γ-氨基丁酸脂质体制备工艺的研究

采用醋酸钙梯度法制备γ-氨基丁酸脂质体,利用Berthelot分光光度法来检测γ-氨基丁酸(GABA)含量,通过正交实验确定优化的制备工艺条件为:药脂比为1∶20,卵磷脂与胆固醇的质量比为4∶1,醋酸钙浓度为0.12mol/L,孵育温度为50℃。所制备的脂质体平均包封率为91.4%。     

高效液相色谱法测定桑叶γ-氨基丁酸和谷氨酸

研究一种快速、精准可同时检测桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的色谱方法。通过研究料液比、提取温度、时间对提取率的影响,确立最佳提取条件为:80℃条件下,料液比5∶1(mg/mL),分两次浸提,每次5 min。以2,4-二硝基氟苯为柱前衍生试剂,Agilent TC-18色谱柱,以乙酸钠缓冲溶液-乙睛(50%)为流动相,梯度洗脱。此方法在0～0.05 mg/mL范围内线性关系良好,γ-氨基丁酸和谷氨酸测定结果相对标准偏差均2%,平均加标回收率分别为88.024%、114.64%,所建立的方法可以用于桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的检测。为γ-氨基丁酸桑叶茶开发和利用提供理论与技术支持。     

挤压米糠发酵生产γ-氨基丁酸的工艺条件优化

米糠经双螺杆挤压机挤压处理后作为原料,以米曲霉为菌种,采用液体和固体两种发酵方法生产γ-氨基丁酸(GABA),研究米糠挤压处理工艺对GABA产量的影响。结果表明：米糠经不同挤压条件处理后进行发酵生产,其产物中γ-氨基丁酸的含量也不同。米糠的最适挤压处理条件为：物料米糠含水率20%、螺杆转速200r/min、挤压温度150℃,使用该条件处理得到的米糠进行发酵生产γ-氨基丁酸,液体发酵产物中γ-氨基丁酸含量为118.6mg/100g,固体发酵产物所得γ-氨基丁酸含量为121.1mg/100g。     

米糠发酵产γ-氨基丁酸条件优化的研究

以新鲜米糠为原料,加入乳酸菌进行发酵生产米糠γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric,GABA),对发酵条件进行研究。探讨了在不同的发酵温度、发酵时间、乳酸菌添加量和嗜热链球菌S1和保加利亚乳杆菌L1比例对米糠发酵液中γ-氨基丁酸含量的影响。在单因素试验的基础上,选择四因素三水平进行正交试验优化工艺参数。结果表明,乳酸菌添加量3%、发酵温度48℃、嗜热链球菌S1∶保加利亚乳杆菌L1=1∶2、发酵时间24 h。在此条件下γ-氨基丁酸含量为320.61 mg/100 g。     

γ-氨基丁酸脂质体制备工艺的研究

采用醋酸钙梯度法制备γ-氨基丁酸脂质体,利用Berthelot分光光度法来检测γ-氨基丁酸（GABA）含量,通过正交实验确定优化的制备工艺条件为:药脂比为1∶20,卵磷脂与胆固醇的质量比为4∶1,醋酸钙浓度为0.12mol/L,孵育温度为50℃。所制备的脂质体平均包封率为91.4%。      

高效液相色谱法测定乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸

通过对衍生试剂浓度、衍生时间、衍生温度、检测波长、流动相比例与柱温条件的选择,建立了一种高效液相色谱（HPLC）法灵敏检测发酵液中γ-氨基丁酸（GABA）含量的方法。以邻苯二甲醛为衍生化试剂,衍生时间5 min,衍生温度为室温,色谱条件为：检测波长228 nm,流动相为乙腈-20 mmol/L结晶乙酸钠溶液（21∶79,V/V）,柱温30℃,流速0.8 m L/min。结果表明,在γ-氨基丁酸含量0.05μg/m L～0.50 mg/m L范围内线性关系良好（相关系数R2=0.999 4）,平均加标回收率为91.87%～105.58%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为0.55%～3.74%(n=5),检出限为0.02μg/m L。采用该方法检测发酵液中γ-氨基丁酸含量,其含量范围在0.157～0.369 mg/m L之间。该方法操作简单、灵敏、准确可靠,适用于发酵液中γ-氨基丁酸含量的检测。     

纸层析-酶标仪法测定发酵液中γ-氨基丁酸

建立纸层析-酶标仪法对微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量进行测定。对影响纸层析-酶标仪法测定结果的重要因素进行优化,并建立相应的分光光度法。优化后层析液中显色剂-茚三酮的浓度为8 g/L,展开剂-正丁醇、冰醋酸与水3者体积比为2∶1∶1;洗脱液中乙醇的体积分数为75%,乙醇与质量浓度为6 g/L CuSO_4·5H_2O的体积比为39∶1;γ-氨基丁酸质量浓度在1～7 g/L之间,吸光度与样品浓度线性关系良好(R~2=0. 999 0),平均回收率为98. 248 5%,重复性RSD为2. 625 5%。纸层析-酶标仪法能快速、准确地测定微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量,为后续高通量选育γ-氨基丁酸高产菌株奠定了基础。     

