食品中残留盐酸克伦特罗免疫原的合成与鉴定

盐酸克伦特罗是一种只具有免疫反应性不具有免疫原性的小分子半抗原。本文采用重氮化法将其与牛血清白蛋白交联,用紫外扫描和SDS变性凝胶电泳方法检验。并用合成的CL_BSA免疫小鼠,经ELISA检验,小鼠产生了针对CL的抗体,表明合成的CL_BSA复合物具有免疫原性,为盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制奠定了基础。     

盐酸克伦特罗酶标抗原的制备及鉴定

选取辣根过氧化物为抗原标记酶,采用重氮化法将盐酸克伦特罗CLEN分别与牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,合成包被抗原和免疫原,并通过紫外光谱扫描(UV)、SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳法验证偶联成功。这为下一步获得针对盐酸克伦特罗类特异性单克隆抗体制备及其相应食品安全检测试剂盒开发奠定了基础。     

共振光散射法检测肉制品中盐酸克伦特罗

目的:建立一种测定盐酸克伦特罗的新方法。方法:人血清白蛋白（HSA）与盐酸克伦特罗结合,用共振瑞利散射光法进行盐酸克伦特罗的检测。结果:在365nm处共振光散射增强强度与盐酸克伦特罗的浓度呈线性关系。以K2HPO4-NaH2PO4为缓冲体系维持盐酸克伦特罗测定溶液的pH=5.80,当温度为305.16K（28℃）和静置时间为30min时,方法的检出限为0.10μg/mL,线性范围为0.10～2.80μg/mL,线性相关系数r=0.995,方法精密度（RSD）和准确度（P）分别2.98%～5.19%和92.50%～108.00%。结论:方法可靠、简便、快速,可直接测定样品中的盐酸克伦特罗。      

盐酸克伦特罗的残留与食品安全

十年来,食品动物生产使用违禁药物"瘦肉精"--盐酸克仑特罗已受到了社会各个层面的广泛关注,食品安全越来越受到人们的重视.本文阐述了盐酸克伦特罗在机体内的分解代谢、残留和对人畜的危害.     

盐酸克伦特罗的残留与食品安全

十年来,食品动物生产使用违禁药物"瘦肉精"——盐酸克仑特罗已受到了社会各个层面的广泛关注,食品安全越来越受到人们的重视。本文阐述了盐酸克伦特罗在机体内的分解代谢、残留和对人畜的危害。     

浅谈盐酸克伦特罗的危害

20世纪70年代末，美国等发达国家首次将盐酸克伦特罗(CLB)开发研究，80年代被广泛应用到畜禽生产中，近年来畜产品中CLB的残留对人类的健康造成严重的危害，着重从CLB理化特性，对人畜的危害性，检测方法以及治理措施方面作一概述。     

氯霉素全抗原的合成与鉴定

目的：为获得较高偶联率氯霉素全抗原,探索和优化碳二亚胺法(EDC)合成氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白(BSA)全抗原合成条件。方法：采用单因素设计,优化影响合成的主要因素：蛋白浓度、CAP 与BSA 的摩尔比例、反应体系pH 值,通过紫外法和三硝基苯磺酸(TNBS)法测定合成后的偶联率。 结果：EDC 法合成氯霉素抗原较优条件为BSA 浓度15mg/ml、CAP:BSA=70:1、pH7.4,可得到偶联率为15 左右的氯霉素全抗原。结论：EDC法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原,以用来进行抗体制备。     

应用ELISE法测定盐酸克伦特罗的残留

介绍了酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的方法.利用试剂盒对猪肉中的盐酸克伦特罗残留处理后,用酶标仪进行检测分析.此法较适用于现场检验,检测速度快、灵敏度高,是保证肉品卫生安全的较好监控方法.     

盐酸克伦特罗完全抗原的制备及其鉴定

利用重氮化法将小分子半抗原盐酸克伦特罗(CL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上制得盐酸克伦特罗完全抗原(CL-BSA).采用紫外分光光度法快速确定了BSA∶CL偶联比为1∶17,并通过SDS-PAGE法验证了CL与BSA偶联;间接ELISA法检测免疫Balh/c小鼠血清.结果显示1∶1000稀释后的血清在中和掉BSA的抗体后呈阳性;最后,通过细胞融合获得了一株能稳定分泌CL-McAb的细胞株4H5,经鉴定为IgG1.说明合成偶联比为1∶17的完全抗原能刺激小鼠产生针对盐酸克伦特罗的单克隆抗体.     

