鱿鱼肝脏蛋白中α-葡萄糖苷酶抑制肽的研究

通过酶解技术和凝胶过滤分离等技术对鱿鱼肝脏蛋白水解液中活性肽进行研究,为鱿鱼副产物的高效利用奠定了理论基础。实验得出:6种蛋白酶(酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶)中,胃蛋白酶为鱿鱼肝脏蛋白水解的最佳酶类,同时以水解度和α-葡萄糖苷酶(AG)抑制活性为指标,得出胃蛋白酶水解的最佳条件:底物浓度0.4%,酶与底物的质量比3.0%,体系p H3.0,温度37℃,反应时间12 h。经过上述条件处理后的水解液用Sephadex LH-20凝胶层析柱进行分离,得到6个组分,其中组分Ⅲ的AG抑制活性最高,其半抑制浓度(IC50)达到0.215 mg/m L。同时对组分Ⅲ的稳定性和抑制动力学进行研究,得出组分Ⅲ对酸碱、热及消化道酶系统具有较高的稳定性。对AG为典型的非竞争性抑制,其米氏常数为50 mmol/L。     

酶解小龙虾副产物蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的研究

以小龙虾副产物分离蛋白为原料,利用酶解和超滤技术得到对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用的多肽.以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,选用碱性蛋白酶作为水解酶,以加酶量、反应温度、pH值、时间作为优化因素,采用正交试验对酶解工艺进行优化,并利用超滤技术对酶解产物进行分级.结果表明,最佳工艺条件为:加酶量2000U/g底物、反应温度...     

抑制α-葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽制备工艺研究

目的研究超声波辅助蛋白酶酶解制备抑制葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺方法。方法以冷榨花生蛋白粉为原料,以底物浓度、pH值、加酶量、温度、时间、超声波功率为考察因素,以α-葡萄糖苷酶抑制率为考察指标,在单因素实验基础上,通过响应面的Box-Benhnken实验设计进行工艺优化。结果超声波辅助蛋白酶酶解制备的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物的最优工艺条件为底物浓度11.13%、pH值9.45、加酶量1.2%、温度42℃、时间44min、超声波功率1200W;此工艺条件下的α-葡萄糖苷酶抑制率的响应面模型预测值为91.07%,验证实验的抑制率为(88.70±0.63)%,与模型预测值相差2.60%,说明模型与实际情况拟合较好,验证了预测模型的正确性。结论响应面法对超声波辅助蛋白酶解制备抑制α-葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺条件参数优化是可行的,得到的工艺条件具有实际应用价值。     

酶解银杏蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的研究

为了获得银杏α-葡萄糖苷酶抑制肽,利用木瓜蛋白酶酶解银杏蛋白,以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,考察底物浓度、酶底比、pH值、酶解温度和酶解时间对酶解效果的影响,并且利用超滤截留不同分子量(100,50,30,10,3kDa)的多肽。结果表明:在pH 7.36,酶解时间4.4h,酶底比(5g/100g),酶解温度57.9℃的条件下,α-葡萄糖苷酶抑制率最高为17.18%。分子量小于3kDa多肽组分的α-葡萄糖苷酶抑制率最高为50.43%。因此,银杏蛋白水解产物或其活性肽可应用在食品中用于高血糖及相关疾病的治疗。     

黑曲霉-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

"绿色资源"纤维素广泛应用于能源、医药、食品等领域,β-葡萄糖苷酶(BGL)作为纤维素降解酶系的限速酶是当前研究热点之一。作者对黑曲霉利用豆渣发酵所产的胞外β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并对该酶进行了酶学性质表征。实验结果表明,BGL最适反应温度为55℃,最适反应p H为2.0~2.5,p H稳定范围为2.0~7.5。在最适反应条件下,K_m值为8.4×10~(-4)mol/L,kcat为16 s~(-1),催化效率k_(cat)/K_m为1.92×10~4L/(mmol·s)。相比较其他报道的BGL酶,该酶具有更好的耐酸性能,可为BGL的理论研究与酶制剂的生产应用提供一定基础。     

