酶标甲胺磷交联反应的pH及缓冲体系优化

采用碳二亚胺法制备酶标农药(过氧化氢酶标记甲胺磷),以酶标农药对鸡肝酯酶的抑制率和抑制后酶标农药-酯酶复合物中标记酶酶活为指标,对制备酶标甲胺磷交联反应的pH和所用缓冲液类型进行优化,并对其偶联率进行了分析。结果发现,pH增加有效促进了甲胺磷和标记酶分子之间的交联,而缓冲体系类型对此交联反应的影响相对较小。然而随之持续上升的偶联率带来的空间位阻效应也逐渐明显。随着pH增加,标记物抑制率和抑制后的标记酶活均呈现先增加后略下降的趋势,且分别在pH为6.0和5.5时达到峰值,其峰值时偶联率分别为24和22。综合考量,采用pH 6.0的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物(MES)缓冲液制备的酶标农药,其抑制率和标记酶活均达到较优值,分别为45.29%和47.67U,此时其偶联率约为24。     

脱氧雪腐镰刀烯醇（呕吐毒素）酶标抗原的合成及免疫抗体的制备

利用琥珀酸酐法合成了脱氧雪腐镰刀烯醇-琥珀酸酐衍生物(3-HS-DON),并用DCC法将该衍生物与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到的结合物(DON-HS-BSA)作为免疫抗原免疫新西兰大白兔,获得效价为1∶10000的特异性抗脱氧雪腐镰刀烯醇(DON)的抗体。同时,用EDC法将3-HS-DON与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得到酶标抗原(DON-HS-HRP)。通过圆二色光谱(CD)看到偶联后蛋白二级结构发生了改变,酶活稍有下降;用分光光度法测得酶标抗原酶活损失<5%,偶联物中DON与HRP的结合比为5.29。说明:该酶偶联物及制备的抗体可作为酶联免疫吸附法(ELISA)或免疫传感器法测试脱氧雪腐镰刀烯醇时所需的酶标抗原及抗体。     

双酶协同酶解木薯淀粉的研究

本文研究了α-淀粉酶(酶活:4,000 U/g,最适pH 5.5～6.5,最适温度50～55℃)和糖化酶(酶活:100,000 U/g,最适pH 4.0～4.5,最适温度58～62℃)协同水解制备木薯微孔淀粉的工艺条件.结果表明木薯淀粉的水解率为50%时质量最好,此时的工艺条件为:加酶量(α-淀粉酶与糖化酶的质量比为3:1)为干基淀粉质量的0.50%,反应时间12 h,反应温度55℃,反应pH 5.0.     

啤酒小麦木聚糖酶酶学性质的研究

通过DNS法测定小麦木聚糖酶酶促反应的最适条件。结果表明:小麦木聚糖酶酶促反应的最适温度是50℃,最适pH是5.5~6.0,最适底物浓度是1.0000%,最适底物与酶液用量比例为9/1,最适反应时间为5-9min。     

金针菇漆酶的固定化及其性质研究

采用海藻酸钠包埋法制备固定化漆酶,结果表明,固定化pH值为4.5,海藻酸钠与CaCl2质量浓度均为2％,酶液与海藻酸钠体积比为1∶1时,漆酶的固定化效果最佳,酶活回收率为48.6％.固定化酶的最适pH值为3.0,最适温度为40℃,米氏常数Km为21.5μmol/L,游离酶的最适pH值为3.0,最适温度为30℃,米氏常数Km为18.6μmol/L,与游离酶相比,固定化漆酶的热稳定性有明显提高,耐酸性略有增加,最适反应温度提高了10℃.     

