牡蛎酶解产物的组成特点及其体外免疫活性

香港牡蛎是我国南方高产低值的一种海洋贝类。为了提高其附加值,本研究以香港牡蛎为原料,通过酶法水解结合细胞实验对酶解产物及其超滤组分进行组成特点分析和免疫活性评价。结果表明:牡蛎酶解产物及各超滤组分分子量分布主要集中在<2.5 k Da范围内,含量达53.00%~85.00%,且氨基酸组成齐全;牡蛎酶解产物可促进脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫功能,各超滤组分(>10、10~5、5~2.5和<2.5 k Da)在浓度为0.25~4.0 mg/m L范围内,其体外免疫活性强弱具有一定的浓度相关性,且<2.5 k Da组分和5~2.5 k Da组分的免疫功能优于其他组分。牡蛎酶解产物各超滤组分中<2.5 k Da组分和5~2.5 k Da组分可作为进一步研究的对象。      

卵转铁蛋白的性质及应用

介绍了卵转铁蛋白的分子组成及其性质,从转铁功能、抑菌功能、调节功能、抑制自由基生成等方面阐述了卵转铁蛋白的生物学功能,例举了卵转铁蛋白作为食品添加剂、抑菌剂方面的应用。     

鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离纯化

鸡蛋清经去卵粘蛋白、盐析后,获得卵转铁蛋白粗提物,通过两步Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱纯化卵转铁蛋白(OVT),利用SDS-PAGE电泳和HPLC法检测其纯度.结果表明,两步阴离子交换色谱获得纯度分别为78.26%和97.53%的卵转铁蛋白.     

鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离纯化

鸡蛋清经去卵粘蛋白、盐析后,获得卵转铁蛋白粗提物,通过两步Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱纯化卵转铁蛋白（OVT）,利用SDS-PAGE电泳和HPLC法检测其纯度。结果表明,两步阴离子交换色谱获得纯度分别为78.26%和97.53%的卵转铁蛋白。      

胰蛋白酶酶解制备卵转铁蛋白源抗菌活性肽条件的研究

卵转铁蛋白具广谱抗菌性,现已成为生物医学领域研究的热点。以"两步醇析法"获得的卵转铁蛋白为研究对象,经胰蛋白酶酶解制备抗菌活性肽,优化酶解条件,并研究其对大肠杆菌的抗菌作用。结果表明,制备卵转铁蛋白抗菌肽抑菌效果最好的试验条件为:p H值8.5,温度55℃,底物浓度30 mg/mL,酶与底物浓度比1∶300(U/mg),酶解时间1.5 h,在该条件下进行酶解,得到的抗菌肽抑菌率为89.152%。     

鸡蛋卵转铁蛋白过敏原的体外模拟消化特性

采用体外静态消化模式,分别模拟婴幼儿和成年人的胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶消化鸡卵转铁蛋白,利用Tricine-SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS对消化产物进行分析,研究鸡蛋蛋清过敏原卵转铁蛋白的消化特性.结果表明:婴幼儿和成年人的模拟胃液、小肠液以及小肠刷状缘膜酶都能够消化卵转铁蛋白.在模拟婴幼儿消化体系中...     

卵转铁蛋白生物活性肽功能研究进展

蛋清中的卵转铁蛋白具有多种生物活性和功能特性,使其成为获得生物活性肽的重要蛋白。卵转铁蛋白经水解后主要产生具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抑制血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性等各种功能的生物活性肽,能为人体健康提供巨大的益处,受到广泛关注。为此,本文综述了近年来国内外关于卵转铁蛋白功能肽的制备、肽的生物学活性研究进展及其作为防御和治疗药物原料的潜在应用前景,以期为功能性肽的开发和利用奠定基础。     

体外评估十株乳杆菌对免疫细胞活性的影响

针对传统的两种糖基化接枝方法和改进方法从糖基化反应程度进行系统比较,并对产物氨基酸组成进行分析,以期进一步揭示蛋白质糖基化方法对于糖基化反应过程及产物的影响机制。本文利用干热法、湿热法和加压辅助湿热三种糖基化方法,对大豆7S球蛋白和葡聚糖的糖基化产物从反应程度、氨基酸组成等方面进行研究发现,结果表明:三种制备方法的反应程度高低顺序依次为:湿热法>加压辅助湿热法>干热法,说明压力能够对Maillard反应的进行具有一定的抑制作用,可以控制反应向理想阶段进行。大豆7S球蛋白和葡聚糖的糖基化主要发生在蛋白质肽链上的赖氨酸和精氨酸侧链上的自由氨基,干热法与其它两种方法相比糖链更有易于和精氨酸侧链上的自由氨基发生共价交联,而湿热法和加压辅助湿热法相比糖链更易于和赖氨酸侧链上的自由氨基发生共价交联。     

