康宁木霉与米根霉混合发酵生产纤维素酶和木聚糖酶的研究

对康宁木霉QF-02和米根霉NRRL395液态混合发酵生产纤维素酶和木聚糖酶的工艺进行了研究.实验结果表明:康宁木霉先接种培养48 h后再接种米根霉产酶效果最佳,在此接种方式下获得的优化培养温度为28℃,起始pH为5.0.混合菌在发酵罐中的产酶趋势与康宁木霉纯培养类似,最大酶活都出现在120 h,但混合培养物中FPA、B-葡萄糖苷酶活和木聚糖酶活比纯培养分别提高14.8%、45.4%和4.3%.米根霉的加入使混合培养物中还原糖浓度下降并维持在较低水平,而康宁木霉纯培养中还原糖呈不断增加的趋势.康宁木霉和米根霉混合发酵产酶的微生态原理应归于二者形成了相互促进的共生关系.     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化，获得接近电泳纯蛋白．通过SDS—PAGE测得相对分子质量为24500．木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白，含有质量分数20．24％的糖．O-糖基化能增加木聚糖酶的活性，O-和N-糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性．5min反应，草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高．在此条件下，该酶的Km值为3．87mg／mL，Vmax为1250IU／mg．纯酶的稳定pH值为6．54，57℃时半衰期为1h。     

细菌木聚糖酶粗酶的提取及性质的研究

在２０℃条件下,采用相对饱和度为５０％的（ＮＨ４）２ＳＯ４一步盐析并经４５￣５０℃烘干１０ｈ得到木聚糖酶粗酶粉。初步研究了该酶的一些基本性质,结果表明,该酶在５５℃下,ｐＨ值为４．６￣１０．５之间较达作用温度与ｐＨ值分别为５０℃和７．６,该粗酶产品适合造纸工业的纸浆处理。     

康氏木霉ZJ5纤维素酶发酵培养基的优化

采用响应面方法对康氏木霉(Trichoderma koningii)ZJ5生产纤维素酶的培养基进行了优化，首先通过全因子实验分析培养基组分；稻草粉、麦麸、大麦粉和(NH4)2SO4对纤维素酶三个组分活性的影响，确定主要影响因子为稻草粉和(NH4)2SO4，前者为正影响，后者为负影响，用最陡爬坡路径逼近最大响应区域，利用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度，在优化培养基中发酵6d，CMC酶活、滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活分别达到了765．8、155．3U／mL和39．54U／mL。     

绿色木霉DNA提取方法研究

利用CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法等4种方法提取了绿色木霉DNA,并采用琼脂糖凝胶电泳和PCR对DNA进行了评价.凝胶电泳检测结果表明4种方法均可提取到绿色木霉DNA,但PCR检测结果表明只有CTAB法和简化CTAB法提取的DNA可用作CBHII基因的PCR模板.     

瑞氏木霉木聚糖酶Ⅰ基因的克隆、序列分析及在酵母中的表达

本实验从构建于大肠杆菌DH5α的瑞氏木霉cDNA文库中用PCR法体外扩增到木聚糖酶I（XynI)的DNA片段，然后连接至穿梭载体pAJ401,转化酵母H158,以刚果红染色法筛选阳性重组子并测序，当将其mRNA5‘端非翻译区的79个碱基删除后，木聚糖酶的表达水平显著提高，有可能此基因的调节区位于5‘端非翻译区内，而且可能被酵母的相关基因表达因子所识别。     

木聚糖酶酶活测定方法的探讨

介绍了使用分光光度计测定木聚糖酶酶活的3种测定方法，重点阐述了其中工作曲线法的测定步骤及有关注意事项。     

木聚糖酶产生菌的分离筛选及酶学性质

利用透明圈法从云南腾冲温泉出水口土样中粗筛出12株木聚糖酶产生菌,其中Xylan-12菌活力较高,对其进行了16S rDNA部分序列测定,经BLAST同源性分析确定其为Bacillus flavothermus。对Xylan-12产生的木聚糖酶进行了酶学性质的初步研究,结果表明,该酶的最适pH为6,最适温度为65℃。     

固态发酵产木聚糖酶条件优化及其酶学性质初步研究

以树干毕赤酵母作为发酵菌株对其固态发酵产木聚糖酶的条件进行优化,并对木聚糖酶的性质进行初步研究.由试验结果可知,最优培养条件为玉米芯与小麦麸皮质量比为1∶1,初始水分含量为80%,培养基的基质密度为0.7～0.9 g/mL.28℃下培养9 d,木聚糖酶活力最高达到5 536 U/g.该酶的最适反应pH为6,在pH 6~8时酶活稳定性较好,保温1 h后仍可保留90%以上的酶活;最适温度为60℃,在50~60℃时热稳定性较好;Zn2+、Ca2+和Cu2+对木聚糖酶的活力具有微弱促进作用,Fe2+、Fe3+和Mn2+对木聚糖酶的抑制作用比较明显.     

