纹枯病菌诱导水稻表达的WRKY基因克隆及分析

[目的]克隆纹枯病菌诱导的水稻上调表达基因.[方法]对应用抑制差减杂交枝术(SSH)获得的纹枯病菌诱导水稻表达的EST序列K16进行电子克隆,根据电子克隆产物设计引物进行RT-PCR、克隆测序,利用生物信息学技术对克隆产物进行功能预测.[结果]克隆出一个长度为1079bp的序列,结构功能分析显示该基因编码236个氨基酸的蛋白,存在多个功能位点,含有2个典型的WRKY结构域和1个C2H2锌指型结构,该基因与水稻WRKY8、WRKY24和WRKY30基因有较高的同源性.[结论]经电子克隆获得的纹枯病菌诱导表达的基因为典型的WRKY家族基因,该基因可能在水稻抗纹枯病中起重要作用.     

水稻蛋白OsOlel在大肠杆菌中的诱导表达

[目的]在大肠杆菌中诱导表达水稻蛋白OsOlel.[方法]RT-PCR克隆水稻基因OsOlel,构建原核表达载体pGEX-2T-OsOlel-GST,在大肠杆菌B121中诱导表达该蛋白,并采用GST凝胶亲和层析进行纯化.[结果]水稻蛋白OsOlel具有典型的Oleel蛋白家族的保守域,N端1～24位氨基酸为预测的信号肤序列.成功地将水稻蛋白OsOlel在大肠杆菌中进行了诱导表达,并用GST亲和层析进行了纯化.[结论]该研究为以后进一步研究水稻蛋白OsOlel的生理功能奠定了基础.     

野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析

[目的]对野大麦盐胁迫rbcS基因进行克隆及序列分析.[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序.[结果]在野大麦的基因组中克隆了2个大小不同的rbcS基因序列rbcS1和rbcS2,长度分别为1 252和908 bp.rbcS1和rbcS2均由2个外显子和1个内含子组成,外显子长度相等,编码序列为525 bp,同源性为96%,编码174个氨基酸;rbcS1和rbcS2内含子大小不同,分别为448 和107 bp.[结论]为进一步探讨rbcS基因在野大麦耐盐机制中的分子机制奠定了基础.     

6种模式生物热休克蛋白70家族的进化分析

[目的]研究柄海鞘和其他5个物种的热休克蛋白70家族的系统发育关系.[方法]通过在Ensembl中下载与筛选,获得柄海鞘和其他5种生物的热休克蛋白70家族的氨基酸序列,对其进行系统发育树和基因结构分析,并阐明其系统发育关系.[结果]经过筛选,共获得了来自线虫、果蝇、柄海鞘、斑马鱼、家鸡和人类6种生物的热休克蛋白70家族的33个氨基酸序列,其中25个具有明确的基因结构.系统发育分析表明,系统发育树并未完全按照来源物种聚类;6种生物热休克蛋白70的氨基酸序列相当保守,但其内含子插入位点并不整齐,表明热休克蛋白70家族是一个多基因、多结构的家族.[结论]这6个物种均发生了基因复制事件,新产生的基因仅仅是冗余的存在,还是具有新的功能,仍需作进一步的研究.     

家蚕TPR基因的克隆

[目的]克隆家蚕TPR基因,为研究该基因功能提供依据.[方法]利用Trizol法提取家蚕蛹期总RNA,再用RT-PCR方法对家蚕TPR基因进行克隆.[结果]成功得到家蚕TPR基因全cDNA序列,并用PCR扩增得到了TPR基因的ORF,全长858 bp.[结论]首次对家蚕TPR家族基因进行了克隆,为今后对该基因功能研究奠定了坚实的基础.     

