叶酸-青霉素G酰化酶对SKOV3实体肿瘤靶向性的实验研究

采用Iodogen法对叶酸-青霉素G酰化酶(Folate-conjugated Penicillin G Amidase,F-PGA)和PGA进行125I标记。将纯化后的标记物由尾静脉注入荷SKOV3实体瘤裸鼠体内,观察F-PGA对叶酸受体阳性的SKOV3的靶向性。结果显示:标记产品纯化后放化纯度>95%,且体内外稳定性较好;荷SKOV3肿瘤的裸鼠注射125I-F-PGA后4~24 h肿瘤显像较清晰,而注射125I-PGA组所有时相均未见明显的肿瘤部位放射性浓聚影;125I-F-PGA组的肿瘤与健侧肌肉的摄取比值(T/M)明显高于对照组(F=13.38,P=0.014 6),且在非靶组织中清除较快。表明F-PGA在荷瘤鼠体内能特异性地与叶酸受体阳性的SKOV3实体肿瘤进行靶向结合,其T/NT>1,有望用于靶向治疗。     

99Tcm-DTPA-Folate的制备及其荷瘤裸鼠体内分布

制备了99Tcm-DTPA-Folate并对其在荷瘤裸鼠的体内分布进行了初步探索.将叶酸(Folate)与DTPA连接,合成DTPA-Folate,再用99Tcm标记,考察标记物的纯度和稳定性,并进行荷人SGC-7901胃癌肿瘤裸鼠的体内分布特性研究.结果表明,99Tcm-DTPA-Folate的标记率＞98%.标记物室温放置4h,放化纯度＞90%.裸鼠腹腔注射99Tcm-DTPA-Folate后8h,肿瘤与周围肌肉的含量比值高达7.51.     

叶酸靶向顺铂聚合物胶束对肺癌细胞SPC-A-1的毒性和辐射增敏作用

以顺铂为对照,使用具有叶酸靶向基团的聚乙二醇枝接聚天冬氨酸聚合物胶束顺铂载体FA-PEG-g-PAsp-CDDP和无叶酸靶向基团的mPEG-g-PAsp-CDDP,通过比较这3种药物对肺癌细胞SPC-A-1体外的细胞毒性以及单独用药和同步放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,验证FA-PEG-g-PAsp-CDDP的肿瘤抑制和辐射增敏效果。在体外CCK-8实验中比较顺铂、FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP对过表达叶酸受体的肺癌细胞株SPC-A-1的细胞毒性作用,在体内试验中比较顺铂、FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP单独用药和同步放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制及放射增敏作用,并观察对裸鼠体重的影响。结果显示:含过量叶酸的普通培养基中FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP的细胞毒性作用相似,而在不含叶酸培养基中FA-PEG-g-PAsp-CDDP的细胞毒性高于mPEG-g-PAsp-CDDP,IC50约为后者的1/(3p<0.05)。单独用药实验中FA-PEG-g-PAsp-CDDP和CDDP体内抑瘤效果无统计学差异(p>0.05),但均高于mPEG-g-PAsp-CDDP组和空白对照组(p<0.05);同步放化疗实验中FA-PEG-g-PAsp-CDDP的抑瘤效果优于CDDP(p<0.05),并且两者均优于mPEG-g-PAsp-CDDP组和单独放疗组(p<0.05)。裸鼠CDDP给药后体重下降明显,最多下降约10%,而FA-PEG-g-PAsp-CDDP和mPEG-g-PAsp-CDDP组裸鼠体重无明显下降。FA-PEG-g-PAsp-CDDP能有效抑制肿瘤生长,叶酸靶向基团增强了其对过表达叶酸受体肿瘤的抑制作用,并且较CDDP有更强的放射增敏效果和更低的毒副作用。     

~(123)I-3H11在荷瘤裸鼠体内的SPECT显像

研究了123I标记单克隆抗体3H11在荷瘤裸鼠体内的生物分布和SPECT显像。体内生物学分布显示,肿瘤摄取24 h时达最大值(11.06±1.86)%ID/g,注射123I-3H11 24 h T/NT比值分别为:肿瘤/血,2.90±0.06;肿瘤/甲状腺,1.51±0.42;肿瘤/胃,9.96±0.56。注射7.4 MBq123I-3H11于2、24 h行SPECT显像,显像结果表明,24 h后能清晰显像。标记抗体的裸鼠体内生物学分布结果与显像结果基本一致。生物分布和显像表明,123I-3H11可能成为一种新的胃癌SPECT显像剂。     

