藻类生长抑制试验中藻细胞计数方法比较

[目的]研究农药制剂对藻类生长抑制试验中应用分光光度法、流式细胞仪检测法替代血球计数法用于藻细胞计数的可行性。[方法]采用连续扫描(400-780 nm)确定分光光度法的最佳测试波长;并通过对比血球计数法、分光光度法、流式细胞仪检测法之间的测试结果,为稀释液类型不同的农药选择合适的藻细胞计数方法。[结果]扫描获得对小球藻的最佳检测波长为687 nm;分光光度法与流式细胞仪检测法检测结果间无显著差异,2者与血球计数法所得EC50值有时会存在显著差异,但这种差异不影响毒性等级的划分;稀释液中有微米级固体颗粒存在的农药,采用流式细胞仪检测时易发生堵塞;且流式细胞仪存在将农药稀释液中的固体颗粒与油珠误识别成藻活细胞的可能性。[结论]稀释液无论是哪种类型,分光光度法均可以作为血球计数法的替代方法;对于稀释液为纳米溶液及真溶液的农药,流式细胞仪可以替代血球计数法进行检测。     

应用流式细胞仪检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率

目的探索应用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测纳米级聚合物胶束(polymeric micelles,PMs)表面偶联抗体效率的方法。方法将DMPE-PEG-Maleimide、DPPE-PEG-Maleimide、DSPE-PEG-Maleimide、DOPE-PEG-Malei-mide、DLPE-PEG-Maleimide聚合物纳米胶束分别与Anti-GOLPH2抗体共同孵育,使其彼此偶联;再与SNU-423细胞共同孵育,采用FCM检测SNU-423细胞膜表面GOLPH2抗原的阳性表达率,并比较各类聚合物纳米胶束与AntiGOLPH2抗体的相对偶联效率。结果 SNU-423细胞表面GOLPH2抗原的阳性表达率为1.23%;在各类聚合物纳米胶束中,DLPE-PEG-Maleimide与Anti-GOLPH2抗体的相对偶联效率最高,且与抗体浓度呈正相关。结论应用FCM检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率的方法,能在一定程度上反映抗体与聚合物纳米胶束的抗体偶联情况,其检测结果具有一定的参考价值。     

激光粒度仪在评价吸附无细胞百白破疫苗颗粒一致性及稳定性中的应用

目的应用激光粒度仪评价吸附无细胞百白破疫苗(以下简称百白破疫苗)颗粒粒径及分布的一致性和稳定性。方法使用激光粒度仪SALD-7500nano,采用批式池和高浓度池系统测定百白破疫苗、抗原蛋白及铝佐剂颗粒粒径及分布;选取不同中值粒径(D50)聚苯乙烯微球验证仪器的准确性及重现性;采用该仪器分析铝佐剂(A及B厂家)对百白破抗原蛋白的吸附效果,评价百白破疫苗(A、B及C厂家)颗粒粒径一致性(批内及批间)及稳定性(长期、加速及机械刺激)。结果 D50分别为0. 05、1及25μm的聚苯乙烯微球有证标准物质重复测定6次D50的相对误差(relative error,RE)<0. 05%,RSD <5%,激光粒度仪的准确性及重现性良好。A及B厂家疫苗抗原蛋白颗粒粒径分布在30～300 nm范围,铝佐剂颗粒粒径分布在1～30μm之间,疫苗颗粒粒径在1～300μm范围,表明铝佐剂对抗原蛋白吸附效果良好。4批A厂家疫苗批间颗粒D50的CV为37%,A及B厂家疫苗批内颗粒D50的CV均<5%,表明疫苗颗粒批间有一定差别,批内一致性良好。A及B厂家疫苗4℃保存0、30及60 d颗粒D50的...     

生物反应器不同搅拌速度的计算流体力学模拟及对悬浮培养CHO细胞的影响

目的考察搅拌式生物反应器不同搅拌速度对悬浮培养的CHO细胞生长、代谢及促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)表达的影响。方法采用计算流体力学(computational fluid dynamics,CFD)技术对5 L生物反应器在100、200、300、400 r/min搅拌速度下的内部流场进行模拟;对培养过程中的细胞密度、细胞活率、细胞直径、pH、生化参数及FSH浓度进行检测,根据细胞比生长速率、葡萄糖比消耗速率、谷氨酰胺比消耗速率、乳酸比生成速率、氨比生成速率以及FSH浓度变化,确定不同搅拌速度对细胞生长、代谢及FSH产量的影响。结果在100、200、300、400 r/min搅拌速度下,随着搅拌速度的增加,反应器内的剪切速率逐渐增大;导致最大细胞密度逐渐降低,依次为6.22×10⁶、6.14×10⁶、5.87×10⁶、5.72×10⁶个/mL;细胞比生长速率逐渐降低,依次为0.52、0.49、0.47、0.47/d;培养前5 d,在100 r/min搅...     

Sources of Variability in the Response of Labeled Microspheres and B Cells during the Analysis by a Flow Cytometer

A stochastic model of the flow cytometer measurement process was developed to assess the nature of the observed coefficient of variation (CV%) of the mean fluorescence intensity (MFI) from a population of labeled microspheres (beads). Several sources of variability were considered: the total number of labels on a bead, the path through the laser beam, the optical absorption cross-section, the quantum yield, the numerical aperture of the collection optics, and the photoelectron conversion efficiency of the photomultiplier (PMT) cathode. The variation in the number of labels on a bead had the largest effect on the CV% of the MFI of the bead population. The variation in the path of the bead through the laser beam was minimized using flat-top lasers. The variability in the average optical properties of the labels was of minor importance for beads with sufficiently large number of labels. The application of the bead results to the measured CV% of labeled B cells indicated that the measured CV% was a reliable measure of the variability of antibodies bound per cell. With some modifications, the model can be extended to multicolor flow cytometers and to the study of CV% from cells with low fluorescence signal.     