皖北黄牛MHC基因遗传多样性及分子系统关系

[目的]研究皖北黄牛品种的遗传多样性、亲缘关系及起源进化.[方法]采集50个皖北黄牛和14个地方黄牛品种的血样,根据黄牛MHC基因序列设计1对引物,进行PCR扩增.对50个皖北黄牛个体和14个地方黄牛品种个体的MHC基因进行序列比对分析,检测MHC单倍型及核苷酸多态性指标,并构建分子系统发育树.[结果]共检测到7种MHC基因单倍型,核苷酸多态位点24个,占分析位点的7.86%,包括18个转换,1个颠换,5个转换/颠换.皖北黄牛品种单倍型间的序列差异在0.26%～4.53%之间,单倍型多样度(H)为0.602～0.617,核苷酸多样度(π)为0.012～0.019.[结论]皖北黄牛的遗传多样性不丰富,与鲁西黄牛具有较近的亲缘关系,二者聚为姐妹群.     

藏绵羊脂蛋白脂酶基因克隆及序列分析

[目的]为深入研究藏绵羊肉用性能的遗传调控与营养代谢关系.[方法]利用RT-PCR和T-A克隆技术获得了藏绵羊LPL基因,并对其进行生物信息学分析.[结果]藏绵羊LPL编码基因全长1437 bp,编码478个氨基酸.将藏绵羊LPL基因及氨基酸序列分别与GenBank中公布的11种动物进行序列一致率比对,发现藏绵羊与所选动物的LPL基因序列一致率在84.6%-99.6%,LPL氨基酸序列一致率在88.8%-99.0%.藏绵羊与普通绵羊LPL基因存在6个位点核苷酸差异,其中有一个核苷酸位点的差异没有引起相应氨基酸的改变,其余5个住点核苷酸的不同都引起了氨基酸的差异.[结论]该研究可为了解LPL基因的演化关系及作用机理提供资料.     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白pilA基因的克隆与表达

[目的]克隆和表达副猪嗜血杆菌菌毛蛋白pilaA基因.[方法]对已发表的HPS的pilA序列进行分析;合成引物,并以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS的pilA编码基因,获得目的基因片段;构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达至大肠杆菌BI21(DE3)中,进行SDS-PAGE与Western blot检测.[结果]表达的重组蛋白分子质量与预期的43 kD一致.[结论]该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础.     

黄粉虫酪氨酸羟化酶基因的克隆与序列分析

[目的]克隆鞘翅目昆虫黄粉酷氨酸羟化酶(TmTH)基因.[方法]采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术和PCR方法克隆了鞘翅目昆虫黄粉虫TmTH基因,并对其进行了生物信息学分析、[结果]TmTH cDNA全长2103bp,包含1605bp的开放式阅读框,可编码534个氨基酸残基,蛋白质分子量为60.66kD,等电点为5.70,构建了其系统进化树.[结论]TmTH基因的克隆为鞘翅目昆虫酪氨酸羟化酶的研究提供了参考.     

鲤鱼白细胞介素-1β全长cDNA的克隆·鉴定及其差异表达分析

[目的]进行鲤鱼白细胞介素-1β(IL-1β)全长 cDNA 的克隆、鉴定及其差异表达分析.[方法]利用 DD-RTPCR 方法获得差异表达 cDNA 片段,时有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞 cDNA 文库进行筛选,克隆了鲤鱼 IL-1β的全长 cDNA,并进行了序列分析和差异表达分析.[结果]获得的阳性克隆含有 1 个大小为 831 bp 编码 276 个氨基酸的完整开放阅读框.聚类分析表明,鲤鱼 IL-1β氨基酸序列与日本鲤鱼紧密聚为一支,氨基酸序列的同源性达 95%,之后聚类顺序依次为鲫鱼、斑马鱼、猪、牛、马、人和小鼠.差异表达分析表明,经有丝分裂原刺激后前期(4 h)白细胞中 IL-1β的表达量显著增大,但随着时间推移(12,24 h)并非一直较同期大,表达量总体趋势成峰形.[结论]为进一步研究 IL-1β在体内的表达方式、功能特点和调控机理以及在炎症反应、应急反应和免疫应答的作用机制奠定了基础.