从植物乳杆菌全细胞转化液中分离纯化γ-氨基丁酸的工艺研究

前期筛选获得1株高效转化L-谷氨酸为γ-氨基丁酸(GABA)的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GB01-21,该菌以浓度200 g/L的L-谷氨酸为底物,发酵20 h左右,能以99%的摩尔转化率生产γ-氨基丁酸,产物γ-氨基丁酸的终浓度可达140 g/L左右。从全细胞转化液中分离纯化γ-氨基丁酸,着重对脱色工艺进行了研究,考察了温度、时间、pH和活性炭添加量对脱色效果的影响。通过单因素实验的基础上的正交实验分析,确定了脱色最佳工艺条件为粉末活性炭(150～200目)用量为1.5%,脱色温度70℃,pH值4.0,脱色时间40 min,γ-氨基丁酸转化液的脱色率高达98.42%,γ-氨基丁酸的保留率可达97.23%。随后对γ-氨基丁酸转化液进行初步分离纯化,最终测得γ-氨基丁酸的回收率89.4%,纯度为96.7%。     

乳酸菌发酵促进小麦胚芽累积γ-氨基丁酸条件的研究

以纸层析法测定发酵液中γ-氨基丁酸含量,考察了发酵时间、温度、初始p H、缓冲体系以及磷酸吡哆醛和VB6对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DY-1发酵脱脂小麦胚芽累积γ-氨基丁酸的影响。在单因素实验基础上,利用正交实验设计优化了γ-氨基丁酸累积的发酵条件。研究结果表明,发酵时间对γ-氨基丁酸的累积有显著影响,γ-氨基丁酸累积的最适条件为发酵时间24 h,起始p H 5.0、VB6浓度0.2 mmol/L,在此条件下利用纸层析法测得发酵液中γ-氨基丁酸含量为0.954 mg/m L,进一步利用氨基酸分析得到γ-氨基丁酸含量为0.402mg/m L。经乳酸菌发酵后,麦胚中γ-氨基丁酸含量提高了3.4倍。     

高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌的微波诱变育种

目的利用微波辐照对植物乳酸杆菌进行诱变育种,筛选高产γ-氨基丁酸的正突变菌株。方法以TYG为发酵培养基,37.0℃培养48 h后,测定微波诱变后的植物乳杆菌产γ-氨基丁酸的量。结果诱变后突变菌株W_(462)S_5的γ-氨基丁酸的产量为9.18 g/L,相比于未诱变前的产量(4.64 g/L),提高了97.84%。对正突变菌株W_(462)S_5进行8次传代培养发酵,测得γ-氨基丁酸的产量较为稳定,表明W_(462)S_5是一株遗传性状稳定的正突变菌株。结论微波诱变菌株不仅有操作简单、设备常见、实验条件易于控制等优点,且选育出的菌株具有培养周期短、易于分离纯化、遗传性状稳定等优势。将此方法应用于发酵γ-氨基丁酸生产中,具有一定的研究意义。     

茶叶中γ-氨基丁酸提取、分离及薄层扫描测定的研究

对茶叶中γ-氨基丁酸的提取、分离及检测方法进行了研究,分别采用水和乙醇作为提取溶剂,结果发现用水提取能达到更好的效果,γ-氨基丁酸含量提高20%;同时采用离子交换树脂对γ-氨基丁酸提取液进行分离,提取液上732阳离子树脂柱(2.5×50cm),使用柠檬酸和氨水缓冲液进行pH线性梯度洗脱,洗脱液中γ-氨基丁酸最高浓度达39%;采用薄层扫描仪对γ-氨基丁酸的含量进行检测,研究并确定了检测的条件及参数.     

绿茶中γ-氨基丁酸提取工艺研究

试验主要研究了绿茶中γ-氨基丁酸提取工艺。通过正交试验确定绿茶中γ-氨基丁酸提取工艺的最佳工艺条件,即超声时间为30 min,超声功率为240 W,液料比值为20(m L/g),乙醇体积分数为90%。此条件下绿茶中γ-氨基丁酸提取率达到130.2 mg/100 g。     

高效液相色谱法测定乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸的含量

建立了高效液相色谱邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生-紫外检测法对乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸的含量进行了测定.乳酸菌发酵液经离心,OPA柱前衍生后,利用Luna-C18色谱柱(250×4.6 mm,5μm),以15 mmol/mL醋酸钠缓冲液∶甲醇为55∶45为流动相,在流速为0.8 mL/min,柱温30℃,紫外检测波长334 nm的条件下进行测定.结果表明:γ-氨基丁酸在50～800 μg/mL的浓度范围内线性关系良好,线性方程为y=5465.9x-5411(R2=0.9996),检测限为2.6714 μg/mL,平均回收率为98.31％,RSD=2.27％.该方法操作简单、快速,分离度好,精密度高,满足痕量分析要求.     

