传统发酵牦牛酸乳中细菌素产生菌的筛选与鉴定

从西藏羊八井地区、云南香格里拉的传统牦牛酸乳中分离出26株乳酸菌,以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及酿酒酵母为指示菌。采用牛津杯双层琼脂扩散法检测菌株的抑菌谱大小,并经过有机酸排除、过氧化氢排除、蛋白酶水解检测试验,最终筛选得到5株产细菌素的菌株,编号分别为3、23、24、21和25。通过微生物形态学与16SrDNA序列同源性分析,鉴定这些菌株分别为干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳酸乳球菌乳球亚种。抑菌谱试验表明,这些细菌素能够抑制部分食源性革兰氏阳性菌和阴性致病菌,对真菌无抑菌活性。     

鲜天麻内生菌分离鉴定及功能活性探究

目的:明确天麻内生菌及其代谢产物的活性。方法:采用组织匀浆法和划线法从秦巴地区鲜天麻中分离纯化内生菌,测定其抗菌、抗氧化及抗肿瘤活性,并对高活性菌株进行分子生物学鉴定。结果:从鲜天麻内部分离得到4株菌,其中内生菌B1、B2对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性,内生菌B2对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径达26.33 mm。4株菌均有一定的抗氧化活性,其中,内生菌B1对DPPH自由基的清除能力为69.13%。内生菌B2、B3、B4对HEK293T细胞有一定的抑制作用,其中内生菌B2的最高抑制率可达40.40%。分子生物学方法鉴定结果表明,内生菌B1、B2为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),内生菌B3为Lelliottia sp.,内生菌B4为水生拉恩菌(Rahnella aquatilis)。结论:分离纯化的鲜天麻内生菌具有抑菌和抗氧化活性。     

1株抑制乳房炎病原菌乳杆菌的筛选、鉴定及其抑菌机理研究

为了研究乳酸菌对牛乳房炎病原菌的抑制作用,降低牛乳房炎所造成的经济损失。本实验以大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、无乳链球菌ATCC14556作为指示菌,综合抑菌试验和黏附试验从8株乳杆菌中筛选抑菌效果较好的菌株。结果表明,乳杆菌KLDS1.0344对指示菌的抑制作用比其他乳杆菌的作用更明显,最大抑菌直径为15.4 mm,经过对16S rDNA鉴定,发现KLDS1.0344为植物乳杆菌,同时,对抑菌机理的初步研究表明,其代谢过程中产生的乳酸和细菌素类物质对抑制三种指示菌发挥主要作用,而且这些抑菌活性物质在酸性条件下才具有更强的抑菌活力。     

香辛料提取物对肉制品中常见致病菌的抑菌作用

研究27 种植物香辛料的抑菌作用,并比较其醇提取液的抑菌效果。得到抑菌作用较强的乌梅、丁香、甘草3 种原料。再进行复配抑菌实验,经大量实验确定,乌梅、丁香、甘草3 种提取液复配抑菌效果最好的配比。通过测定抑菌圈和最小抑菌浓度(MIC),比较乌梅和复配液的抑菌效果。结果表明,丁香、乌梅、甘草提取液1:8:1(V/V)复配液的抑菌作用优于乌梅的抑菌作用。同时,研究表明,复配提取液的抑菌作用受温度的影响较不明显。     

罗布麻内生细菌的分离鉴定及抑菌活性

目的:研究罗布麻内生细菌及其抑菌活性,旨在深入开发新资源。方法:以红花罗布麻为研究对象,采用平板分离法从中分离内生细菌,利用牛津杯法对其发酵物进行抑菌活性研究,对有抑菌活性的菌株进行形态特征观察和16S rRNA序列同源性分析。结果:筛选出的D1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌四株供试指示菌均有明显的抑制作用,D3菌株对藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌有一定的抑菌作用。结合菌株的形态学特征和16S rRNA序列同源性分析,将D1鉴定为假单胞菌,D3鉴定为菠萝泛菌。结论:罗布麻中蕴含着具有抑菌活性的内生细菌资源,可进一步的开发利用。     