应用CHO细胞法检测百日咳疫苗中的残余毒性

根据百日咳毒素（PT）能特异地使中华地鼠卵巢细胞（CHO）聚集的性质，采用CHO细胞分析法检测了18批全细胞百白破疫苗（DTPw）和12批无细胞百白破疫苗（DTPa）。存放于4℃的两种疫苗中，DTPw聚集CHO细胞滴度的几何均值（GMT）是30.79±2．316,DTPa不产生聚集、两种疫苗在37℃存放4周后，DTPw聚集滴度的GMT是948．09±1．598．DTPa是205．67±1．392。实验结果表明，百日咳疫苗存在明显的毒性逆转现象，与动物试验不一致。因此建议采用CHO方法检测百日咳疫苗中PT的毒性。     

Evidence for P-Glycoprotein Involvement in Cell Volume Regulation Using Coulter Sizing in Flow Cytometry

The regulation of cell volume is an essential function that is coupled to a variety of physiological processes such as receptor recycling, excitability and contraction, cell proliferation, migration, and programmed cell death. Under stress, cells undergo emergency swelling and respond to such a phenomenon with a regulatory volume decrease (RVD) where they release cellular ions, and other osmolytes as well as a concomitant loss of water. The link between P-glycoprotein, a transmembrane transporter, and cell volume regulation is controversial, and changes in cells volume are measured using microscopy or electrophysiology. For instance, by using the patch-clamp method, our team demonstrated that chloride currents activated in the RVD were more intense and rapid in a breast cancer cell line overexpressing the P-glycoprotein (P-gp). The Cell Lab Quanta SC is a flow cytometry system that simultaneously measures electronic volume, side scatter and three fluorescent colors; altogether this provides unsurpassed population resolution and accurate cell counting. Therefore, here we propose a novel method to follow cellular volume. By using the Coulter-type channel of the cytometer Cell Lab Quanta SC MPL (multi-platform loading), we demonstrated a role for the P-gp during different osmotic treatments, but also a differential activity of the P-gp through the cell cycle. Altogether, our data strongly suggests a role of P-gp in cell volume regulation.     

无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞的比较

目的对无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞进行比较。方法应用两种培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化及对血凝效价的影响。结果应用无血清培养基(A)培养CHO-C28细胞虽然可维持细胞正常生长,但贴壁不好,逐渐降低(A)加量情况可得到相应改善。结论 目前无血清培养基尚不能完全取代含血清培养基用于培养CHO细胞。     

涪陵气田页岩气井临界携液流量计算新模型

气井井筒积液会引发产量下降,井口压力降低等一系列问题,影响气井的正常生产。目前对于积液预测所使用的临界携液模型主要有:Tunner模型、Coleman模型、李闽模型等,它们之间的差别为携液系数的变化,无本质区别。为了更准确的预测涪陵气田页岩气井的临界携液流量,基于Tunner模型,考虑返排液量和井斜角对临界携液流量的影响,得到了适用于涪陵气田页岩气井的临界携液模型。     

规整填料塔的壁流量计算

推导了板波纹填料塔的壁流量计算方法 ,并探讨填料层分段高度的选择。     

CHO细胞连续传代培养对细胞毒性试验结果的影响

研究了CHO细胞连续传代培养对细胞毒性试验结果的影响。对不同代次CHO细胞形态进行观察,并利用中性红比色法、MTT比色法检测同种受试物对不同代次CHO细胞的抑制率是否有显著差异。结果表明：随着细胞代次的升高,细胞的形态、胞浆折光性、边界、排列均发生了改变;同种受试物对CHO细胞的抑制率随细胞代次的升高呈上升趋势;中性红比色法较MTT比色法对细胞的衰老更灵敏。为了提高细胞毒性试验结果的可重复性以及可比性,细胞代次是需要控制的重要因素。     

rhIFN-β1a cDNA在CHO细胞上的表达

目的　在CHO细胞上表达rhIFN βcDNA。 方法　利用脂质体技术 ,将含hIFN β基因的pRC CMV IFNβ DNA载体和pSV2dhfr DNA质粒按 3∶1的比例转染CHO k1dhfr 细胞 ,后者是选择性标记。筛选在缺乏胸腺嘧啶的选择培养基生长的单个细胞克隆 ,通过MTX加压扩增与dhfr基因共转染IFNβ基因。筛选的细胞株通过大规模培养 ,收集培养液经一系列的步骤纯化。结果　能够耐受 0 .6 μmol LMTX的细胞可产生IFN 10 5unitperday 10 6cells ,CHO细胞中表达的hIFN β纯化后的抗病毒比活性可达 2 .2× 10 8IU mg。结论　建立了适合表达人干扰素 β的CHO细胞株     

小容积流量工况下汽轮机级内流场的数值分析

采用FLUENT软件对某300MW汽轮机高压缸内小容积流量工况下的多级流动进行数值分析。结果表明:小容积流量工况下,负攻角也引起高压缸叶片流道内产生分离流动,并且上级流场对下级流场的影响很大。前一级的分离流动使下一级动静叶流道内的分离区域增多,分离涡的强度变大,甚至影响了叶片压力面中间部分的流场,导致流体在动叶前缘近壁区域的主流流向和速度有很大程度的改变。因此,进行小容积流量下多级流动的模拟是非常必要的。