磁性Fe_3O_4协同海藻酸钠固定化葡萄糖氧化酶

采用以化学共沉淀法制备出的Fe_3O_4纳米粒子与海藻酸钠结合,制备出磁性微球,再以戊二醛作为交联剂固定化葡萄糖氧化酶,研究了该材料对葡萄糖氧化酶的固定化条件以及磁性固定化酶的酶学性质。结果表明,制备固定化葡萄糖氧化酶的最佳条件为:海藻酸钠浓度为1.5%,海藻酸钠与Fe_3O_4的质量比为5:4,CaCl_2浓度为2%,戊二醛浓度为0.5%,交联时间为1.5 h;最适反应温度提高为40℃,最适反应pH值提高为6.5;热稳定性有一定提高;重复使用5次后,相对酶活仍剩余58.91%。磁性海藻酸钠固定化葡萄糖氧化酶会提高酶的稳定性,有利于工业化生产。     

β-葡聚糖酶降解玉米秸秆中β-葡聚糖的工艺

利用β-葡聚糖酶降解玉米秸秆中的β-葡聚糖,确定了酶浓度、pH、酶解时间以及温度等因素,并通过正交实验进行了优化.影响因素为:酶浓度>pH>反应温度>反应时间.酶解的最适条件:酶活25.86万U/g,pH值4.5,反应时间15 h,反应温度45℃.玉米秸秆的β-葡聚糖的降解率为41.96%.     

葡萄糖酸钠的双酶催化制备法

利用生物酶的特异性,采用葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶进行葡萄糖酸钠的双酶催化法制备研究。首先分析了葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的理化性质,测试不同温度和不同pH时两支酶的相对活力,得到葡萄糖氧化酶的最适温度范围为20～50℃,最适pH范围为4.0～6.5,过氧化氢酶的最适温度范围为20～50℃,最适pH范围为4.0～8.0。结合酶的理化性质,从催化反应机理出发,以20h时的糖转化率和体系中H2O2量为指标,分析了通风和搅拌、温度、pH、葡萄糖氧化酶的用量、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的用量比等不同因素的影响,获得了最佳的双酶催化制备工艺:罐压0.05MPa、风量1.5m3/h、转速400r/min、40℃、pH5.5、300g/L的葡萄糖液、30U/g糖量的GOD、GOD:CAT=1∶85。在此条件下,葡萄糖在20h时的糖转化率为99.96%。     

一株海洋低温葡萄糖氧化酶担子菌的诱变育种及其酶学性质研究

利用紫外诱变、化学诱变及紫外-化学复合诱变技术对一株海洋来源的产低温葡萄糖氧化酶（GOD）担子菌（Basidioascus sp.） WYQ 23进行诱变育种,并对其遗传稳定性及所产酶酶学性质进行研究。 结果表明,获得一株高产低温葡萄糖氧化酶的突变菌株 Basidioascus sp. WYQ 23-3-4。 该突变菌株GOD酶活为2.33 U/mL,是原始菌株的1.40倍。 经8代传代培养实验表明,突变菌株WYQ 23-3-4产葡萄糖氧化酶能力稳定。 该酶最适温度为20 ℃,在10～30 ℃可保持较高酶活;最适pH值为5.6,在pH5.0～6.0可保持较高酶活; 金属离子Ag+、Zn2+、Fe2+对酶活抑制作用较强,Mg2+、K+对酶有激活作用。 综上,通过复合诱变可明显提高担子菌产低温葡萄糖氧化酶 的能力,为该酶的工业化生产提供了潜在的优良的菌种资源。     

海洋高产低温葡萄糖氧化酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

从黄海和渤海海泥样品中筛选高产低温葡萄糖氧化酶（GOD）菌株并进行鉴定,对其所产GOD的蛋白分子质量和酶学性质进行初步研究。获得一株高产葡萄糖氧化酶菌株（编号G01）,根据菌株形态特征及ITS序列分析,初步鉴定该菌株为壳青霉（Penicillium crustosum）。结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶谱分析,得出菌株G01所产葡萄糖氧化酶分子质量约为95 ku,初步判断为五聚体,为一种新酶。酶学性质研究表明：该酶最适反应温度为25 ℃,在0 ℃时仍保留有50%以上的酶活,热稳定性差,为典型低温酶;最适反应pH值为4.5,对pH敏感;Mn2+能促进酶活,K+、Na+对酶活基本无影响;而Mg2+、Ca2+、NH4+、Cu2+、特别是Fe3+对酶活有明显抑制作用。酶学性质表明该酶作为一种新酶,在低温和水产饲料领域有良好应用前景。     