大河乌猪火腿中新型α-葡萄糖苷酶抑制肽的分离、鉴定及活性研究

大河乌猪火腿在发酵和后熟过程中蛋白质降解可产生丰富的生物活性肽。为探究大河乌猪火腿中是否存在α-葡萄糖苷酶抑制肽及其活性,以大河乌猪火腿为研究对象,通过超滤分离方法制备了不同分子质量的火腿肽;以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,采用肽组学结合生物信息学分析方法对火腿肽进行鉴定、筛选和活性研究。结果表明：分子质量小于3 kDa的大河乌猪火腿肽具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。从大河乌猪火腿中共鉴定出143条主要来源于肌球蛋白、肌钙蛋白和β-烯醇化酶的肽序列,进一步筛选出的肽段IEEALGDK具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性(IC₅₀值为1.42 mg/mL)。BIOPEP-UWM数据库检索结果显示,肽段IEEALGDK为新型的生物活性肽。肽的稳定性研究表明,肽段IEEALGDK具有较好的热稳定性、耐酸碱性和胃肠道消化稳定性。分子对接结果显示,肽段IEEALGDK主要通过氢键和疏水相互作用占据α-葡萄糖苷酶的活性残基位点Arg594、Arg727、Arg799和Arg467发挥活性作用。大河乌猪火腿的肽段IEEALGDK为新型生物活性肽,具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,研...     

麦胚降血糖肽的分离纯化及鉴定

建立麦胚降血糖肽的分离纯化方法及鉴定活性多肽的结构组成。采用胰蛋白酶酶解麦胚蛋白,得到降血糖多肽,并进行降血糖动物实验。超滤获得高活性组分,离子交换吸附实验选择最佳的树脂,并对麦胚降血糖肽进行离子交换吸附分离,SephadexG-25和SephadexG-15分离,再经过反相高效液相色谱（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）分离高活性成分。最后采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-electrospray ionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS）鉴定活性多肽的结构组成。结果显示酶解麦胚蛋白对α-葡萄糖苷酶的抑制性IC50为10.98?mg/mL,能够缓解糖尿病小鼠的症状。超滤获得分子质量小于5?kDa的高活性组分,IC50为1.60?mg/mL。732型阳离子交换树脂的分离效果最好,2.5%氨水的洗脱率为98.13%,通过动态离子交换吸附分离后,活性显著提高,IC50为0.30?mg/mL。通过SephadexG-25和SephadexG-15分离得到高活性组分,经RP-HPLC分离得到8?个组分（峰）,其中1号峰的活性和含量都最高,IC50为0.098?mg/mL。HPLC-ESI-MS结果显示m/z?274.45的丰度比较高,经离子碎片拼接,共有7?种多肽,其中二肽有1?种,三肽有6?种。本研究对于开发具有降血糖功效的新型功能性食品有一定的作用。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

利用硫酸铵盐析、季氨乙基-琼脂糖凝胶FF（Q-Sepharose FF）离子交换层析、苯基-琼脂糖凝胶6 FF（Phenyl-Sepharose 6 FF）疏水层析和丁基-琼脂糖凝胶HP（Butyl-Sepharose HP）疏水层析对黑曲霉来源β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子质量,并对其酶学性质进行研究。结果表明,经分离纯化后得到分子质量约为116 kDa的β-葡萄糖苷酶,纯化倍数达到50.39倍,回收率为4.65%,比酶活为103.80 U/mg,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH值为5.0,在温度30～50 ℃,pH 2.0～8.0之间具有较好的稳定性。     

响应面法优化蚕蛹蛋白源α-葡萄糖苷酶抑制肽酶解条件

以蚕蛹蛋白为原料,使用中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对其进行酶解,以α-葡萄糖苷酶活性抑制率为评价指标,筛选具有最佳α-葡萄糖苷酶抑制活性的酶品种。通过酶解温度、时间、p H值、酶底比和水底比来选出最佳单因素酶解条件,再通过部分因子试验和中心试验设计的响应面优化法进行酶解条件优化。结果最佳酶解工艺条件:酸性蛋白酶,酶解温度36.4℃,p H 3.79,酶解时间4.6 h,酶底比(质量分数)2%,水底比15 m L/g。验证试验的酶解产物质量浓度在5.0 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率为(65.4±1.3)%。预测值与实际验证值准确性达到97.9%,所得模型具有极好的准确性。     