肿瘤显像剂99Tcm-HYNIC-TOC荷胰腺癌裸鼠的显像

进行了生长抑素受体显像剂^99Tc^m-HYNIC-TOC的正常小鼠体内分布、异常毒性及荷胰腺癌裸鼠的显像研究。正常小鼠及荷胰腺癌裸鼠的体内分布表明：该显像剂血液清除快，主要通过泌尿系统排泄。注射后1h肿瘤即显影，4h肿瘤与对侧肢体肌肉的T与NT摄取比达到7.7，此时肿瘤显像效果最佳。异常毒性实验表明^99Tc^m-HYNIC-TOC无异常毒性。     

叶酸修饰PAMAM树状大分子的合成及188Re标记

叶酸受体在多种肿瘤细胞中过表达是癌症治疗中一种可能的靶向药物结合位点.我们将五代PAMAM 树状大分子用叶酸和 1B4M-DTPA修饰,然后用188Re进行放射性标记.化合物的标记产率为67.5%,分离后的放射化学纯度大于95%,并表现出良好的体外稳定性,为该化合物在叶酸受体靶向肿瘤治疗应用中奠定了基础.     

肺癌特异性靶向小分子多肽在肺腺癌放射治疗中的实验研究

在固相合成小分子肽的过程中完成酪氨酸与cNGQGEQc的连接,采用氯胺-T法进行131I标记,构建肺腺癌NCI-H1975细胞株荷瘤裸鼠模型,随机分成4组,分别为:131I-cNGQGEQc治疗组、131I-cNAQAEQc治疗组、131I治疗组和生理盐水对照组,每组5只。尾静脉注射相应药物后,连续30天观测荷瘤裸鼠肿瘤移植物的大小,计算各组荷瘤裸鼠的肿瘤抑制率。研究结果表明:小分子多肽的131I标记率均大于90%,放化纯度均大于95%。131I-cNGQGEQc对肺腺癌NCI-H1975细胞移植瘤具有明显的抑制作用,治疗后第30天移植瘤肿瘤抑制率为60.93%。阴性多肽131I-cNAQAEQc治疗组的肿瘤抑制率为11.63%。131I治疗组的肿瘤抑制率为10.70%。实验结果表明,131I-cNGQGEQc对肺腺癌NCI-H1975细胞具有良好的亲和力及明显的靶向抑制作用,对非小细胞肺癌的靶向治疗具有潜在应用价值。     

Gd—DTPA—Dimeglumine的^99Tc^m标记及其生物学特性

以氯化亚锡为还原剂,^99Tc^m一步法标记了顺磁对比剂Gd—DTPA-Dimeglumine（钆喷酸二甲葡胺）,得到^99Tc^mGd-DTPA-Dimeglumine。薄层色谱法（TLC）分析标记物的标记率〉95％,可在室温稳定存放6h,放化纯度〉90％;三氯乙酸沉淀法测定^99Tc^m-Gd—DTPA-Dimeglumine的体外血浆蛋白结合率为2．25％±0．21％。小鼠体内生物分布结果显示,^99Tc^m-G＆DTPA—Dimeglumine主要经肾脏排泄,脑和肌肉组织摄取最少,所有脏器在注射后1min摄取达高峰,注射后5min滞留率下降大于50％,注射后30～60min标记药物在主要脏器内滞留很少,家兔肾动态显像结果显示,^99Tc^m-Gd—DTPA-Dimeglumine主要经肾脏排泄,达高峰时间约5min 半排时间约7min。^99Tc^m标记Gd-DTPA—Dimeglumine方法简单,标记效率高,Gd-DTPA—Dimeglumine经^99Tc^m怀记后其生物学性质基本未改变。本实验表明可以通过双功能螯合剂DTPA同时链接放射性核素^99Tc^m和顺磁性金属元素Gd,并有望在此基础上合成一种具有较好靶向性又可同时进行核医学SPECT和MRI增强扫描的显像剂。     

