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糙皮侧耳菌漆酶的分离纯化及部分性质研究 总被引:5,自引:0,他引:5
对糙皮侧耳菌5.42产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、DEAE-Cellulose和SephadexA-50纯化,得到纯化18.1倍漆酶,得率36%,用PAGE检测为单一条带,用SDS-PAGE证明漆酶的分子量为61.4 kD,而用经过高效液相色谱分离的酶液进行质谱检测分子量为60.5 kD。该酶最适温度为40℃,最适pH为5.0。金属离子对酶活有很大的影响,其中K+、Mn2+、Cu2+有明显促进作用,Hg2+、Ag+、Ba2+等对酶活有明显的抑制作用。该酶与果胶酶按比例组合在一起,对荨麻生物脱胶取得良好的脱胶效果——木质素去除率为85%。 相似文献
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通过对液体发酵灰树花漆酶的酶活、Km常数、温度和p H值的测定,探讨了Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶酶活的影响,观察了漆酶对5种染料的脱色作用效果。结果表明:灰树花发酵液中漆酶氧化ABTS的Km为1.35×10-5mol·L-1,在p H值2~6的范围内均表现酶活,最适p H值为3.0,在25~70℃温度时范围内均有酶活,在50~55℃时酶活性最高。Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶的活性均有抑制作用,Ca2+离子的抑制作用较弱。灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿、甲基蓝和亚甲基蓝染料的脱色率分别为85.77%,81.10%,72.68%,22.02%和4.22%。介体ABTS对漆酶处理甲基蓝的脱色有促进效果,而对亚甲基蓝、溴甲酚绿和甲基红的脱色促进效果较弱,对甲基橙的脱色无促进作用。结论:本研究中灰树花漆酶最适p H值为3.0,在50~55℃时酶活性最高;灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿染料的脱色效果理想。 相似文献
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金龟子绿僵菌深层培养产几丁质酶的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)是一种重要的昆虫寄生真菌,从自然罹病死亡的金龟子体内分离到一株金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)M-6。研究了该菌深层培养产几丁质酶的情况,几丁质酶合成的最佳碳源和诱导物为几丁质,在以0.5%(w/v)几丁质为碳源时,其产几丁质酶活达0.126IU?mL?1,在一定范围内增加培养基中几丁质浓度,葡萄糖浓度,微量元素盐浓度和碳氮比都能提高几丁质酶活。胆汁酸和吐温80作为表面活性剂能显著提高几丁质酶活。通过摇瓶试验得到优化培养基和培养条件。根据优化条件在摇瓶和3.7L发酵罐中分别进行产酶试验,实验结果表明,几丁质酶活分别达到0.231IU?mL?1和0.273IU?mL?1。最适反应温度为55℃,最适反应pH6.0,在45℃,pH3.0~9.5较为稳定。Zn2+、Ca2+、Ba2+和Mn2+离子对几丁质酶活性有明显的促进作用,而Hg2+、Co2+和Fe2+离子完全抑制几丁质酶的活性。 相似文献
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采用紫外线照射诱变黑曲霉,筛选出低纤维素酶活的木聚糖酶高产菌株,研究了最优诱变条件,分析了诱变后黑曲霉产木聚糖酶的活性,测定了木聚糖酶对温度和pH值的稳定性。并初步探讨了木聚糖浓度、加酶量对酶解的影响。结果表明,最优诱变条件为:紫外照射功率40 W、照射距离28 cm、诱变时间2.5 min;黑曲霉产木聚糖酶的最适温度为50℃、最适pH值为4.2。木聚糖浓度对木聚糖的酶解没有影响,加酶量对木聚糖的酶解有一定影响;在木聚糖浓度为30 g.L-1、加酶量为2%~5%时,酶解效果较好。 相似文献
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用一株蜡状芽孢杆菌新菌株ZJB-07112 (Bacillus cereus ZJB-07112)发酵生产酰胺酶,经超声波细胞破碎、High Q阴离子色谱、Phenyl-Sepharose疏水色谱等步骤获得了凝胶电泳均一的酰胺酶。用12.5% SDS-PAGE测得该酶的分子量约为60.6 kD。其N端氨基酸序列为ATIRPDDKAI。该酶水解反应的最适pH和最适温度分别为7.5和35 ℃。在pH 7.5条件下,该酶在50 ℃以上容易失活,60 ℃保温30 min后,仅保留10.8%的酶活。除了Hg+ 、Ag+等重金属离子和尿素外,其他金属离子和EDTA对该酶的活性影响不大。以丙烯酰胺为底物时,该酶的Km和Vmax值分别为2.64 mmol·L-1和0.6 μmol·min-1·ml-1。 相似文献
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酶法转化制备L-瓜氨酸 总被引:5,自引:2,他引:5
利用粪链球菌精氨酸脱亚胺酶转化L-精氨酸制备L-瓜氨酸。考察了菌龄、转化温度等多种因素对精氨酸脱亚胺酶活力的影响。酶法制备L-瓜氨酸的最适工艺条件是:菌体发酵时间20 h,转化温度37℃,转化液起始pH为6.0,ρ〔十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)〕=0.3 g/L使酶活提高了414%。c(Co2+)=10-3mol/L使酶活增高约50%,c(Cu2+)=10-2mol/L或c(Zn2+)=10-2mol/L使酶活下降约50%。Ca2+、Mg2+和Mn2+对酶活影响较小。 相似文献
