复方蛋白酶促进剂的初步研究

分别探讨了三种金属离子及其与天然有机物组方后对1398中性蛋白酶活力的影响.采用福林法测定了酶的最适工作条件,并在此基础上确定了三种不同金属离子的最适添加浓度,同时较系统地考察了它们分别作用于酶以及与天然有机物进行组方后对酶活力的影响,结果表明钙离子与天然有机物组方后对酶活力提高最为显著.     

复方α-淀粉酶促进剂的研究

采用分光光度计法测定了α—淀粉酶的最适作用条件和天然有机物的最适工作浓度，并以天然有机物为主成分，分别与6种常见金属离子进行组方，较系统地考察了各组方对α—淀粉酶活力的影响，从中优选出复方α—淀粉酶促进剂的最佳配方。     

几种促进因子对中性蛋白酶活力影响比较

分别探讨了2种天然有机物(F、K)和3种金属离子(Ca2 、Mn2 、M2 )对1398中性蛋白酶活力的影响.采用福林法测定了酶的最适反应条件,分别确定了天然有机物和金属离子的最适工作浓度,较系统地考察了它们对酶活的影响,并就对蛋白酶活力的促进作用进行比较,结果表明天然有机物均优于金属离子.     

天然有机物对中性蛋白酶活力的影响

本文探讨了两种不同天然有机物对1398中性蛋白酶活力的影响，测试了该蛋白酶的最适作用条件，即最适温度为50℃，最适pH值为7．6。较系统地分别考察了不同浓度的天然有机物H、天然有机物K及H与K同时对1398中性蛋白酶活力的影响，结果表明对酶活均有不同程度的激活，其中天然有机物H和K同时作用于蛋白酶，提高酶活最为显著。     

天然有机物对中性蛋白酶活力的影响

探讨了两种不同天然有机物对1398中性蛋白酶活力的影响,测试了该蛋白酶的最适作用条件,即最适温度为50℃,最适pH值为7.6.较系统地分别考察了不同浓度的天然有机物H、天然有机物K及H与K同时对1398中性蛋白酶活力的影响,结果表明对酶活均有不同程度的激活,其中天然有机物H和K同时作用于蛋白酶,提高酶活最为显著.     

金属离子对蛋白酶活力和热稳定性的影响

分别详细考查了3种金属离子对1398中性蛋白酶活力和热稳定性的影响。采用福林法测定了蛋白酶的最适反应温度和pH值,并在最适条件下确定了3种不同金属离子的最适反应浓度,考察和比较了它们对蛋白酶活力及热稳定性影响的差异,结果表明:这3种金属离子对酶活均有提高,而钙离子还具有增强酶热稳定性的作用。     

天然有机物HFS对酸性蛋白酶酶活的影响

利用酶制剂处理食品原料,进行生产,历史悠久,酶的最大应用对象也是食品工业。在现代食品工业中,酶的应用几乎涉及食品加工的各个领域。随着酶制剂的应用日益广泛,经济效益显著。蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称,而酸性蛋白酶适宜在酸性条件下水解动植物蛋白质,通过内切和外切作用将蛋白质水解为小肽和氨基酸。本文探讨了天然有机物-HFS对537酸性蛋白酶酶活的影响,测定了该酶的最适反应条件(最适温度为55℃,最适pH值为3.0),考察并探讨了天然有机物-HFS对537酸性蛋白酶最适反应条件的影响。试验结果表明天然有机物-HFS对537酸性蛋白酶具有较好的激活作用,可有效提高酶活约8%,对该酶的最适反应条件无影响,也不改变最适条件曲线的基本变化规律。     

重组过氧化氢酶与一种商品过氧化氢酶的性质比较

将重组过氧化氢酶和市售一种商品过氧化氢酶的性质进行了比较。重组酶的最适温度为70℃，某商品过氧化氢酶的最适温度为40℃；与这种商品过氧化氢酶相比，重组酶的热稳定性更好。重组过氧化氢酶和这种商品过氧化氢酶的最适pH都是7．0；重组酶和这种商品过氧化氢酶在pH3-8的范围内均较为稳定；重组酶在室温放置1个月后酶活力基本保持不变，而此种商品过氧化氢酶活力损失约70％；金属离子对重组酶和这种商品过氧化氢酶都有抑制作用，抑制程度有所不同；EDTA抑制这种商品过氧化氢酶的活性，但不抑制重组酶的活性。     

微小毛霉凝乳酶的酶学性质研究

目的：研究微小毛霉(HL-1)凝乳酶的酶学性质。方法：研究了酶的最适温度,酶的pH值稳定性和热稳定性,探讨了金属离子、化学物质和钙离子对酶活力的影响,加酶量对酶反应的影响,测定了酶的蛋白水解活力、相对分子量和酶的Km与Vm值。结果：酶的最适温度为60℃; 最适pH值为5.5;酶在65℃保温5min活力损失95%;钙离子是酶的激活剂,其含量与酶活力正相关,而钾离子则对酶有抑制作用;氯化钠对酶活力的影响不大,但是SDS可导致酶严重失活;加酶量与反应时间成反比;酶的蛋白水解活力为485.3U/g;相对分子质量是42000,Km为0.02380mol/L,Vm为1.1227mg/min。结论：得出了微小毛霉(HL-1)凝乳酶的酶学性质。     

