加酶超声提取核桃抗氧化肽工艺优化

实验利用脱脂核桃粕为原料,在加酶提取核桃抗氧化肽工艺基础上,采用超声辅助技术,研究了超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽的最佳提取条件。以对DPPH自由基清除率为考察指标,在单因素实验基础上进行正交实验优化超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽工艺。结果表明:加酶超声提取核桃抗氧化肽的最优工艺为:酶解时采用Alcalase2.4L碱性蛋白酶,料液比(核桃粕:缓冲液)1:20,[E]/[S]为13:500、pH9、酶解温度49℃的条件下酶解2h;超声功率150W,超声时间20min,超声温度50℃,在此条件下制备的核桃抗氧化肽对对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的清除率达65.11%,抗氧化肽产率62.37%。     

核桃饼粕蛋白提取、多肽制备条件优化及其酶解液的抗氧化性研究

本研究以去除多酚的核桃粕为原料,利用均匀试验优化核桃粕碱溶性蛋白提取条件,利用二次通用组合旋转设计优化双酶法制备核桃粕多肽制备条件,结合项目组前期建立的模拟胃肠道消化体系及模拟胃肠道消化体系+混合乳酸菌两种体系,制备核桃粕蛋白酶解液,采用体外实验对比三种体系制备核桃粕蛋白酶解液的抗氧化活性。核桃粕蛋白质最佳提取条件为:提取溶液的pH11、料液比为1:21 (g/mL)、提取温度65 ℃、提取时间70 min,提取2次,在此条件下提取液蛋白含量为221.6233 mg/g。双酶法制备核桃粕多肽工艺条件分为两个阶段,第一阶段胃蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:底物质量浓度为1 g/100 mL、pH2.4、加酶量为133.53 U/g、温度为40 ℃、时间139 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液水解度25.90%;第二阶段胰蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:加酶量800 U/g、温度20 ℃、pH为6、酶解时间240 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液的水解度为35.57%。三种酶解液的总抗氧化能力V_C当量值分别为:双酶酶解液0.0516 mg/mL,体外模拟胃肠道消化酶解液0.0634 mg/mL、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌酶解液0.0411 mg/mL,用双酶、体外模拟胃肠道消化、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌三种体系制备的核桃粕蛋白酶解液均具有抗氧化性活性,而双酶法制备的核桃粕酶解液具有较强的抗氧化活性。     

微囊化核桃肽制备及其稳定性研究

本研究以冷榨核桃粕酶解制备的核桃肽为原料,以β-环糊精为壁材对其进行微囊化处理。从芯材壁材比、包埋温度,包埋时间三个因素对微囊化核桃肽的制备工艺进行优化,并对微囊化核桃肽稳定性进行研究。结果显示,微囊化核桃肽的最佳制备工艺为芯材与壁材的比例1∶10,包埋温度为60℃,包埋时间为60min,此时包埋率为80.05%。90d稳定性实验结果显示微囊化核桃肽水分增加明显缓于核桃肽,提示微囊化核桃肽性质更加稳定,更易于存储。     

核桃肽制备工艺的优化及其改善记忆功能研究

目的:以核桃粕为原料,探讨核桃肽制备工艺优化及其改善记忆力功能活性。方法:通过单因素实验和正交试验对核桃肽的制备工艺进行优化;同时采用水迷宫试验、跳台试验以及避暗试验评价核桃肽对记忆功能的影响。以雌性小鼠作为受试动物,分为低、中、高三个剂量组及空白对照组,灌胃剂量分别为1.33、2.66、3.99 g/kg BW,空白对照组灌胃蒸馏水处理,连续灌胃30 d,末次灌胃24 h后开始试验。结果:最佳酶解制备工艺为前处理柠檬酸浓度2%、碱性蛋白酶添加量4%、料液比1:15、酶解时间4 h,此条件下核桃肽收率为33.5%且具有良好的澄清度;水迷宫试验中剂量组达到终点的动物数显著高于空白对照组（P<0.05）,避暗试验高剂量组潜伏时间极显著延长,错误次数及错误反应率极显著减少（P<0.01）,核桃肽具有改善记忆的功能活性。结论:本研究在保证核桃肽产品质量的同时提升了产品澄清度,同时功能研究结果显示核桃肽可从主动回避和被动回避两方面改善受试小鼠记忆力。     