葡萄糖氧化酶脂质体的制备与表征

以大豆卵磷脂和胆固醇作为壁材,采用薄膜蒸发-冻融法制备葡萄糖氧化酶脂质体。以包封率作为指标,通过单因素和正交试验设计优化确定最佳制备工艺,并考察脂质体的形貌、粒径分布和稳定性指标。结果表明：最佳工艺参数为：大豆卵磷脂与胆固醇质量比4∶1、芯材质量5 mg（500 U）、水化时间15 min、冻融循环10 次,此条件下包封率可达到（87.7±2.1）%;粒径分布均匀,分散性较好,平均粒径为（164.75±2.55） μm;4 ℃和室温（23.0±0.5）℃贮存条件下脂质体包封率无变化,酶活性稳定。     

茶叶中甲胺磷农药快速测定研究

利用有机磷农药能抑制植物酯酶酶促反应的机理,建立了快速测定茶叶中甲胺磷农药残留的方法。用70%饱和硫酸铵对面粉中植物酯酶进行纯化,在45℃、pH4.5～5.5时制备的酶催化反应活性最大,酶催化反应动力学显示10min内反应呈线性关系。测定甲胺磷农药残留反应体系最大吸收峰是在480nm之间,最适乙酸-β-萘酯用量为1.0ml;在甲胺磷浓度在0.1～1.0mg/kg之间时,反应体系的吸光值与甲胺磷浓度呈线性相关;在茶叶汁提取液回收率为84%。     

低聚壳聚糖与葡萄糖和麦芽糖的美拉德反应及其衍生物的抗氧化性能

低聚壳聚糖(COS)作为氨基供体分别与提供羰基的葡萄糖和麦芽糖进行美拉德反应(氨基与羰基的物质量比均为3:1),考察了反应过程中吸光度和荧光值的变化。醇沉法提取低聚壳聚糖美拉德反应衍生物CG和CM。对两种衍生物进行红外表征和相对分子质量测定,并研究其对超氧阳离子O2.-、DPPH自由基的清除能力以及还原能力。结果显示:抗氧化能力强弱次序为CG>CM>COS,即美拉德反应后低聚壳聚糖衍生物抗氧化能力得到显著提高,且CG的抗氧化活性优于CM,表明与单糖进行美拉德反应制得的壳聚糖衍生物具有更好的抗氧化性。     

重组麦芽糖转葡萄糖基酶工程菌发酵条件的优化

对重组麦芽糖转葡萄糖基酶工程菌的发酵条件进行优化,通过单因素试验确定该菌株产麦芽糖转葡萄糖基酶的最佳发酵培养基为：糖蜜0.025g/mL、胰蛋白胨0.015g/mL、MgSO4 ·7H2O与K2HPO4的质量为7:1、FeSO4 ·7H2O 0.5g/L;以葡萄糖氧化酶法为指标测得最佳摇瓶发酵条件为：装液量100mL/250mL、转速200r/min、接种量5%、初始pH 7.0、最佳温度37℃、诱导阶段OD600nm=0.6、诱导温度30℃、诱导时间5h、诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度1mmol/L。经优化,重组麦芽糖转葡萄糖基酶的酶活力可达950U/mL,比初始条件下提高了近7倍。     

大叶紫薇总三萜对3T3-L1细胞葡萄糖和脂肪代谢的影响

为了解大叶紫薇中总三萜对3T3-L1细胞葡萄糖和脂肪代谢的影响,研究了大叶紫薇中总三萜可能的降血糖作用机制.采用葡萄糖氧化酶法检测3T3-L1葡萄糖的消耗作用,使用油红O染色并通过比色定量分析3T3-L1细胞的脂肪含量.结果表明:大叶紫薇中总三萜具有促进脂肪细胞葡萄糖消耗、抑制脂肪形成及降血糖的作用.     