ELISA检测盐酸克伦特罗残留的方法学评侈

以盐酸克伦特罗（clenbuterol hydrochloride）重氮化后分别连接到牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）上制得免疫原BSA-CL和包被抗原OVA-CL。通过免疫兔获得含有多克隆抗体的血清，经硫酸铵沉淀、纯化，得到兔源抗CL的抗体，在此基础上建立了间接酶联免疫检测方法。实验结果表明，抗CL抗体最适稀释度为1：1000，羊抗兔酶联抗体（HRP—IgG）的最适稀释度为1：1500。该检测方法的检测灵敏度为1．452μg／L，线性检测范围为7．26-90．75μg／L。     

瘦肉精在肉类食品中的残留问题及检测

瘦肉精是一种引起广泛关注的非法饲料添加剂,人食用瘦肉精超标的肉制品后会产生严重的不良反应。本文论述了瘦肉精的药理、毒理作用及检测标准和方法。     

盐酸克仑特罗ELISA试剂盒的研制

在间接竞争酶联免疫吸附法的基础上,研制了一种可以检测尿样或食品中盐酸克仑特罗的试剂盒。ELISA检测方法的各个影响因素均通过实验进行了优化。该试剂盒具有良好的灵敏度,半抑制率(IC50)为0.6ng/ml,该抗体与肾上腺素等结构类似物的交叉反应率均小于0.3%,回收率为90%～104%,批内变异系数小于6%,批间变异系数小于10%,试剂盒在12个月保存期内稳定。可用于盐酸克仑特罗的快速定量检测。     

食品中残留19-去甲睾酮免疫原的合成与鉴定

19-去甲睾酮(19-nortestosteroneNT),属于半抗原生物小分子,具有免疫反应性,但不具有免疫原性。本文中19-去甲睾酮经羧甲基羟胺肟化,质谱(MS)检验后,采用混合酸酐法将肟化产物与牛血清蛋白(bovineserumalbuminBSA)偶联,紫外分光光度法测定其交联率为24。用此合成产物进行动物体免疫,获得了NT的多克隆抗体。经间接酶联免疫测定,其抗血清的稀释度可以达到1:102400,证明诺龙免疫原的合成成功,为诺龙酶联免疫试剂盒的研究奠定基础。     

盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的研究

建立了间接ELISA检测盐酸克伦特罗的方法,并对其参数进行了分析计算。在该检测方法中,抗盐酸克伦特罗(CL)抗体最适稀释度为1∶1000,羊抗兔酶联抗体(HRP-IgG)的最适稀释度为1∶1500。该检测方法的检测灵敏度可达0·1046μg/L,生物检测限为1·452μg/L,线性检测范围为7·26~90·75μg/L。     

抗克伦特罗单链抗体可溶性表达及特性鉴定

目的:表达抗克伦特罗(CBL)可溶性单链抗体(scFv)并进行抗原结合活性鉴定。方法:利用呈现scFv的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导可溶性scFv表达。渗透休克法提取菌体细胞周质腔中scFv。经SDS-PAGE、Western-Blotting以及间接ELISA法分析检测可溶性scFv的表达,并采用间接竞争ELISA法鉴定scFv的抗原结合活性。结果:细菌培养上清及周质腔中均有抗CBL可溶性scFv表达,其分子量约为29kD;上清液及周质腔中scFv效价分别为1:80,1:1600,能够被CBL竞争性抑制,IC50分别为0.78、0.95ng/ml。结论:可溶性抗CBLscFv在大肠杆菌HB2151中获得成功表达,表达的scFv与CBL具有很好的结合活性,可用于进一步建立CBL相应的免疫学检测方法。     

克伦特罗残留的分析方法研究

本文建立了用液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)定量分析动物组织中克伦特罗残留的方法。使用三级四极串联质谱(MS/MS)的多反应监测(MRM)技术,正离子采集模式,监测转换离子对m/z277→259,以MRM离子流峰面积作为定量依据。方法线性范围:0.14～60.00μg/L(γ=0.99985),定量检测限:0.07μg/kg,在猪肉中加入克伦特罗标准样品的回收率在90%以上,样品一次分析时间为3min。此法灵敏、快速、准确,可应用于动物组织中各种药物残留的分析。     

薄层扫描法测定猪肝中克伦特罗残留量

采用薄层扫描法测定猪肝中克伦特罗残留量,用GF254板作载体,乙酸乙酯-甲醇-醋酸(8:l:0.8)为展开剂,克伦特罗的Rf值为0.8l。线性范围0.004～0.050μg,回收率为86.5%～94.9%,RSD为5.0%～5.8%(n=6)。