卵转铁蛋白对树突状细胞成熟的影响

为考察卵转铁蛋白(OVT)对髓源性树突状细胞(BMDCs)成熟的影响。采用不同浓度OVT单独刺激和脂多糖(LPS)+不同浓度OVT共刺激第6 d小鼠BMDCs 48 h,通过倒置显微镜观察细胞形态,并用流式细胞仪测定各组CD11c+细胞比例以及DCs表面MHC-II,CD80和CD40分子表达量。结果表明,不同浓度OVT组刺激的DCs周围毛刺状突起增加,呈现典型的树突状细胞形态,且上调CD11c+细胞比例以及DCs表面MHC-II、CD80和CD40分子表达量。LPS+不同浓度OVT组中,低浓度(≤25μg/m L)组可提高CD11c+细胞比例,上调MHC-II、CD80和CD40表达量;高浓度(25μg/m L)组则能下调CD11c+细胞比例和DCs表面MHC-II、CD80和CD40表达量。因此,不同浓度OVT均能刺激DCs的成熟;LPS+不同浓度OVT共刺激DCs,能显著提高DCs的成熟度,但呈现剂量依赖型,即低浓度时,两者表现出协同作用,高浓度时两者表现出拮抗作用。     

鸡蛋过敏原卵转铁蛋白标准物质候选物的研究

目的:制备高纯度的鸡蛋过敏原卵转铁蛋白,并详细表征其理化性质及免疫学性质,满足标准物质候选物的质量要求。方法:通过两步柱层析法制备卵转铁蛋白并分装、冻干,然后借助质谱鉴定身份;采用SDS-PAGE银染方法鉴定纯度,圆二色光谱、荧光光谱和核磁共振表征高级结构;利用Bradford法检测含量和SDS-PAGE银染方法评估稳定性,间接ELISA方法评估其与Ig E结合能力。结果:制备的蛋白经质谱鉴定为鸡蛋卵转铁蛋白,分子量约79.55 ku,等电点为6.85,纯度高达94.6%;结构分析显示,制备的卵铁蛋白保留了其天然结构特性,并且冻干未使卵转铁蛋白的结构产生明显的变化;在4℃条件下储藏5个月,卵转铁蛋白的含量、纯度、结构和免疫学活性均无明显变化。结论:制备的卵转铁蛋白可作为标准物质候选物。      

卵转铁蛋白和乳铁蛋白的氧化稳定性的比较研究

分析比较了卵转铁蛋白（Ovotransferrin,OVT）和乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）的氧化稳定性。采用SDS-PAGE、蛋白溶解度、总巯基含量及羰基含量等检测方法,研究了OVT和LF在AAPH（2,2’-azobis（2-amidinopropane）hydrochloride）作用下的结构变化,以及其对ABTS和DPPH自由基的清除率。SDS-PAGE的结果表明:当AAPH浓度为5 mmol/L时,LF在较高分子量区域开始出现新条带;当AAPH浓度为20 mmol/L时,OVT在较低分子量区域（31⁴3 ku）才出现新条带;随着AAPH浓度进一步增大,OVT和LF主要条带密度明显降低,经AAPH作用后出现的新条带的密度都逐渐增高。当AAPH（20 mmol/L）作用1 h时,LF即在较高分子量区域出现新条带;在4 h时,OVT才在较低分子量区域出现新条带。当OVT和LF的浓度为2 mg/m L时,AAPH（20 mmol/L）可致OVT和LF同时出现新条带;LF随其浓度增大,在较高分子量区域出现的新条带的密度逐渐降低;OVT在4 mg/m L以上时,在较低分子量区域的新长带已不可见。随着AAPH（20 mmol/L）的作用时间延长（1⁸ h）,OVT和LF的溶解度、总巯基含量均逐渐下降,羰基含量均逐渐升高（p<0.05）。OVT和LF对ABTS和DPPH自由基清除率随着蛋白浓度增大而逐渐增大（p<0.05）。综上所述,LF较OVT更容易被AAPH氧化导致结构改变。      