沉默乏氧诱导因子-1α和生存素基因联合放疗对裸鼠移植人肝癌的抑瘤效应

为探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)乏氧诱导因子-1α(Hypoxia induced factor1α,HIF-1α)和生存素(Survivin)基因联合X射线照射对裸鼠移植人肝癌细胞SMMC-7721的抑瘤效应,肿瘤局部注射脂质体包裹的靶向HIF-1α和/或Survivin基因的RNA干扰质粒后,接受5Gy X射线照射。观察各组裸鼠治疗后不同时间肿瘤体积和平均存活时间,以免疫组化染色法检测肿瘤组织Survivin、HIF-1α、增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达和肿瘤间质微血管密度,以TUNEL法检测肝癌细胞凋亡。结果表明,治疗开始后第9-21天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤体积显著小于单干扰联合放疗组,且平均生存时间明显延长。治疗结束后1天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤组织Survivin、HIF-1α、PCNA表达和肿瘤间质微血管密度明显低于对照组和放疗组,双干扰联合放疗组移植瘤凋亡细胞百分数较其它组明显升高。结果提示,双干扰联合放疗可有效地抑制裸鼠移植人肝癌细胞增殖和血管生成,促进细胞凋亡,其抑瘤效应明显优于放疗和单干扰联合放疗。     

188Re标记抗人前列腺癌单克隆抗体及其在荷瘤裸鼠体内的放射性分布

为探讨188Re标记抗前列腺癌单克隆抗体7E11C5.3的方法及其生物学分布,采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物,常规测定标记率和免疫活性,在荷瘤裸鼠体内检测标记物的生物学分布.结果显示,188Re-7E11C5.3的标记率为(93.16±2.18)%,免疫活性分数为(74.86±1.86)%;经尾静脉注入裸鼠体内后,肿瘤组织摄取率在24h达高峰,非肿瘤组织在4h摄取率较高,以后均随时间延长逐步降低;血液放射性清除迅速;24h时T/NT值达最大,至72h仍可保持在较高水平.结果表明,188Re-7E11C5.3在裸鼠体内对前列腺癌移植瘤有良好的靶向定位作用,可用于前列腺癌放射免疫显像和治疗研究.     

血管抑素的131I标记及其对小鼠A549移植瘤治疗作用的观察

目的：从人血浆中分离血管抑素（ Angiostatin, AS），并用131I标记，观察131I- AS对荷A549移植瘤小鼠的治疗效果。方法：采用一步法从人血浆中分离AS，并用L-Lysine Sepharose 4B亲和层析柱作亲和层析纯化，将提纯的AS用Iodogen固相法进行131I标记，分析131I-AS 的标记率、比活度，并对其体外稳定性进行评价。32只荷A549肺癌移植瘤的裸鼠随机分为4组，腹腔注射131I- AS（含131I 11.1MBq，AS12.5mg/Kg）、131I（11.1MBq）、AS（12.5mg/Kg）和生理盐水0.3mL，1次/周，治疗四周，观察28天内肿瘤体积的变化。结果：131I- AS标记率为77.8~86.7 %，比活度为1.28~3.96MBq/ug。标记产物体外-20℃存放7天，放化纯度降至原来的72%。治疗28天后，131I- AS组、131I组、AS组和生理盐水组小鼠肿瘤的体积分别是（1956±98mm3）、（5284±123mm3）、（3948±115mm3）、（7350±153mm3）。结论： Iodogen法标记获得的131I-AG 标记率、比活度和稳定性较高。131I- AS能较强地抑制小鼠体内移植肿瘤的生长，其抑制作用优于单纯应用等浓度的AS及131I，131I- AS在治疗肿瘤中有潜在的应用前景。     