蜂蜜-乳酸发酵过程中相关酶活力的研究

乳酸菌能以蜂蜜为碳源、脱脂乳粉为氮源进行发酵,产生对人体有益的乳酸,而保留了蜂蜜中其他的营养成分和特殊风味。本实验通过测定发酵过程中蔗糖转化酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶的活力,研究了其对还原糖转化率的影响。实验表明,在发酵时间为4.0h,蜂蜜添加量为8%,接种量为3%时,相应的蔗糖转化酶酶活力为23.845mg/g·h,葡萄糖氧化酶酶活力为10.621μg/g·0.5h,β-半乳糖苷酶酶活力为1.211μg/μmol·min,该条件下的还原糖转化率为44.34%,产品品质最佳。     

磁性复合粒子固定化葡萄糖氧化酶的制备

采用化学共沉淀法,制备了Fe3O4粒子,并将带正电荷的PDDA吸附在其表面,形成PDDA-Fe3O4磁性复合体。为提高葡萄糖氧化酶的稳定性和重复利用率,以自制的PDDA-Fe3O4磁性复合体为载体,通过静电引力来固定葡萄糖氧化酶。研究结果表明,PDDA-Fe3O4磁性载体表面的Zeta电位为47.6mV,载体平均粒径为275d.nm。葡萄糖氧化酶固定化最佳条件为：温度15℃,pH=6,酶与载体质量比为15mg/g。固定化酶的热稳定性、pH稳定性及重复使用性能都有很大的提高。     

葡萄糖氧化酶的固定化及其性能的研究

本文对葡萄糖氧化酶的固定化进行了研究,考查了载体、缓冲溶液pH值,以及酶担载量对固定化酶性能的影响,确定了固定化过程的工艺条件,并对固定化葡萄糖氧化酶的自由态葡萄氧化酶的性能进行了比较。研究结果表明,以TiCl_4处理的5A分子筛作载体所制备的固定化葡萄糖氧化酶具有良好的化学与物理性能,在主要指标上优于文献报道的结果。     

基于纳米酶技术检测柑桔果实中葡萄糖

目的建立纳米酶检测体系快速检测葡萄糖含量的技术。方法采用甲烷氧化细菌的发酵代谢产物甲烷氧化菌素(methanobactin,MB)与Cu²⁺、纳米金(AuNPs)、葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,Gox)进行配位结合形成具有过氧化物酶和葡萄糖氧化酶性质的纳米酶检测体系,并对柑桔果实中葡萄糖含量进行测定。结果Gox浓度0.81 U/mL、MB-Cu@AuNPs模拟酶浓度2×10^-5mol/L、对苯二酚浓度5×10^-4mol/L、反应温度60℃、pH 8为最佳检测条件;反应时间5 min,葡萄糖浓度线性范围为1×10^-3-5×10^-2mol/L。结论纳米酶检测体系对柑桔果实中葡萄糖含量的测定具有良好的稳定性,相比较常规快速血糖仪检测速度更快。     

Determination of Glucoamylase Activity with Glucose Electrode

The method of glucoamylase activity assay by oxygen electrode with immobilized glucose oxidase is described. The optimal conditions of assay were established and are following: 1% starch, pH 4.5, and 25°C. The method could be applied to kinetic measurements of glucoamylase action on starch. The results of such investigations are similar to obtained earlier by chemical method. The method could be used for assay of glucoamylase activity in the presence of α-amylase by changing the pH of solution to 7.