蛹拟青霉不同菌株液体发酵代谢产物的抑菌活性研究

以大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,黑曲霉为指示菌,采用杯碟法对蛹拟青霉不同菌株的液体发酵液及菌丝体甲醇提取物进行抑菌试验。结果表明:蛹拟青霉各菌株液体发酵菌丝体的甲醇提取物对4种指示菌均无抑制活性。当各菌株发酵液甲醇提取物样品浓度为5 mg/mL时,PM27菌株的发酵液样品对大肠杆菌抑制效果最好,PM38菌株发酵液样品对金黄色葡萄球菌抑制效果最好,PM33菌株发酵液样品对枯草芽孢杆菌抑制效果最好,PM27菌株发酵液样品对黑曲霉抑制效果最好,其最小抑菌浓度MIC分别为0.32 mg/mL,0.32 mg/mL,0.64 mg/mL,0.16 mg/mL。     

牦牛曲拉源乳酸菌的耐受性与抑菌性能比较

以源于牦牛曲拉的6株益生乳酸菌为研究对象,比较了耐酸能力、耐胆盐能力、耐渗透压能力和抑菌性能。结果表明:6株乳酸菌菌株的耐酸能力、耐胆盐能力、耐渗透压能力和抑菌性能各不相同。菌株G2、G4、Q1对酸性环境的耐受性最好,G2和G4的耐胆酸盐的能力最强,G2、G4、Q1对高渗透压的耐受性较强,所有菌株在模拟胃肠液环境下的存活率均在90%以上;菌株Q2对大肠杆菌的抑菌效果最强,菌株Q1次之;菌株Q1和Q2对金黄色葡萄球菌的抑制效果较好,其次是菌株G2;对沙门氏菌抑菌作用最强的为菌株Q2,抑菌能力最差为G3;对单增李斯特菌抑菌作用最强的为菌株G4。研究结果可为牦牛曲拉源益生乳酸菌的应用提供理论依据。     

食（药）用蕈菌中高抑菌活性菌株筛选及培养基优化

对4个不同属24株食(药)用蕈菌对11株指示菌抑菌活性进行研究,通过初筛模型,从中筛选出3株功能菌,6株指示菌。对初筛菌株进一步复筛,确定功能菌株H2与枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌为培养基优化的出发菌株和指示菌。通过响应面分析优化培养基配方,结果表明,当麦芽糖40.9g/L、蛋白胨11.2g/L、KH2PO4 2.1g/L、MgSO4 ·7H2O 1.1g/L时,H2对枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌的抑菌活性均较理想,其抑菌圈半径分别达到3.513、4.610、8.800mm。     

乳酸菌素生产菌的分离与鉴定

对乳酸菌素产生菌进行分离,得到4株理想菌株。利用高效液相色谱检测其发酵液,初步确定4菌株均为乳酸菌,其中Ⅱ32菌株产乳酸最多,对各指示菌的抑制作用最显著,对该菌株作进一步的研究。Ⅱ32菌株在MRS培养基上可以生长,最适生长温度为28℃,革兰氏染色呈阳性,无芽孢。通过API生化反应实验、16SrDNA测序可进一步确定该菌株是L·paraplantarum或L·paraplantarum。最终通过对recA-gen的PCR产物检测,鉴定菌株Ⅱ32为Lactobacillusparaplantarum(类植物乳杆菌)。牛津杯抑菌试验显示,该菌株的发酵液不仅对多数G+细菌的生长有较强的抑制作用,而且对大肠杆菌、沙门氏菌等Gˉ细菌的生长也具有明显的抑制作用,但对真菌没有活性。     

Effect of lactoferrin in combination with penicillin on the morphology and the physiology of Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis

