射组;γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术发现RAS-RH不增加重离子¹²C⁶⁺辐射引起的DNA损伤,但在2—12 h,DNA双链断裂的γ-H2AX foci修复作用被RAS-RH抑制,DNA损伤持续存在;Western Blotting显示RAS-RH通过下调Ku70/80及Rad51的蛋白表达,抑制γ-H2AX的聚集。以上结果说明RAS-RH对人肝癌H22细胞的辐射增敏作用可能是下调DNA损伤修复相关因子Ku70/80及Rad51的表达。     

~(10)Co-γ射线照射对小鼠脾细胞DNA、RNA及蛋白质合成的影响

本文报道了~(60)Coγ线照射对小鼠脾细胞 DNA、RNA 及蛋白质合成影响的实验研究。结果表明,小鼠脾细胞 DNA 合成在0.5戈瑞照射后即明显受到抑制,而 RNA、蛋白质的合成在2.5戈瑞照射后才受抑显著,表明 DNA 合成对电离辐射比 RNA、蛋白质合成更为敏感。γ线照射抑制这三种生物大分子合成的剂量-效应曲线均是多相形的。     

低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

研究不同低剂量X射线对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。采用常规苏木精-T尹红(HE)染色法和原位末端标记术(TUNEL)通过光镜观察不同低剂量x射线照射后小鼠睾丸在生精周期不同阶段各类生精细胞凋亡的剂量及时程效应关系。结果表明，低剂量电离辐射诱导生精细胞凋亡具有明显的细胞种类规律性，在较低剂量照射(0．025Gy)时，以精原细胞凋亡为主，随剂量增加(0．05-0．2Gy)才逐渐累及精母细胞，并且精原细胞凋亡率明显高于精母细胞，很少累及精子细胞和精子。低剂量电离辐射诱导生精细胞凋亡具有一定规律性．这为深入探讨低剂量辐射兴奋效廊机制提供了更深层次的实验证据。     

小鼠扁桃体免疫细胞受照射后DNA双链断裂损伤修复的忠实性

观察了受照射小鼠瓦尔代尔扁桃体环（WRE）在体细胞出现DNA双链断裂修复的忠实性，用^60Coγ射线照后观察WRE细胞凋亡的最高峰，在此时间点处死小鼠，取WRE细胞分别有脂质体和电穿孔方法介导的基因转染技术，将双标记基因质粒pPMH16导入细胞。研究WRE细胞DNA双链修复的忠实性。结果表明，未照射WRE细胞的抗G418转化克隆有69．75％的gpt基因表达，说明大部分断裂的gpt基因被忠实性地修复；2Gy、4Gy射线照射的WRE细胞的转化克隆只有36．05％和21．50％的克隆能正确表达gpt基因功能，说明WRE细胞照射后DNA双链断裂的修复显著低于正常细胞，且剂量越大，修复的忠实性质越低。脂质体和电穿孔方法介导的基因转染技术可用于原代细胞基因转染的研究，照射后的WRE细胞易发生DNA双链断裂错误重接。     

致死剂量辐射诱导小鼠骨髓细胞凋亡特征的研究

经＾６０Ｃｏ γ射线以不同剂量全射照射２１３只ＬＡＣＡ小鼠,于照射后４周内分批 杀,将骨髓标本分别进行Ｈ．Ｅ染色,半薄及超薄切片,并通过原位末端标记和ＤＮＡ交电泳观察其生化特性。结果表明：射后６ｈ,各一组小鼠骨髓造血细胞出现凋亡明显增多,且剂量赵大,凋亡细胞越多。凋亡的细胞形态上表现为染色质深度缩、边移,呈半月型,环状或不规则状,核碎片喜讯发小体形成,电泳下可见ＤＮＡ梯状图谱。在２．５～７．０Ｇ６     

γ射线对体外培养骨细胞的作用观察

采用^137Csγ射线（剂量率为1Gy/min)单次照射的方法，研究了电离辐射结体外培养成骨细胞形态、增殖能力、ALP活性、矿化能力和骨钙素mRNA水平以及破骨细胞形态和凋亡率的影响。结果表明，低剂量电离辐射可影响成骨细胞功能，促进破骨细胞凋亡发生，表现为成骨细胞增殖率、ALP活性和骨钙素mRNA水平不同程序下降和矿化结节形成能力的双相变化（0.5-1Gy的促进作用和6Gy的抑制作用）；破骨细胞凋亡率增加等。     

FL对辐射所致小鼠多脏器损伤的防护作用

采用6.0Gy^60Coγ射线一次全身照射BALB/C小鼠，分别于照前和照后不同时间给予FL或与其他细胞因子G-CSF、IL-11和EPO联合应用，观察其对小鼠外周血细胞计数的影响，以及使用这些细胞因子后受照小鼠心、肝、肾、肺、脾、胸等脏器的组织病理学改变。结果表明，在照前2h给予FL，能加速小鼠外周血细胞尤其是白细胞的恢复，并可减轻照射所致小鼠心、肝、肾、肺、脾、胸腺等脏器的损伤。     

