烟草黑胫病菌研究进展(Ⅰ)

系统综述了烟草黑胫病菌的发现与命名、分类、生物学特征、分布与为害、致病机理、生理特性及寄主范围等方面的最新研究进展.     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅱ)

综述了烟草黑胫病菌致病性与生理分化的发现、机制、类型、主要途径、鉴定方法(生理生化法和寄主法)以及交配型的类型和在无性繁殖条件下发生变异的因素等方面的主要研究进展,并对烟草黑胫病菌致病性与生理分化、接种方法进行了比较分析和讨论。     

烟草黑胫病菌研究进展(Ⅲ)

综述了烟草黑胫病菌抗甲霜灵菌株群体动态及抗性水平 ,抗药性产生的原因 ,抗甲霜灵菌株的生物学性状遗传与变异 ,甲霜灵对烟草黑胫病菌的毒性作用方式 ,烟草黑胫病菌对甲霜灵抗性的遗传稳定性 ,对甲霜灵的抗药性治理策略和核酸分子杂交技术、PCR、RAPD、RFLP、ELISA技术在烟草黑胫病菌研究中的应用以及烟草黑胫病菌毒性遗传等方面的最新研究进展。     

湖北省烟草黑胫病菌生理小种研究初报

在湖北省襄樊、恩施等主要烟区采集烟草黑胫病病株样本111个,分离纯化出30个烟草黑胫病菌株。采用游动孢子悬浮液注射接种鉴别寄主和TTZ(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)颜色反应两种方法鉴定其生理小种类型。结果表明,供试的30个菌株在TTZ培养基中的反应皆为红色,有24个菌株在鉴别寄主反应中对L8和NC1071有较强致病力,而对N.nesophila无致病力,应为1号生理小种,占供试菌系的80%,为湖北省优势生理小种;其他6个菌株中有4个菌株对NC1071有较强致病力,但对L8致病力较弱,有1个菌株对L8和NC1071致病力较弱;1个菌株对NC1071致病力较弱,但对L8有较强致病力;6个菌株对N.nesophila无致病力,是否为2号生理小种还是其他致病型,尚待进一步研究确定。     

四川省烟草黑胫病菌生理小种的分离鉴定

为了准确掌握四川省烟草黑胫病菌生理小种组成及分布情况,从四川烟草主产区采集了108个烟草黑胫病标样,采用髓部碟片分离法获得74株黑胫病菌,同时通过TTZ颜色反应和鉴别寄主法对74个菌株进行了生理小种鉴定.结果表明,四川烟草黑胫病菌存在0号和1号生理小种,供试菌株中0号生理小种占28.38％,1号生理小种占71.62％,属优势小种.两个生理小种在各采样区均有分布.     

烟草黑胫病菌对甲霜灵的敏感性则定

烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var nicotianae)对甲霜灵的敏感性测定结果表明：所测菌株菌丝生长对甲霜灵都存在不同程度的敏感性,Ec50值平均为0．2132μg/mL,Ec95值平均为6．5623μg/mL,但不同菌株对甲霜的敏感性不同,Ec50值芯围在0．0573－0．08485μg/mL之间,相差15倍左右。Ec95值的范围在2．3393－21．8051μg/mL之间,相差9倍左右。其中以9734－1、9716－3和9706－2的耐药性最明显。甲霜灵对烟草黑胫病菌孢子囊的产生也有明显的抑制作用,5．0μg/mL的甲霜灵对烟草黑胫病菌的产孢抑制率为100％,通过甲霜灵对烟草黑胫病菌继代培养物的测定也证明了烟草黑胫病菌对甲霜灵的耐药性。     