同位素内标液相色谱-串联质谱法检测酒类产品中γ-氨基丁酸

该研究建立了同位素内标液相色谱-串联质谱法检测白酒、啤酒、葡萄酒与黄酒中γ-氨基丁酸(GABA)的方法。酒样稀释后加入内标物γ-氨基丁酸-d₆,在Acclaim Trinity P1色谱柱上,以乙腈(含0.1%甲酸)+10 mmol/L乙酸铵溶液(1∶1,V/V)为流动相,采用电喷雾正离子多反应监测(MRM)模式采集数据,以保留时间定性,内标法定量。结果表明,在10～500μg/L质量浓度范围内,标准曲线的线性关系良好,相关系数R²为0.999 9。白酒、啤酒、葡萄酒、黄酒中γ-氨基丁酸检出限为0.02～1.64 mg/L,定量限为0.05～5.46 mg/L。精密度实验结果相对标准偏差(RSD)为0.86%～2.04%,加标回收率为88.8%～113.1%。该方法操作简单、快捷、灵敏度高,并具有良好的精密度与准确度,适用于酒类产品中γ-氨基丁酸的测定。     

超高效液相色谱法测定食品中的γ-氨基丁酸

建立超高效液相色谱法测定食品中的γ-氨基丁酸的方法。在碱性条件下,利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生法,采用Waters BEH C18分析柱(2.1 mm×50 mm×1.7μm),0.1 moL/L醋酸钾-甲醇进行洗脱,荧光检测器检测,激发波长:338 nm,发射波长:425 nm,峰面积外标法定量。γ-氨基丁酸检测浓度在0.1～20μg/mL范围内与峰面积积分值呈较好的线性关系,R=0.999 6;针对牛奶,糖果,粳米加样回收率为84.2%～110.5%,RSD=7.51(n=6),最低检测限为0.006μg/mL。本方法简便,准确,重现性好,适用于粳米,功能性添加γ-氨基丁酸的牛奶,糖果检测。     

糙米浸泡过程中γ-氨基丁酸的变化

简要论述了γ-氨基丁酸(GABA)的作用及其富集方法。从5个水稻品种中选取湘晚籼11号为原料,研究了糙米在不同浸泡条件下γ-氨基丁酸的变化。发现糙米在浸泡温度40~50℃,Ca2 浓度为0.5mmol/L,pH值为5~6,糙米与谷氨酸钠的比值为1200g/mol的浸泡液中浸泡4h后,其γ-氨基丁酸含量分别达最高。     

高效转化L-谷氨酸为γ-氨基丁酸菌株的筛选、鉴定及初步优化

从发酵食品及自然界中筛选出能利用L-谷氨酸生产γ-氨基丁酸的菌株,并对转化条件进行初步优化。采用乳酸菌分离纯化的方法分离出乳酸菌,再通过初筛、复筛挑选出高产γ-氨基丁酸的菌株,并对其进行形态学、常规生理生化鉴定及16S rDNA基因分析,随后对菌株产γ-氨基丁酸的转化条件进行初步优化。根据常见细菌系统鉴定手册,所筛菌株初步确定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。优化后的最佳转化条件为:菌株菌龄为36 h、缓冲液初始pH为4.8、缓冲液浓度为0.2 mol/L。在优化后的转化条件下,添加5 g/dL底物转化24 h,转化率最高可达97.81%,转化液中γ-氨基丁酸的质量浓度达34.26 g/L,该菌种可作为γ-氨基丁酸产生菌,具有较好的γ-氨基丁酸生产潜力。     

工艺条件对发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的影响

为获得高含量γ-氨基丁酸生产工艺条件,探讨了浸泡时间、培养时间、发芽温度对糙米发芽中γ-氨基丁酸含量的影响应用响应面分析法优化糙米发芽工艺条件,实验结果表明,高含量γ-氨基丁酸生产的最佳条件是:浸泡时间9.3h,发芽时间14.3h,发芽温度27℃,此条件下γ-氨基丁酸含量为232.8mg/100g.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定南瓜中γ-氨基丁酸的含量

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultraperformanceliquidchromatography/tandemmass spectrometry, UPLC-MS/MS)检测南瓜中γ-氨基丁酸的分析方法。方法南瓜样品用水作为提取剂,在80℃水浴条件提取分离10 min。以Waters ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱(150 mm×2.1 mm, 1.7μm)进行分离,以乙腈和0.1%(V:V)甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源正离子模式(ESI+)和多反应监测(multiple response monitoring, MRM)模式下进行定性定量分析。结果γ-氨基丁酸在0.10～2.00 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r2)≥0.999,检出限(limit of detection, LOD)为0.10 mg/kg。在低、中、高3个加标水平下的回收率为82.3%～93.8%,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为1.9%～4.5%。结论该方法灵敏高效,回收率优良,重复性好,适用于γ-氨基丁酸的有效检测。     

工艺条件对发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的影响

为获得高含量γ-氨基丁酸生产工艺条件,探讨了浸泡时间、培养时间、发芽温度对糙米发芽中γ-氨基丁酸含量的影响。应用响应面分析法优化糙米发芽工艺条件,实验结果表明,高含量γ-氨基丁酸生产的最佳条件是:浸泡时间9.3h,发芽时间14.3h,发芽温度27℃,此条件下γ-氨基丁酸含量为232.8mg/100g。