人参皂甙对雄性小鼠生殖细胞的辐射防护作用

用人参皂甙（ＧＳ）给小鼠预防性用药，观察其对Ｘ射线诱发生殖细胞损伤的防护作用。结果表明：不同浓度的人参皂（１２．５－２００ｍｇ／ｋｇ）对３．０ＧｙＸ射线诱发小鼠初级精母细胞染色体畸变具有明显的防护作用，且以５０ｍｇ／ｋｇ防护效果最佳。５０ｍｇ／ｋｇ的人参皂甙对不同剂量（１．０－９．０Ｇｙ）Ｘ射线诱发的小鼠精原干细胞染色体易位具有防护作用。人参皂甙可预防Ｘ射线造成的精子数量减少，并对Ｘ射线诱导的ＤＮ     

不同剂量X射线全身照射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响

本文采用流式细胞术研究了不同剂量X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。结果表明，0．075GyX射线全身照射后2－72h骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；2．0Gy全身照射后4h骨髓细胞便开始出现明显的G2阻滞，12h同时出现G1、G2阻滞，而后很快恢复到假照水平。不同剂量（0．05Gy-6.0Gy）全身照射后12h量效结果表明，低剂量范围内（0．05－0．2Gy）骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；较大剂量范围内（0．5Gy-6.0Gy）照射后出现明显的G1、G2阻滞，S期细胞百分数减少。提示低剂量全身照射后骨髓细胞周期进程未检测出变化；而较大剂量全身照射后，骨髓细胞出现DNA合成抑制，G1和G2阻滞。     

重离子辐照诱导DNA双链断裂的剂量率效应

利用不同剂量率的50MeV/u^12C^6 辐照B16黑色素瘤细胞的脱蛋白DNA,采用脉冲场凝胶电泳技术对DNA双链断裂（DSB）的诱导和片段的分布进行了研究。结果发现,在剂量率分别为3Gy/min和30Gy/min的情况下,DNA片段释放百分比（PR）都随着剂量的增加而增加,并在超过一定剂量之后趋于相似的准阈值;3Gy/min辐照诱导DSB的产额为0.40DSBs(100Mbp.Gy）,30Gy/min辐照诱导的DSB产额准确值无法得到;30Gy/min辐照诱导DSB的截面为2.14μm^2,是3Gy/min的3.1掊。所有结果都表明剂量率越高,诱导DSB越有效。另外,3Gy／min辐照诱导DSB片段在－860kbp处有一个片段峰,而30Gy/min没有,说明剂量率可以影响DSB片段的分布。     

sCD40L在小鼠急性辐射损伤中的应用研究

CD40和CD40L的相互作用在机体细胞和体液免疫调节及其应答中起重要作用，注射可溶性CD40L（sCD40L)可促进骨髓移植小鼠粒细胞和血小板数量的恢复。本实验采用外周血细胞计数、白细胞分类计数、免疫荧光标记和流式细胞技术，了sCD40L对小鼠急性辐射损伤的救治作用。结果显示，体内注射sCD40L以最佳剂量100μg处理受照小鼠时可明显延长其存活时间，并促进CD8^ T细胞比例和CD4^ /CD8^ T细胞比值的恢复。说明sCD40L对受照小鼠免疫系统损伤具有一定的修复作用。     

3Gy全身辐射对小鼠小肠粘膜上皮内淋巴细胞数量和功能的影响

采用昆明种小鼠3Gy全身照射为模型,分离培养照后8h～15d共6个时相点全小肠粘膜上皮内淋巴细胞,并对其数量、细胞增殖活力、细胞毒力、TNF-α和TGF-β分泌水平进行检测。结果表明小肠上皮内淋巴细胞数量显著下降,增殖活力和细胞毒力明显受抑,表现为照后8h下降,72h达低值。上皮内淋巴细胞分泌TNF-α和TGF-β显著增多,表现为照后8h增高,72h达峰值。小肠上皮内淋巴细胞数量减少和功能降低成为全身放射损伤时造成肠粘膜免疫屏障功能受损的一个重要原因。     

^60Coγ射线单次照射对小鼠抗体形成细胞的影响

用不同剂量的~(60)Co γ射线照射雌、雄小鼠,以溶血空斑技术(PFC)观察小鼠脾脏抗体形成细胞数的变化。结果表明在0-200cGy剂量范围内,~(60)Co γ射线对小鼠的抗体形成细胞有剂量依赖性的抑制效应。比较不同性别小鼠的辐射敏感性,未发现有差别。