绿色木霉内切葡聚糖酶基因Ⅰ的克隆表达

为深入研究绿色木霉(Trichoderma viride)内切葡聚糖酶(EGⅠ)的特性与功能,利用Northern blot方法分析不同碳源条件下绿色木霉的egⅠ表达,采用RT-PCR方法从绿色木霉T4中克隆egⅠ基因的cD-NA序列,测序与生物信息学分析,并构建诱导型表达载体pYES2-egⅠ,转化酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)INVSc1和H158中表达.结果表明:绿色木霉在含有纤维素的液体培养基中生长,egⅠ高效表达,在秸秆中表达量最高.纤维二糖中表达量相对较低,在葡萄糖、果糖中没有表达.egⅠ基因编码框长度1 377bp,编码459个氨基酸.含有信号肽,为分泌蛋白,属于糖苷水解酶家族7,具有纤维素酶结合域(CBD)和催化域(CD).INVSc1转化子发酵培养48 h达到转录高峰期,60 h达到酶活高峰期,酶活为0.081 6 U/mL,酶活比H158转化子提高32.5%.     

米曲霉利用农业废弃物产木聚糖酶的条件优化

主要研究了米曲霉利用农业废弃物产木聚糖酶的情况.对实验室保藏菌株米曲霉M-9生长所必需的碳源、氮源、培养温度和培养基初始pH等条件进行了优化.实验表明,此菌株最适碳源是粒度小于0.08 mm的玉米芯（质量分数为4.0%）,最佳复合氮源是质量分数为1.2%的酵母提取物加质量分数为0.8%的大豆蛋白胨,最适初始pH值为7.5,最适产酶温度为30℃,最佳转速为200 r/m in,添加表面活性剂吐温60对菌株产酶有促进作用.在最适培养条件下,培养5 d,米曲霉沪酿M-9木聚糖酶的产量高达795.93 U/mL,是优化前的2.2倍.     

康宁木霉cbh2基因cDNA的克隆及序列分析

采用植物叶总RNA提取试剂盒提取康宁木霉总RNA,利用依据木霉cbh2基因序列设计合成的一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增得到了康宁木霉cbh2基因cDNA,并成功转入大肠杆菌.序列测定结果表明该基因序列与已公布的木霉cbh2基因的同源性最高可达91.93%.     

康宁木霉产纤维素酶固态发酵条件研究

对康宁木霉产纤维素酶的最佳固体发酵条件进行了优化,研究表明：最佳氮源为硫酸铵或磷酸氢二铵,最佳碳源为小麦秸秆：麦麸=3：2,添加0.1％的Tween80、含水量为300％,28℃条件下培养4d产酶活力最高．初始pH值对CMC酶活影响较大,当pH=3.0时CMC酶活最高,初始pH值对滤纸酶活影响较小,pH=5时酶活最高．     

枯草芽孢杆菌产木聚糖酶发酵条件的研究

通过单因素和正交试验,对芽胞杆菌产木聚糖酶的发酵条件进行了研究.结果显示最佳产酶条件是:2%麸皮、0.5%(NH4)2HPO40、.1%K2HPO4、0.02%MgSO4.2H2O、0.2%吐温80、1mmol/L微量元素(Fe2 ,Zn2 )、pH9.0、35℃和振荡培养48 h.其木聚糖酶活力可达到2.67 IU/mL.     

里氏木霉R3液体深层发酵产纤维素酶工艺优化研究

研究了温度、pH值、溶氧对里氏木霉R3液体深层发酵产纤维素酶的影响,并进行了工艺优化.用50 L全自动通气机械搅拌发酵罐,接种量10%,发酵过程采取分段控制pH值、温度和溶氧的工艺,发酵120 h酶活力最高,FPA和CMC酶活力分别达到48.9 FPIU/mL和321.68IU/mL,FPA酶活比工艺优化前提高了221%.     

低次烟叶蛋白肽抗氧化特性的研究

采用复合蛋白酶水解低次烟叶蛋白，产生的酶解物中蛋白肽根据其分子量大小进行了分离，在此基础上采用氧化亚油酸体系TBA法和DPPH自由基清除活性研究了不同肽组分的抗氧化活性。低次烟叶蛋白酶解液经超滤膜分级分离，得到透过10kDa、5kDa、3kDa和1kDa4种截留分子量膜的肽组分，其中透过5kDa的肽组分具有较高的抗氧化活性，其氧化抑制率为42．55％，是原蛋白酶解液活性的2倍左右，接近VE的抗氧化活性。透过5kDa的肽组分对DPPH自由基的清除活性最强（清除率达到83．82％），略低于VE的清除活性。试验结果袁明．低次烟叶蛋白经盆合蛋白酶酶解后产生的蛋白肽功能特性有明显的改善。     

Protamex水解牛肉的研究

选用Protamex对牛肉蛋白进行单酶水解研究.在单因素分析的基础上采用响应面分析方法对牛肉酶解条件进行优化,得出了最佳的水解条件:酶浓度(E/S)2.0%,温度54℃,pH值6.4,液固比5.2:1,水解时间2 h,此条件下的理论水解度为12.57%.     

木聚糖酶预处理结合次氯酸钙漂白的研究

NaOH-AQ麦划浆通过木聚糖酶预处理，结合次氯酸钙单段漂，不仅有利于改善漂白浆的白度，大幅度降低漂白剂的用量，而且可以提高成纸的综合强度性能。