桑叶多糖的分离纯化及对α - 葡萄糖苷酶的抑制活性

利用Sephadex-G50 从桑叶多糖中分离纯化得到两种不同多糖组分MLP1 和MLP2,经过高效凝胶色谱(GPC)分析表明,MLP1 的纯度为94.55%,重均相对分子质量MW 为11800,多分散性系数为1.25,MLP2 的纯度为96.64%,重均相对分子质量MW 为7630,多分散性系数为1.12。并利用α- 葡萄糖苷酶抑制活性体外筛选模型,对MLP1 和MLP2 进行活性研究,结果表明两个组分对α- 葡萄糖苷酶均具有较好的抑制活性。     

α-转移葡萄糖苷酶的纯化及酶学特性研究

α 转移葡萄糖苷酶是生产低聚异麦芽糖的关键酶。文中探讨了一种黑曲霉所产α 转移葡萄糖苷酶粗酶的分离提纯方法 ,并研究了纯酶的部分酶学特性。该酶可用葡聚糖凝胶G 2 0 0柱层析法分离 ,粗酶液含有多种杂蛋白 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯酶的分子质量为 1 3 0ku。该酶既有水解特性 ,又有较强的转移能力。     

条斑紫菜蛋白酶解液α-葡萄糖苷酶和DPP-IV抑制活性的表征及肽成分解析

在特定可控酶解条件下制备获得条斑紫菜1 000 Da以下小分子多肽为主的蛋白酶解液,分析发现其具有对α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)的双酶抑制活性,且具有良好的pH值、温度稳定性和胃肠消化耐受性。将酶解液经超滤、纳滤、凝胶过滤层析分离纯化后,采用超高效液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间质谱对活性成分进行鉴定,解析出2条多肽氨基酸序列为Ala-Pro、Pro-Gly-Gly-Val。按上述序列合成出这2条多肽(纯度99.69%)表征其对2种酶的抑制活性,结果表明:Pro-Gly-Gly-Val为双酶抑制肽,它对α-葡萄糖苷酶的IC50为18.60 mmol/L,对DPP-IV的IC50为17.80 mmol/L;而Ala-Pro只对DPP-IV有抑制作用,其IC50为4.65 mmol/L。     

乳酸菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

本文采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤方法分离纯化乳酸菌中β-葡萄糖苷酶.经SDS-PAGE测定其相对分子量约为60kD.该酶以对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷为底物时,最适pH值和最适温度分别为6.0和40℃.在45℃以下,pH值在4.5～7.0之间酶活力相对稳定.Hg^2＋和Ag^＋对该酶活力有明显的抑制作用.     

响应面法优化微波辅助酶解制备α-葡萄糖苷酶抑制活性肽工艺

为了优化微波辅助酶解制备α-葡萄糖苷酶抑制活性肽工艺,以冷榨花生蛋白粉为原料,以酶解得到的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为考察指标,在单因素实验基础上,通过响应面Box-Benhnken实验设计进行工艺优化。结果表明,最优工艺条件为底物浓度9.77%、加酶量0.94%、温度59 ℃、时间10 min、pH9.0、微波功率1000 W;此工艺条件下的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物对α-葡萄糖苷酶的抑制率的响应面模型预测值为84.80%,验证实验的抑制率为90.21%±0.93%,两者的差异值为6.38%。本研究结果为花生α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的分离、纯化和应用等研究提供了理论基础。     

酪蛋白源ACE抑制肽的分离纯化

采用碱性蛋白酶酶解酪蛋白制备ACE抑制肽.通过正交实验得到最佳酶解条件为:温度50℃,pH值7.5,酶用量5%,底物质量分数5%,在此条件下,ACE抑制活性为47.23%.采用超滤对酶解液进行初步分离,得到分子量小于4 ku的组分,其ACE抑制活性为57.34%.用凝胶柱SephadexG一25进行进一步纯化,纯化后的组分ACE抑制活性最高可达62.78%,比原酶解物的ACE抑制活性高了24.77%,其相对分子质量在1 500 u以下.     