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《高校化学工程学报》2016,(2)
采用实验室从海底淤泥中筛选得到的海洋黑曲霉固态发酵生产纤维素酶,纤维素酶粗酶液经过硫酸铵分级沉淀、超滤、离子交换层析和疏水层析分离纯化后,得到了电泳纯的内切纤维素酶,酶的比活力由37.72 U·mg~(-1)提高到557.27 U·mg~(-1)。SDS-PAGE显示该内切纤维素酶的分子量约为34 kDa。考察了该酶的酶学性质,结果表明该酶的最适温度为60℃,最适pH为4.5,具有较好的热稳定性和p H稳定性。金属离子对该内切纤维素酶的酶活影响较大,Cu~(2+)、Fe~(2+)对内切纤维素酶具有一定的激活作用,Mn~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)对酶活性具有强烈的抑制作用。当NaCl浓度为40 g·L~(-1)时具有最佳酶活,在20~60 g·L~(-1)的高NaCl浓度环境下的酶活均高于不含NaCl环境下的酶活,在200 g·L~(-1) NaCl高盐浓度下,该酶尚能保持初始酶活的89%,是典型的耐盐型酶。对该酶的酶促进反应动力学进行研究发现其在pH4.5、60℃条件下米氏常数Km为11.7 mg·mL~(-1),Vmax为943.4 U·mg~(-1)。 相似文献
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从腐朽的竹子上分离得到一株产木聚糖酶侧耳真菌Pleurotus sp.GH196,研究了其液体振荡培养的产酶条件。适宜碳源是1%稻草粉与1%麸皮组成的复合碳源,氮源是0.2%NH4NO3。经过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤三步纯化得到木聚糖酶的一个主要酶活组分A。该木聚糖酶在40~50℃、pH 4.0~5.5可以保持较好的稳定性,酶活最适反应条件是温度55℃、pH 4.5。 相似文献
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从自然罹病死亡的金龟子体内分离到一株金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae),它在几丁质的诱导下能产生较高活性的几丁质酶.发酵液经硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl SepharoseTM 6 Fast Flow疏水柱层析等方法,得到电泳纯的几丁质酶.用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量为61.5 kD,而经质谱分析为57.14 kD.最适反应温度为55 ℃,最适反应pH值为6.0,酶的等电点pI为4.02,其N末端序列为VIGPAAPL,用硫酸-酚法测得其含糖量为56.2%.水解几丁质的Km为14.5 μmol8226;L-1.该酶在45 ℃,pH值3.0~9.5较为稳定.Zn2+、Ca2+、Ba2+和Mn2+离子对几丁质酶活性有明显的促进作用,而Hg2+、Co2+和Fe2+离子完全抑制几丁质酶的活性.此酶还可被EDTA所抑制,表明金属离子为其活性所必需.PMSF试剂对几丁质酶的活力影响比较大,丝氨酸可能是酶活力的必需基团. 相似文献
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以纤维素浆粕及尿素为原料,在二甲苯体系中于135~140℃反应制取纤维素氨基甲酸酯。通过实验考察了各种工艺参数,结果显示:当原料活化用氢氧化钠溶液浓度为14%~16%,活化温度为40~50℃,活化时间为30~40 min,尿素与纤维素的质量比为2~3︰1,合成反应时间为2~3h时,产品纤维素氨基甲酸酯可在氢氧化钠溶液中形成良好的稳定的溶液且具有良好的过滤性和可纺性。 相似文献
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抗氧抗铜剂1024的合成研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以[β (3,5 二叔丁基 4 羟基苯基)丙酸甲酯、氯化亚砜、水合肼为原料,经水解、卤置换、胺酰化和缩合反应合成1024,讨论了各步反应条件对成品收率及质量的影响。最佳反应条件:①3,5 丙酸的合成:pH值1~3,干燥温度100~105℃;②3,5 丙酰氯合成:3,5 丙酸与氯化亚砜摩尔比为1∶1.3,重结晶温度0~7℃;③3,5 丙酰肼合成:反应时间24h,反应温度为室温;④1024合成:3,5 丙酰肼和3,5 丙酰氯的摩尔比为1∶1.3。1024总收率为67.4%,熔点223~227℃。 相似文献
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大豆脂肪氧合酶(LOX)的固定化及增强稳定性 总被引:1,自引:1,他引:1
以活性白土、滑石粉为载体采用吸附法固定化大豆脂肪氧合酶(LOX)的优化条件为:(1)酶液对活性白土的用量比为897U/mg,在浓度为0 05mol/L、pH=7 0的磷酸盐缓冲液中20℃搅拌吸附30min;(2)酶液对滑石粉的用量比为238U/mg,在浓度为0 05mol/L、pH=8 0的磷酸盐缓冲液中10℃搅拌吸附15min。经放大后实验重复性良好。上述固定化酶置于0~4℃保存20d,酶活损失分别为19 2%和17 7%;与游离酶相比,能加快酶促反应的速度并使产率分别提高9 6%和42 5%。以海藻酸钠为载体采用包埋法得到的固定化酶珠的耐热、耐酸碱、耐有机溶剂能力较游离酶有很大提高,在φ(甘油)=75%的水溶液中保存33d,酶活基本保持不变;在50℃热处理60min后酶活仍能保持90%。 相似文献