131Ⅰ标记B细胞淋巴瘤Fab抗体荷瘤裸鼠治疗及磁共振影像分析

将荷人B细胞淋巴瘤裸鼠分为对照组、Fab抗体组、单次注射组和重复注射组,尾静脉注射131Ⅰ-Fab抗体后进行ECT显像;每隔5 d用MRI结合显微镜线圈检测荷瘤裸鼠的肿瘤大小.注射后25 d,取出肿瘤,进行病理分析、流式细胞术和电镜检测细胞凋亡.结果显示,131Ⅰ-Fab抗体静脉注射后8 h在肿瘤局部浓集明显,瘤体清晰显像;Fab组5 d内具有抑制肿瘤生长作用,凋亡率为(2.48±0.6)%;单次131Ⅰ-Fab注射组早期抑制肿瘤生长较明显,肿瘤生长出现平台期,凋亡率为(10.67±1.6)%;131Ⅰ-Fab抗体重复注射组抑制肿瘤生长作用明显,肿瘤局部坏死脱落,凋亡率为(14.00±1.9)%.病理结果显示两注射组均可见组织坏死.MRI图像与病理结果相符,通过造影剂增强可提供较准确的病理信息.表明131Ⅰ-Fab抗体具有早期ECT肿瘤显像、瘤体准确定位,并通过致凋亡和直接促使细胞死亡的作用而有效抑制肿瘤生长,大型高场强MRI可为小动物模型实验提供有效、无创、动态的监测.     

亲和素-生物素系统预定位放免治疗的实验研究

选用^153Sm标记抗CEA单抗（McAb）和螯合DPTA生物素（DB2）,利用生物素化单抗－亲和素－^153Sm-DB2的三步法在荷人结肠癌裸鼠模型中进行预定位放免治疗。以^153Sm-CEAMcAb、^153Sm-mIgG、^153Sm-DB2作为治疗对照组,100μL生理盐水作为非治疗对照组,在移植瘤接种后的第3天实施治疗,采用单次较大剂量治疗（11．1MBq/每鼠）,定期测量裸鼠的体重、血白细胞计数和肿瘤生长体积以及瘤块的组织病理学检查,观察肿瘤抑制效应及毒副作用。结果表明,预定位放免治疗与直接标记单抗放免治疗对肿瘤有明显的抑制作用,治疗第5周肿瘤抑制率分别达到80．67％和78．44％,组织病理学结果提示肿瘤组织呈坏死样改变,而正常脏器如肝、肾等未见损伤;治疗前后白细胞计数以^153Sm-CEA McAb及^153sM-mIgG两组降低最为显著。提示预定位放免治疗具有低毒高效的治疗作用,较^153Sm-CEA McAb具有更大的安全性。     

雄激素对人前列腺癌（PC—3M）裸鼠模型生长的影响及其雄激素受体和蛋白激酶C变化特性

采用雄性激素治疗移植人前列腺癌细胞株（ＰＣ—３Ｍ）所复制的裸鼠模型．结果表明，低剂量丙酸睾丸素（５０ｍｇ／ｋｇ体重）明显促进肿瘤生长，同时肿瘤组织中雄激素受体（ＡＲ）水平及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性均明显增高；而高剂量丙酸睾丸素（４００ｍｇ／ｋｇ体重）则明显抑制肿瘤生长，且肿瘤组织中ＡＲ水平及ＰＫＣ活性明显降低．显示雄激素对人前列腺癌（ＰＣ－３Ｍ）细胞株具有双相效应．讨论了这种双相效应与ＡＲ和ＰＫＣ变化的关系．     

氚示踪法研究吲哚美辛在C57小鼠体内的分布及其抗肿瘤作用

采用氚标记吲哚美辛(Indomethacin,IN)示踪技术,观察3H-IN在Lewis肺癌C57小鼠体内的分布及IN治疗Lewis肺癌的效果。结果显示:3H-IN选择性浓聚于肿瘤组织,服药后4 h肿瘤组织的放射性摄取(ID％／g)达较高水平,此后其清除速率明显慢于其它组织;服药后7 h,肿瘤组织与肌肉、脂肪、血液之间的放射性摄取有差异(P<0.05),12 h差异显著(P<0.01)。肿瘤组织与肌肉、脂肪、血液的放射性摄取比4 h开始>1,12 h达最高。IN的抑瘤和抗癌作用结果显示:用IN治疗的Lewis肺癌C57小鼠在接种后第20天肿瘤体积为3.59 cm2,仅服用生理盐水的小鼠(对照组)肿瘤体积为8.37 cm2,其抑瘤率为57.1％;接种肿瘤早期即口服IN的小鼠未见肿瘤生长。以上结果表明IN有较强的肿瘤靶器官亲和性,可选择性浓聚于肿瘤组织,并长时间存留,具有较强的抑制肿瘤及抗肿瘤作用。     