The objective of the present study was to evaluate the therapeutic potential of bovine lactoferrin or lactoferricin in combination with penicillin G against Staphylococcus aureus. Minimal inhibitory concentrations of lactoferrin, lactoferricin, penicillin, and combinations of lactoferrin or lactoferricin with penicillin were determined for 15 S. aureus strains including several strains resistant to beta-lactam antibiotics. The fractional inhibitory concentration index indicated a synergistic effect between lactoferrin and penicillin. Combination of lactoferrin with penicillin increased the inhibitory activity of penicillin by two- to fourfold and reduced the growth rate in S. aureus strains tested, whereas the increase in the inhibitory activity of lactoferrin by penicillin was 16- to 64-fold. The addition of iron to the medium containing a combination of penicillin and lactoferrin had no effect on growth inhibition. Electron microscopy revealed that concentration below the minimal inhibitory concentrations of penicillin induced important ultrastructure alterations, which were further enhanced by the presence of lactoferrin. When S. aureus cells were grown in the presence of a combination of penicillin and lactoferrin, changes in the protein profile of the bacteria, including the disappearance of several protein bands due to the presence of lactoferrin, were observed. These data suggest that bovine lactoferrin or lactoferricin in combination with beta-lactam antibiotics can increase the antibacterial activity of these antibiotics against S. aureus resistant to antibiotics.     

抗副溶血弧菌海洋微生物的筛选、鉴定及抑菌谱研究

该研究采用平板涂布法和平板划线法从印度洋沉积物中分离纯化海洋微生物,以副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）为指示菌,采用平板划线法对拮抗菌株进行初筛,琼脂扩散法进行复筛,并通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并研究其抑菌谱。结果表明,从印度洋沉积物中共分离纯化出115株微生物,经过初筛,得到10株有抑制效果的拮抗菌,经过复筛得到1株对副溶血弧菌有较好抑制效果的菌株,编号为NO.5.10.1-1,抑菌圈直径为（18.50±0.28） mm,该菌被鉴定为中村芽孢杆菌（Bacillus nakamurai）。除金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）外,该菌对7株致病菌均有抑制作用,具有较广的抑菌谱。     

丁酸梭菌优良菌株LXYB-2抑菌活性及抗逆性研究

该研究以一株丁酸梭菌（Clostridium butyricum）LXKJ-1为出发菌株,通过常压室温等离子体（ARTP）诱变得到的一株耐丁酸 钠突变菌株LXYB-2,采用牛津杯法比较菌株LXYB-2与菌株LXKJ-1的抑菌能力,同时采用活菌计数法对两株菌株的耐高温、人工胃 液、人工肠液及胆盐等抗逆性进行比较。 结果表明,两株菌株对9种常见致病菌均有较好的抑菌活性,除单核细胞增生李斯特氏菌和 金黄色葡萄球菌外,两株菌的抑菌活性差异显著（P＜0.05）。 在高温90 ℃处理5 min时,两株菌耐受性差异显著（P＜0.05）;人工胃、肠 液耐受性实验结果无显著差异（P＞0.05）;在胆盐质量分数达到0.4%时,两株菌胆盐耐受性差异显著（P＜0.05）。 优良菌株LXYB-2更 适合作为益生菌饲料添加剂产品应用于动物养殖业。     

拮抗丁香假单胞菌海洋微生物的筛选与鉴定

该研究采用平板涂布法和平板划线法从印度洋沉积物中分离纯化海洋微生物，首先采用滤纸片法对丁香假单胞菌拮抗菌株进行初筛，然后采用牛津杯法进行复筛，并通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定，最后研究其抑菌谱。结果表明，从印度洋沉积物中共分离纯化出115株微生物，经过初筛得到33株丁香假单胞菌拮抗菌株，再经过复筛后，筛选出一株对丁香假单胞菌抑菌效果最好的菌株，编号为NO.4.1.3-1，其抑菌圈直径达（12.63±0.06） mm。该菌被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）；除屎肠球菌外，该菌对8株致病菌均有抑制作用，且对肺炎克雷伯氏菌、金黄葡萄球菌的抑菌作用较好，具有较广的抑菌谱。     