核桃谷蛋白抗菌肽的分离纯化及抑菌稳定性分析

目的：以核桃粕谷蛋白为原料生产抗菌肽,研发一种新型抗生素的替代品。方法：通过菌酶协同固态发酵法（枯草芽孢杆菌和碱性蛋白酶协同）从核桃粕谷蛋白中制备抗菌肽,通过超滤、凝胶层析过滤、液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）和分子对接对核桃粕谷蛋白抗菌肽（walnut glutelin antimicrobialpeptide,WGP）进行分离、纯化和筛选。以对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌性保持率为指标,研究抗菌肽的抑菌稳定性。结果：经超滤、凝胶层析分离后,WGP-ⅢA和WGP-ⅢC组分均具有较强抗菌活性;LC-MS/MS结合虚拟筛选,从2种组分中共鉴定得到6条多肽,分子对接筛选得到3个肽段,分别为WGP-ⅢA组分的LAEAYNIPDTIARRL和WGP-ⅢC组分的SHSVIYVIR、APQLLYIVK;分子对接结果显示,WGP-ⅢC组分的抑菌活性更强;抑菌稳定性分析表明,核桃谷蛋白抗菌肽在高温热处理、紫外线、不同pH值下和不同蛋白酶处理后均表现出较好的稳定性。结论：核桃粕谷蛋白抗菌肽在食品抑菌防腐...     

酶解黄秋葵籽蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

利用制备的黄秋葵籽粕蛋白为原料,采用酶解法以获得具有抗氧化活性的多肽,为黄秋葵籽粕的精深加工提供理论依据。首先进行蛋白酶的筛选,选取最佳的碱性蛋白酶对碱溶酸沉法制备的黄秋葵籽粕蛋白进行酶解;以水解度和DPPH自由基清除力为指标进行单因素试验,分别考察底物浓度、酶解时间、加酶量、pH值和酶解温度对制备抗氧化活性肽的影响;然后应用响应面法,以DPPH自由基清除力为响应值,对黄秋葵籽粕蛋白抗氧化肽的制备工艺进行优化,确定的最佳制备工艺参数为:底物浓度0.7%、酶解时间3.8 h、酶用量6%、酶解温度50℃和pH 8.0。抗氧化试验结果表明,制备的抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为50.83%。     

酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺优化

为获得优质的核桃蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备原料及优化其制备工艺,采用连续提取法从脱脂核桃粕中依次分离出清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白-1和谷蛋白-2 5种组分蛋白,测定5种组分蛋白的占比及ACE抑制率,以ACE抑制率最大的组分蛋白作为原料采用酶解法制备ACE抑制肽,在筛选出最适酶解用酶基础上,采用单因素试验与响应面试验优化酶解制备核桃蛋白ACE抑制肽的工艺。结果表明：5种组分蛋白中谷蛋白-1占比仅次于谷蛋白-2,且其ACE抑制率最高,以核桃谷蛋白-1为原料,在筛选出胃蛋白酶作为酶解用酶基础上,经工艺优化得到最优的酶解法制备核桃谷蛋白-1 ACE抑制肽的工艺条件为酶解温度46℃、酶解时间6 h、酶用量4.2%(以底物质量计)、酶解pH 1.6,在该条件下所得核桃谷蛋白-1酶解液的ACE抑制率为(50.08±2.34)%。因此,核桃谷蛋白-1经胃蛋白酶酶解可生产ACE抑制活性较高的核桃多肽。     

辣椒粕分离蛋白酶解工艺条件的优化

从辣椒粕中提取粗蛋白,建立蛋白酶水解辣椒粕分离蛋白制备呈味肽的最佳条件。以水解度和肽得率为指标,对胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶4种酶水解辣椒粕分离蛋白的效果进行比较研究。结果表明:复合蛋白酶的水解效果最佳。通过单因素试验选取复合蛋白酶作用的固液比、酶用量、酶解时间、酶解pH值及酶解温度作为试验因素,初步确立复合蛋白酶的水解条件。并通过正交试验优化最终确定复合蛋白酶水解辣椒粕分离蛋白的最佳工艺条件为固液比110(mV),酶用量2.0%,酶解时间4h,酶解pH值6.5,酶解温度50℃。通过实验验证,在该条件下,复合蛋白酶对辣椒粕分离蛋白具有较好的水解效果,其水解度为19.60%,肽得率为6.30%。     

核桃粕鲜味物质提取工艺研究

以核桃粕为原料提取鲜味物质,利用电子舌检测技术,通过单因素试验和正交试验优化酶法提取核桃粕中鲜味物质的提取工艺.结果 表明:各因素对鲜味物质提取的影响大小依次为酶解温度＞酶解时间＞加酶量.最佳提取工艺为酶解温度50℃、酶解时间150 min、加酶量0.20％(以核桃粕质量计)、水料质量比25∶1,在此工艺下获得的核桃粕...     