烟草黑胫病菌0号生理小种不同条件下培养特性的研究

研究了烟草黑胫病菌0号生理小种的若干培养性状,为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供理论基础。用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素研究了对烟草黑胫病菌0号生理小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等方面的影响。结果表明,燕麦培养基较适于其生长和产生孢子囊,光照限制其生长;在本实验周期内,培养21 d的菌丝较适宜诱导,0.1%KNO3溶液浸泡菌丝有助于孢子囊的产生;经26℃培养72 h后,突降12℃处理0.5 h,结合1%葡萄糖溶液可促使孢子囊释放游动孢子,并延长后者的活动时间。     

烟草黑胫病菌分子生物学研究进展

烟草黑胫病是烟草主要病害之一,每年给烟草生产造成巨大损失。烟草黑胫病菌隶属于卵菌纲疫霉属。近十几年来随着分子生物学技术的迅猛发展,烟草黑胫病菌的分子生物学研究有了较大进步。本文总结了烟草黑胫病菌在病原菌起源和分类命名、全基因组序列、线粒体基因组序列和功能基因等方面的研究进展,并分析了烟草黑胫病菌在分子生物学研究方面的未来发展方向,以期为烟草黑胫病菌致病机理研究和烟草分子抗黑胫病育种提供一定的参考。     

烟草黑胫病菌全基因组DNA遗传多态性RAPD标记

应用ＲＡＰＤ分子标记技术,从８０个随机引物中筛选出１０个分别为ＯＰＡ０２、ＯＰＡ０１３、ＯＰＡ０１４、ＯＰＡ０１６、ＯＰＡ０１８、ＯＰＢ０４、ＯＰＢ０５、ＯＰＤ０２、ＯＰＤ０３、ＯＰＤ０１１,对来自云南省６大主产烟区的２４个烟草黑胫病菌株全基因组ＤＮＡ进行随机扩增。结果表明：１０个引物共标记出８９条ＲＡＰＤ图带,其中多态性图带６３条,多态率７０．７％。引物ＯＰＤ０１１、ＯＰＤ０２、ＯＰＡ０１６、ＯＰＢ０４对每个受试样品均可标记出分子量为０．８７Ｋｂ和１．１Ｋｂ的ＤＮＡ片段,此４个引物对受试样品全基因组ＤＮＡ具有特征性分子标记的特性,利用核酸分子杂交技术对田间寄主体内的黑胫病菌的有无进行分子检测。被标记出的分子量为０．８７Ｋｂ和１．１Ｋｂ的特征性ＤＮＡ片段,可用来制备特异性探针,对田间烟草黑胫病菌发生动态进行检测和预报。     

湖北省恩施州烟草黑胫病菌生理小种研究

１９９５～１９９８ 年从恩施州烟草上采集到黑胫病标样１０２ 个,分离纯化出４６ 个菌系,根据鉴别寄主的病害反应鉴定其生理小种。用游动孢子悬浮液注射１０ 叶期左右鉴别寄主的茎基部,所用鉴别寄主为Ｌ８、Ｎ Ｃ１０７１、Ｎ．ｎｕｄｉｃａｕｌｉｓ和小黄金１０２５。结果表明：４６ 个菌系对Ｌ８、Ｎ Ｃ １０７１ 和Ｎ．ｎｕｄｉｃａｕｌｉｓ无致病力,应为０ 号小种。其中有２０ 个菌系来源于Ｌ８ 杂交种ＭＳＫｙ１４×Ｌ８,说明恩施烟区杂交种ＭＳＫｙ１４×Ｌ８ 由于黑胫病菌生理小种变化而造成的黑胫病发病的可能性很小。本文对于该品种在生产上有一定程度的黑胫病发生的原因做了初步探讨。     

拟氨基多糖抑菌剂K1、K2对烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的抑制效果研究

采用生长速率法测定了拟氨基多糖类抑菌剂K1、K2对烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的抑菌效果。结果表明:K1、K2对烟草黑胫病原菌均有显著的抑制作用,且抑制效果随K1、K2浓度的增大而增强;20 mL/L的K1、K2对烟草黑胫病原菌的抑制率分别为50.58%、84.68%,EC50分别为26.15、4.87 mL/L。     