肉源乳酸菌抑菌特性分析

为了筛选有抑菌活性的乳酸菌并分析其抑菌的物质基础,利用牛津杯琼脂扩散法,分析了19株从牧区风干肉制品中分离得到的肉源乳酸菌发酵上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌能力,同时从中分别选取对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制能力有显著差异的乳酸菌各3株,对其上清液中的抑菌物质基础和抑菌能力影响因素进行了分析。结果表明19株乳酸菌中菌株F19对大肠杆菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径为(15.07±0.55) mm,而F11发酵上清液对大肠杆菌完全没有抑制效果,菌株F16对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径为(14.47±0.38) mm,而F6、F2发酵上清液对金黄色葡萄球菌完全没有抑制效果;抑菌的物质基础分析表明,酸性环境在抑菌过程中占主导地位,细菌素与过氧化氢发挥协同作用;对其发酵上清液进行不同pH以及不同温度处理后发现,其抑菌活性在pH<5.0时随pH的降低而显著增强(P<0.05),当pH分别升高至5.0、6.0、7.0时试验乳酸菌发酵上清液均不具有抑菌能力,F18发酵上清液分别在60、80、100、121 ℃热处理一定时间后其抑菌能力与对照组相比仍然无明显差异(P>0.05),F11发酵上清液在100 ℃热处理30 min后抑菌能力显著减弱(P<0.05),其余实验菌株发酵上清液温度达到60 ℃以上,抑菌能力随热处理温度提高而显著(P<0.05)下降。本研究发现了乳酸菌发酵上清液的抑菌效果具有特异性,抑菌物质主要是酸性物质,其次是细菌素和过氧化氢;抑菌能力受pH和温度影响,同时具有特异性。研究结果可为优质菌种资源开发提供理论指导与技术支持。     

酱油渣中具有抑菌活性的乳酸菌的筛选及其抑菌特性

本研究以实验室前期从酱油渣中分离的16株乳酸菌ZW1~ZW16为出发菌株,拟筛选对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果较强的菌株,并对菌株产生的抑菌物质、生长特性及其影响因素进行分析。结果显示,乳酸菌ZW2、ZW9、ZW14对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有较高的抑菌活性,其中ZW9抑菌效果最好,排除有机酸和H₂O₂影响后,胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K、α-蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶处理后抑菌活性均显著性降低（P<0.05）,初步推断抑菌物质是一种具有蛋白质属性的细菌素。抑菌动力学曲线显示,菌株培养至20 h抑菌活性趋于稳定。抑菌稳定性显示,抑菌物质在40~100 ℃具有较好的热稳定性,在紫外线照射、表面活性剂处理下均保持较高的抑菌活性;在pH2.0~6.0抑菌活性无明显变化,pH10.0抑菌能力完全丧失。酱油渣中筛选的3株乳酸菌具有抑菌功能且产生的抑菌物质稳定,对开发成新型生物抑菌剂具有重要参考价值。     

产宽谱pH 细菌素乳酸菌的筛选鉴定、毒力检测及细菌素特性研究

采用琼脂扩散法从分离自川西高原奶渣的34株疑似乳酸球菌中筛选细菌素产生菌,初筛检测发酵上清液抑菌活性,复筛排除有机酸和H2O2干扰,检测蛋白酶敏感性,测定抑菌物质盐析液和粗提液抑菌活性,确定菌株SAU-2为细菌素产生菌。根据形态、生理生化指标和16S rDNA序列系统发育分析,将其鉴定为Enterococcus。肠球菌SAU-2溶血素表型阴性,agg、gelE、cylM、cylB、cylA、esp、efaAfm、cpd、cob、ccf、cyILL、cyILS、fsrB和hyLEfm等毒力因子基因型阴性,表明肠球菌SAU-2是安全的。所产细菌素可耐受121℃条件20min;在pH2.0～12.0有抑菌活性;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感,对木瓜蛋白酶和胃蛋白酶不敏感;主要对近缘乳酸菌和G+细菌有抑菌活性,除对1株铜绿假单胞菌和1株红酵母有抑菌活性外,对其余G－细菌和真菌无抑制作用。     