核桃粕酶解工艺研究

以核桃粕为原料,用复合蛋白酶与风味蛋白酶水解制备核桃多肽,对酶解工艺中的多种影响因素、工艺参数进行了研究,探索出了酶法水解核桃粕的最佳工艺参数。     

枯草芽孢杆菌发酵豆渣制备多肽及其活性研究

以纤维素酶酶解后的豆渣为原料,利用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）液态发酵豆渣制备大豆多肽,并以大豆多肽得率为响应值,通过单因素试验及响应面法对其制备工艺进行优化,并测定其抗氧化活性与抑菌活性。结果表明,枯草芽孢杆菌液态发酵豆渣制备大豆多肽的最优工艺条件为：接种量3%、发酵温度37 ℃、发酵时间60 h。在此优化条件下,大豆多肽得率为88.12%;其对1,1二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力的半效应浓度（EC50）值分别为（2.36±0.05） mg/mL、（2.97±0.03） mg/mL;多肽质量浓度为25 mg/mL时,大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）抑菌圈直径分别为（27.65±0.32） mm、（23.18±0.14） mm。结果表明,大豆多肽具有一定的抗氧化及抑菌活性。     

结合预处理方法的酶法制备美藤果肽工艺的优化

以美藤果粕为原料,制备美藤果肽。通过对比多种预处理方式,筛选出可促进蛋白水解的预处理方法,在此基础上利用响应面实验优化美藤果肽的酶法制肽工艺,并分析此法制得的肽相对分子量。结果表明:碱性蛋白酶最适宜用于美藤果肽的制备,而添加0.15%~0.45%亚硫酸钠、表面活性剂十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)或采用不同频率的超声预处理,能使美藤果蛋白酶解效果提升10%~50%,其中40 Hz的超声预处理效果最佳。响应面实验优化得到的最佳工艺为:40 Hz 15 min超声处理美藤果粕,添加7600 U/g碱性蛋白酶,52℃下酶解6 h,美藤果蛋白水解度为18.21%,得到相对分子量小而集中的寡肽(<1000 Da占94.64%),其中分子量在180~500 Da范围的占过半比例。     

核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸组成特性研究

目的:为了提高核桃粕利用价值,阐明核桃多肽抗氧化活性及其构效关系。方法:采用DA 201-C大孔树脂和Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化核桃粕蛋白酶解液,分析比较不同疏水性和不同分子量核桃多肽抗氧化活性及氨基酸组成特性。结果:经DA 201-C大孔树脂分离的多肽组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的抗氧化活性随洗脱溶剂疏水性增大而增大。组分Ⅲ经Sephadex G-15分离纯化得到a、b、c、d四个不同分子量多肽组分。分子量分布在400~700 Da的组分c具有最高的羟自由基清除能力,并含有较高的谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸,与组分Ⅲ在氨基酸组成上具有相似性。结论:具有较好抗氧化活性的核桃多肽分子量小于800 Da,并具有疏水性较强,谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸组成含量相对较高的结构特性。     

超声辅助核桃饼脱脂和多肽制备工艺的优化

采用超声辅助核桃饼脱脂,并以脱脂核桃粉为原料制备核桃蛋白,采用碱性蛋白酶酶解核桃蛋白制备多肽。通过单因素实验和正交实验对超声辅助核桃饼脱脂和核桃多肽制备工艺条件进行优化,并对最优条件下制备的核桃多肽的特性进行分析。结果表明:超声辅助核桃饼脱脂最优条件为料液比1∶20、超声功率500 W、超声时间140 min,在最优条件下脱脂率为91.23%,蛋白损失率为11.32%;酶解制备核桃多肽的最优工艺条件为酶解温度50℃、酶解pH 9、加酶量3.0%、酶解时间5.0 h,在最优条件下水解度达到22.63%,多肽得率为88.24%。核桃多肽粗蛋白质含量约为95%,相对分子质量小于1 000 Da的多肽占比达91.61%。     

响应面法优化黄粉虫抗菌肽酶解工艺

目的：确定黄粉虫抗菌肽的最佳酶解工艺。方法：以黄粉虫为原料,碱提酸沉法提取黄粉虫蛋白质,再利用筛选出的蛋白酶进行水解,并用琼脂平板扩散法(打孔法)表征制得抗菌肽的抑菌活性。在单因素试验的基础上,应用Box-Behnken中心组合试验设计和响应面(RSM)分析法,探讨酶解温度、pH值、酶解时间、加酶量及底物质量浓度对酶解产物抑菌活性的影响。结果：碱性蛋白酶最适合水解黄粉虫蛋白制备抗菌肽,其最佳工艺条件为：底物质量浓度810g/100mL、酶解时间4.4h、加酶量440U/g pro、酶解温度54℃、pH9.5;酶解物抑菌圈大小理论预测值为15.17mm,实际测量值为15.04mm。结论：碱性蛋白酶水解黄粉虫蛋白能够得到抑菌活性较强的酶解物,优化的工艺条件与理论预测拟合程度较高。     