胃癌组织中c－myc基因表达

以３２Ｐ－ｃ－ｍｙｃ－ｃＤＮＡ和３２Ｐ－ｃ－ｍｙｃ－ＤＮＡ为探针，采用核酸杂交方法研究２４例胃癌、６例胃溃疡正常胃组织ｃ—ｍｙｃ的表达。ＲＮＡ—ＤＮＡｄｏｔ证实，７例胃髓样癌、３例粘液癌和１４例腺癌分别有３、１和１例ｃ－ｍｙｃ高表达。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ表明．胃癌组织ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ分子量同对照组无差异；Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ未发现ｃ—ｍｙｃ扩增与重排。指明胃癌组织ｃ－ｍｙｃ高表达与ｃ－ｍｙｃ结构改变无关。     

放疗后早期肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布与Survivin、Caspase-3蛋白表达的相关性研究

采用99Tcm-rh-AnnexinⅤ作为核素凋亡显像示踪剂,观察小鼠放疗后早期肿瘤组织内Survivin、Caspase-3蛋白表达。结果显示,放疗组肿瘤组织内99Tcm-rh-AnnexinⅤ分布、TUNEL检测阳性细胞数及Caspase-3蛋白表达均明显多于对照组,Survivin蛋白表达A组明显高于B组,差异均存在显著性（P均<0.01）。相关性研究表明,肿瘤组织的放射性摄取与TUNEL阳性细胞数呈明显正相关（r=0.942,P=0.000）;肿瘤组织内Survivin蛋白表达与Caspase-3蛋白表达呈明显负相关（r=-0.836,P=0.000）。肿瘤组织内99Tcm-Annexin Ⅴ分布与Caspase-3蛋白表达呈明显正相关（r=0.948,P=0.000）,与Survivin蛋白表达呈明显负相关（r=-0.819,P<0.01）。以上结果提示,肿瘤组织内99Tcm-rh-AnnexinⅤ的分布可以反映放疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及凋亡调控蛋白Survivin、Caspase-3表达水平的变化。     

Ad-hING4联合~(125)I粒子对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用

本工作探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-hING4)联合~(125)I粒子对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用及其可能的机制.将本室构建的Ad-hING4腺病毒感染QBI-293A细胞,扩增后获得高滴度的病毒.建立25只裸鼠胰腺癌PANC-1皮下移植瘤模型,分成PBS对照组、空病毒Ad组、~(125)I粒子近距离放疗组、Ad-hING4基因治疗组、~(125)I粒子和Ad-hING4联合治疗组,进行抑瘤治疗实验;此后每5天测量1次肿瘤体积,20天后处死,计算抑瘤率和金氏q值.常规病理切片观察细胞生长形态、组织损伤程度和范围,并进行凋亡细胞计数(AI);免疫组化SP法检测肿瘤标本中微血管密度(MVD)、生存素SurvⅣin和活化的Caspase-3凋亡相关蛋白的表达.结果发现, ~(125)I粒子组、Ad-hING4组、联合治疗组抑瘤率分别达到34.19%(P<0.01)、31.50%(P<0.01)、67.15%(P<0.01),联合治疗组抑瘤率明显高于~(125)I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);病理切片检查显示近粒子处肿瘤细胞变性坏死,远离粒子处可见存活肿瘤细胞;三个治疗组凋亡指数(AI)、Caspase-3阳性细胞数明显高于PBS组(P<0.05),且联合治疗组明显高于~(125)I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);三个治疗组MVD值、SurvⅣin阳性细胞明显低于PBS组(P<0.05),且联合治疗组明显低于~(125)I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);Ad组与PBS组的各指标无显著性差异(P>0.05).可见~(125)I粒子、Ad-hING4可显著抑制裸鼠PANC-1胰腺癌移植瘤的生长,两者联用具有抑癌增效的协同作用,Ad-hING4有望作为一种新的放疗增敏剂;其抑瘤机制可能是通过下调SurvⅣin和上调Caspase3的表达,以诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成.