烟草疫霉生防细菌的筛选及鉴定

为获得防治烟草黑胫病的生防菌株,通过对峙平板法,从烟田土壤中分离出1株对烟草疫霉具有很好抑菌作用的细菌B40-3.培养3 d后,该菌株对烟草疫霉抑菌带宽度为0.9 cm,抑菌圈半径为2.3 cm,并对其余12种植物病原真菌有很好抑制作用.该菌株在LB液体培养基中,37 ℃,210 rpm条件下培养40 h,OD值达到最大值.依传统生理生化反应鉴定,B40-3属于枯草芽孢杆菌.     

抑制烟草黑胫病的混合菌株优化

通过正交试验筛选混合菌株有效抑制烟草黑胫病病原菌（Phytophthora parasitica）菌丝的生长,其中1107、1205、1601、5801和7403五株芽孢杆菌（Bacillus）在室内NYBD培养基上培养,参照5因素3水平正交试验设计进行混菌比例优化。结果表明,1107菌株在生物量和抑菌活性方面都表现出了显著性。5株芽孢杆菌（1×108 CFU/mL）的最优组合为芽孢菌株1107、7403、1601、5801的添加量均为1.2 mL,芽孢菌株1205添加量为0.6 mL。在此优化条件下,生物量（OD600 nm值）为3.18±0.02,抑菌圈直径为（24.22±0.68） mm,分别比单独培养的菌株或其他混合菌株都显著提高。     

烟草黑胫病拮抗放线菌的分离与筛选

从堆沤过圈肥的土壤中采集样品,用平板法对所采样品进行菌株分离、纯化培养,共获得原始放线菌101株,再通过室内拮抗试验,从随机28株试验菌株中初步获得16株具有一定拮抗作用的菌株。对拮抗效果较好的6株菌株以及抑菌圈较小、但其菌落较大的A15菌株进一步做盆栽防治试验。结果表明,A6的防治效果最好,达到55.26%,其它菌株效果一般。     

烟草黑胫病拮抗内生细菌的分离、鉴定及防效测定

采用常规分离方法从健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌269株,从中筛选出7株对烟草黑胫病病原菌具有明显拮抗作用的菌株,它们的抑菌半径达到6 mm以上。菌株05-4004、05-2501培养液滤液中存在具有明显抑菌作用的活性成分。致病性试验中,发现菌株701-1在人工接种条件下有致病能力或潜在致病性,选择余下6株拮抗细菌进行了温室盆栽试验,以05-4004、05-2002两株烟草内生细菌对烟草黑胫病的防效最好,分别为46.6%、45.2%。促生试验中,NB培养液和清水对照的种子发芽率分别为84.3%、82.7%,而经过05-2002和05-4004除菌滤液浸种后,发芽率分别提高到93.5%和93.7%。经过05-4004、05-2002灌根处理后,株高、叶长、叶宽、有效叶片数、叶面积明显增加。证明菌株05-2002、05-4004同时还具有一定的促生作用。以细菌16S rDNA同源性为基础的系统发育分析表明05-4004和Bacillus pumilus(EU366363)、Bacillus safensis(AY030327)处于同一分支,相似性为100%,05-4004鉴定为芽孢杆菌属。     

土壤中烟草疫霉的分离与量化测定

从温室盆栽接种试验土和烟田土中分别取样，在室温下晾干，研碎并通过１ｍｍ直径的网筛，用选择性培养基土壤稀释平板法和叶片诱饵法分离烟草疫霉菌株；用土壤稀释平板法测定了云南主要烟区土样的烟草疫霉密度。结果看出，连作烟田的病菌密度高于轮作田，低凹烟田高于山地烟田。叶片诱饵法试验表明，以烟茎切片的诱集效果最好，其次是烟叶和马铃薯叶，番茄叶和辣椒叶的诱发效果相似，花生叶诱集不到烟草疫霉。