芭蕉的α-葡萄糖苷酶抑制活性

利用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型对芭蕉花与根提取物进行活性评价,并与阳性对照Acarbose比较,发现芭蕉花与根提取物均能抑制α-葡萄糖苷酶活性。除芭蕉花的乙酸乙酯和正丁醇提取物外,其他提取物活性均远大于阳性对照Acarbose（IC50=1103.01μg·mL-1）。其中,芭蕉根和花的石油醚提取物的活性最高（IC50=32.03μg·mL-1和49.37μg·mL-1）。不同部位比较,芭蕉根的α-葡萄糖苷酶抑制活性好于花;同一部位不同溶剂的提取物比较,石油醚提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性高于乙酸乙酯和正丁醇提取物。      

蜜蜂α-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究

本研究以蜜蜂腹部为材料,通过研磨进行组织破碎,然后硫酸铵沉淀、High Q离子交换层析、疏水作用层析和Superdex G-75凝胶层析,得到的α-葡萄糖苷酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带,分子量约为55kDa。以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）为底物,研究酶催化反应动力学,结果表明：α-葡萄糖苷酶的最适反应pH范围为5.0～6.0,而pH稳定性范围为5.0～10.0。该α-葡萄糖苷酶的热稳定性比较差。其最适反应温度范围在35～45℃内。Zn2＋、Mg2＋、Mn2＋和Fe2＋对α-葡萄糖苷酶有激活作用。而Cu^2＋和Co^2＋对α-葡萄糖苷酶有抑制作用。酶动力学参数Km和Vmax分别为0.183mmol/L和0.085μmol/min·mg。     

木薯块根中β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

研究了木薯块根中β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质。以缓冲液从木薯块根中获得粗提酶液,粗酶酶活力为9.37 U/g木薯干重;再分别通过丙酮沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析进行纯化,β-葡萄糖苷酶酶活力为1.14 U/g木薯干重,经纯化β-葡萄糖苷酶纯度提高了14.62倍,总活力回收率为12.14%,电泳测得其分子量约70 kDa。该酶米氏常数K_m为3.60 mmol/L,V_max为12.36μmol/(min·mg protein);其最适pH为7.0,pH在6.0～8.0之间有较好的稳定性;在40℃以内有良好稳定性,在4℃存放30 d酶活力剩余81.78%。Mn²⁺和K⁺对酶有一定的促进作用,Al³⁺、Cu²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺、Ba²⁺、Na⁺、尿素和SDS对酶没有显著影响(P>0.05),而Fe³⁺、F...     

芭蕉的α-葡萄糖苷酶抑制活性

利用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型对芭蕉花与根提取物进行活性评价,并与阳性对照Acarbose比较,发现芭蕉花与根提取物均能抑制α-葡萄糖苷酶活性。除芭蕉花的乙酸乙酯和正丁醇提取物外,其他提取物活性均远大于阳性对照Acarbose(IC50=1103.01μg·mL-1)。其中,芭蕉根和花的石油醚提取物的活性最高(IC50=32.03μg·mL-1和49.37μg·mL-1)。不同部位比较,芭蕉根的α-葡萄糖苷酶抑制活性好于花;同一部位不同溶剂的提取物比较,石油醚提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性高于乙酸乙酯和正丁醇提取物。     

红佳酿酵母β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

以红佳酿酿酒酵母为出发菌株,通过离子交换法分离纯化β-葡萄糖苷酶,测定酶活力和蛋白质含量,并研究温度、pH值稳定性和金属离子、葡萄糖、酒精度对酶活力的影响。结果表明:粗酶液经过离子交换层析后,纯化倍数为19.41,得率为38.67%;经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)电泳检测为1条谱带,达到电泳纯,分子质量约为45 kD;β-葡萄糖苷酶热稳定性较差,在20~40℃较稳定,在pH 5.0~10.0较稳定;Al3+、Cu2+对酶活力有抑制作用,K+、Mg2+、Ca2+、Zn2+、Na+对酶活力的影响不明显;葡萄糖和酒精对酶活力无明显抑制作用。