卵转铁蛋白和乳铁蛋白的热处理稳定性的比较研究

卵转铁蛋白（Ovotransferrin,OVT）和乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）经不同温度（50⁹0℃）处理后,通过圆二色性分析比较其二级结构的变化,紫外吸收和表面疏水性分析比较其空间构象的变化,SDS-PAGE分析比较其分子的聚集,溶解度分析比较其功能的变化。结果表明,50⁶0℃时,OVT和LF的理化特性均无明显变化。70℃时,OVT和LF的紫外吸光值均明显增大;80⁹0℃时,OVT的紫外吸光值不再进一步增大,而LF的进一步逐渐增大。70⁹0℃时,OVT和LF的表面疏水性指数均明显增大;LF的表面疏水性指数远大于OVT的,但OVT的增大程度较LF的更大。70⁹0℃时,OVT和LF的α-螺旋含量均明显降低,β-折叠和无规卷曲含量均明显升高,且OVT的二级结构组分的变化程度较LF的更大。70⁹0℃时,OVT和LF的SDS-PAGE图谱中的主要蛋白条带密度均明显降低;相同温度下,OVT的降低程度较LF的更大。70⁹0℃时,OVT和LF的溶解度均明显降低;相同温度下,OVT的降低程度较LF的更大。总之,OVT和LF的结构和功能在加热时均发生改变,但OVT的变化程度较LF的更大。      

改性双歧杆菌胞外多糖体外免疫活性研究

对双歧杆菌胞外多糖进行乙酰化、羧甲基化、多羟基化、主链降解修饰,并测定修饰前后多糖对IL-2、IFNγ细胞因子的影响。试验表明,与对照组相比,除主链降解修饰外,其他3种改性产品均能显著提高IL-2、IFNγ细胞因子的浓度,表现出体外免疫活性。其中,羧甲基化和多羟基化改性多糖的体外免疫活性高于未改性多糖。     

体外评估乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响

该研究以商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LGG为阳性对照菌,体外评估实验室保藏的5株乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7细胞活性、吞噬活性及免疫活性分子NO、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-10（IL-10）分泌水平的影响,以期从中筛选出具良好免疫调节作用的菌株。结果表明,鼠李糖乳杆菌260具有更优的免疫调节作用,在特定乳杆菌活菌浓度时,能显著提高巨噬细胞RAW264.7的细胞活性、吞噬活性及NO、TNF-α和IL-10的分泌水平（P＜0.05）。最高细胞增殖率为196.62%;最低乳酸脱氢酶（LDH）释放量为554.36 U/100 mL;最高吞噬活性为136.86%;最高NO分泌量为5.70 μmol/L;最高IL-10分泌量为15.56 pg/mL,最高TNF-α分泌量为50.98 pg/mL。     

瑞士乳杆菌发酵乳中生物活性小肽的免疫功能特性研究

利用MTT、中性红吞噬、一氧化氮诱生分泌等方法从已获得的瑞士乳杆菌发酵乳来源小肽中筛选出对小鼠腹腔巨噬细胞具有免疫活性的小肽GLPN,并通过ELISA方法检测TNF-Ω,IL-1β,IL-6的细胞因子水平,以对具有的免疫促进作用效果进行评估.结果表明,GLPN在0.1 g/L质量浓度下所有指标上都能表现出显著的促进作用,而在LPS作用下,GLPN质量浓度达到0.5 g/L也未引起炎症因子的过量表达.     

阿里红多糖组分对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及其组分FOPS-a、FOPS-b对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。方法以小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究对象,不同浓度(50~1600μg/m L)FOPS、FOPS-a、FOPS-b干预后,用cck-8试剂盒测定细胞活力,中性红法测定其吞噬活性,NO试剂盒测定NO的含量,ELISA试剂盒测定TNF-α和IL-1β释放能力。结果 FOPS、FOPS-a、FOPS-b在一定的浓度范围内可以提高RAW264.7巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、一氧化氮以及TNF-α、IL-1β的释放量。结论 FOPS、FOPS-a、FOPS-b一定浓度范围内具有良好的增强RAW264.7巨噬细胞免疫功能的作用。