7 种食品防腐剂对肉制品污染微生物的 抑菌效果比较研究

通过测定抑菌率和最低抑菌质量浓度,研究化学防腐剂山梨酸钾、双乙酸钠、单辛酸甘油酯、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)以及生物防腐剂乳酸链球菌素(Nisin)、壳聚糖、ε-聚赖氨酸(ε-PL)对12株肉制品腐败(包括2株环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、3株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、3株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、2株凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、1株蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)以及1株肠球菌(Enterococcus))的抑菌活性。结果表明：7种防腐剂对供试菌都有一定的抑菌效果,抑菌效果强弱顺序为：Nisin＞壳聚糖＞ε-PL＞单辛酸甘油酯＞EDTA＞双乙酸钠＞山梨酸钾。3种生物防腐剂的抑菌效果明显强于其他4种化学防腐剂。通过比较各种防腐剂对不同种和同种不同株的细菌的抑菌效果,表明同一种防腐剂不仅对不同种的细菌抑菌效果不同,即使对同种不同株的细菌其抑菌效果也有很大差异。     

毕赤酵母组成型高效表达启动子的筛选鉴定

为获得高产量、高活性的葡萄糖氧化酶(GOD)酵母表达菌株,优化了GOD的T132S/T56V双突变编码序列,将之克隆到表达载体pGAP_k上得到表达载体pGAP_k-h₂-GOD,以pGAP启动GOD基因的表达。将pGAP_k-h₂-GOD上的pGAP启动子替换为pGCW14和pAOX1,并对pGCW14启动子进行改造,得到3种pGCW14的改造体,最终得到包括pGAP_k-h₂-GOD在内的6种不同启动子的重组表达载体。将这6种载体转化毕赤酵母GS115,建立了一种简便高效的筛选方法初步筛选出GOD重组菌株,再对筛选到的转化子进行发酵培养,测定发酵上清液的GOD酶活力,以此来比较各种启动子启动效率的强弱。结果显示:pGCW14的启动效率是pGAP的3~5倍,改造后的启动子pGCW14+G20A/C-467T(0.767)和pGCW14-UA(0.689)的启动效率较原始的pGCW14(0.574)都有明显的提高,尤其pGCW14+G20A/C-467T启动效率最高,比原始pGCW14提高了32.5%左右。与诱导型启动子pAOX1(1.187)相比,pGCW14+G20A/C-467T(1.109)的启动效率仅比其低6.6%左右。结论:改造后的启动子可望在毕赤酵母组成型高效表达的研究应用中具有一定的前景。     

柑橘精油对致草莓腐烂的菌种的抑菌效果研究

从自然腐烂的草莓中分离纯化得到两株革兰氏阳性细菌（标记为B1和B2）及一株青霉菌,研究了柑橘精油对这三种菌株的抑制效果,并分析了三种菌株的最低抑菌浓度,以及不同贮存时间和pH对柑橘精油的抑菌效果影响。结果表明,柑橘精油对细菌B1、B2和青霉菌均有抑制作用;柑橘精油对三种菌株的最低抑菌浓度为1.25%;贮存时间对柑橘精油的抑菌效果有一定影响,在贮存6 d后柑橘精油的抑菌作用趋于稳定;pH对柑橘精油的抑菌效果影响较大,最佳的作用pH值为5。     

高效抑菌作用乳酸菌的选育

对从自然发酵辣椒中分离出的66株乳酸菌的抑菌特性进行了研究,结果发现66株乳酸菌中仅有28株对指示菌表现出抑菌活性,从这28株中选育出了三株具有广谱、高效抑菌作用乳酸菌,对这三株乳酸菌的抑菌成分进行了研究,最后发现起抑菌作用的物质是细菌素。