响应面法优化猪血红蛋白抗菌肽的制备工艺

以猪血红蛋白为原料,利用筛选出的蛋白酶水解制备抗菌肽,以酶解液抑菌率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、加酶量和酶解时间3个主要工艺参数进行研究,在此基础上,通过响应面优化酶解工艺,建立数学模型.结果表明,胰蛋白酶最适合水解猪血红蛋白制备抗菌肽,其最佳条件为酶解温度49.72℃、加酶量2852.81U/g、酶解时间5.19h,酶解产物抑菌率的理论预测值89.70％,实际测量值90.32％.可见,利用胰蛋白酶水解猪血红蛋白能够得到抑菌活性较高的酶解产物,且该模型能够较好的预测抗菌肽制备最佳工艺条件.     

Plackett-Burman和Box-Behnken试验优化苦荞蛋白酶解制备抗菌肽的工艺

用中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽,以抑菌率和肽质量浓度为响应值,在底物质量分数、加酶量、pH值、酶解温度和酶解时间5个单因素试验基础上,采用Plackett-Burman试验选出其中影响显著的因素,再以肽质量浓度为评价指标,用Box-Behnken试验优化抗菌肽制备工艺。最佳工艺为:底物质量分数3.22%、加酶量4 000 U/g、pH 6.86。在此条件下,苦荞蛋白酶解产生的肽质量浓度为32.41 mg/mL(预测值为32.12 mg/mL),对大肠杆菌抑菌率为(27.88±2.78)%,对金黄色葡萄球菌的抑菌率为(94.56±0.74)%。结果表明,优化中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽工艺合理。     

Preparation of sesame peptide and evaluation of antibacterial activity on typical pathogens

The antibacterial activity of sesame peptides on common pathogen was evaluated. The preparation of sesame protein hydrolysate was carried out in an enzymatic membrane reactor followed by fractionation through several ultrafiltration stages to obtain desired peptide fractions and evaluation of their antibacterial activity using two pathogens namely, Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis. Potential sesame peptides were characterized by mass spectroscopy (TOF-MS) followed by determination of their corresponding amino acid compositions. Sesame peptide fraction of molecular mass less than 1 kDa exhibited significant inhibition against growth of P. aeruginosa as compared to B. subtilis. Thus, these findings confirm the bacteriostatic effect of sesame peptide on growth of pathogens which can be exploited in bacteriostat composition.     

酶法制备大豆肽的相对分子量分布及降压作用研究

目的:为了研究双酶复合酶解大豆分离蛋白制备大豆肽的相对分子量分布及活性片段对实验性高血压大鼠的降压效果。方法:通过单因素实验优选,采取正交实验优化复合酶的酶解工艺,以酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标优选最佳工艺;通过超滤、纳滤后得到最佳分子量片段,应用左硝基精氨酸(L-NNA)诱导大鼠高血压模型,分别给予不同剂量的活性片段进行实验。结果:双酶复合酶解的最佳条件为:在料液比为1:20 g/mL的情况下,酶解温度50℃,酶底比3.0%,酶解pH7.0条件下先用菠萝蛋白酶酶解2 h后,再以酶底比4.0%加入胰蛋白酶,控制温度为40℃、酶解pH为8.0条件下酶解4 h,大豆分离蛋白的水解度35.31%。经过高效液相对酶解液的相对分子量分布得出,大豆分离蛋白原液含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间在5000~1.0×105 Da,在双酶复合酶解下,酶解液的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间均在500~4000 Da;通过超滤得出最佳活性片段为1000~3000 Da,药理实验表明,与模型对照组相比各组血压均有降低,且大豆肽剂量组有显著性差异(p<0.05);其中大豆肽高剂量组和卡托普利组相当。结论:双酶复合酶解制备的大豆肽相对分子量较小,活性片段对高血压大鼠模型降压作用显著。     

复合酶法制备小麦面筋蛋白咸味酶解液的工艺优化

为优化小麦面筋蛋白咸味酶解液的制备工艺,并考察其咸度及分子量大小.基于单因素实验,采用Box-Behnken响应面法,以酶添加量、酶解pH、底物浓度以及酶解温度为考察因素,水解度为指标,优化小麦面筋蛋白咸味酶解液的制备工艺,并采用电子舌测定其咸度;高效液相色谱测定其分子量分布.结果表明:制备小麦面筋蛋白咸味酶解液的最优...