米黑毛霉凝乳酶酶学性质研究

研究了米黑毛霉凝乳酶的最适温度、最适pH、热稳定性,探讨了金属离子对酶活力的影响,加酶量对酶反应的影响,测定了酶的蛋白水解活力和酶的K^m与V^m值。结果显示：酶的最适温度为70℃;最适pH6;酶液在65℃保温10min,酶活损失达96％;Na^＋和K^＋对酶稍有抑制作用,Fe^2＋对酶有促进作用,Cu^2＋对酶有强烈的抑制作用;减少酶的添加量,在规定时间内凝乳会导致凝乳酶酶活测定结果偏大;凝乳酶蛋白水解活力为1048U／g;Km为190．84g／L,Vmax=7．8678g／s。     

铬鞣革屑固定化1398中性蛋白酶的制备和应用

以铬鞣革屑为载体、戊二醛为交联剂,探讨了影响1398中性蛋白酶固定的因素。确定了制备固定化1398中性蛋白酶的最佳条件:温度35℃,pH值7.0,戊二醛与载体反应的时间4 h,酶与载体反应的时间8 h,戊二醛用量0.11%,酶用量3.1%。用铬鞣革屑固定化1398蛋白酶催化水解明胶,采用串连柱型反应器,可方便的控制水解明胶相对分子质量的大小。     

大鲵肌肉ACE抑制肽的制备及其稳定性

以大鲵肌肉为原料,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为评价指标,通过单因素试验筛选得到3种效果较佳的单酶。在此基础上,借助混料试验,对三酶复合的配比进行优化。当风味蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶质量比为0.54︰0.23︰0.23时,产物具有最高的ACE抑制率,IC50值为0.55 mg/mL。探究金属离子和体外模拟胃肠消化道酶系对对产物ACE抑制率稳定性的影响,结果显示,Zn^2+、Al^3+、Fe^2+离子能显著降低大鲵多肽的ACE抑制率,胃蛋白酶系对大鲵多肽的ACE抑制率影响较小,但胰蛋白酶系能显著降低ACE抑制率。     

猪皮残存AS1398酶活力的酸性抑制

对AS1398酶在不同pH值的酸性缓冲溶液中的活力抑制进行了试验,以此为基础,研究了猪皮块中残存的AS1398酶在加NaCl与不加NaCl的酸性缓冲溶液的活力变化,找到了一种通过两次酸性缓冲溶液处理完全抑制皮块中残存酶活力的方法.     

耐高温蛋白酶产生菌的筛选及酶学特性的初步研究

为了提供可用于水产饲料添加剂用途的蛋白酶,从玛珥湖环境中筛选出耐高温蛋白酶产生菌株。通过牛奶平板筛选的方法从土壤中分离获得30株产蛋白酶菌株,并通过摇瓶发酵复筛的方法筛选产酶最高的菌株HL-3,其发酵液的蛋白酶活性高达399.2 U/m L。通过生理生化特征鉴定、16S r DNA基因序列和系统发育分析,初步鉴定菌株HL-3为地衣芽孢杆菌。菌株HL-3所产蛋白酶的最适作用温度为70℃,最适p H为7.0,在90℃保温10 min后酶活力仍可保留75.12%。在离子浓度为1.0×10^-3mol/L时,Cu²⁺和Mn²⁺对该酶有较强的抑制作用,Fe²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺对该酶有激活作用,Mg²⁺和K⁺对该酶活性几乎没有影响。预期该菌株产的蛋白酶具有用于水产饲料添加剂的潜力。      

混合菌发酵酶解法脱除大豆肽苦味的研究

采用黑曲霉、米曲霉和毛霉混合菌发酵制备复合蛋白酶液,在单因素实验基础上,利用混料设计法对混合菌发酵产复合蛋白酶工艺进行优化,确定最优发酵工艺为:混合菌接种量为2%,黑曲霉∶米曲霉∶毛霉为1.59∶1∶1.95,pH为5,培养温度30℃,培养时间为72h。在该发酵工艺条件下,可得到具有较高酶活的复合蛋白酶液。制得的蛋白酶液酶解大豆肽进行脱苦实验,实验结果表明,最佳脱苦条件为:蛋白酶浓度为70U/mL,酶解pH为5,酶解温度为60℃,酶解时间2h。在该条件下,短肽得率较大,苦味值较低,具有较好的脱苦效果。      

化学物质对蛋白酶在羊毛减量率及有关方面的影响

考查了金属离子、葡萄糖、蔗糖、甘油、表面活性剂对蛋白酶在羊毛减量率及有关方面的影响.它们在一定条件下能提高蛋白酶对羊毛的减量率,但原因却不同.金属离子的作用主要是提高蛋白酶的活力,葡萄糖、蔗糖、甘油主要是维持蛋白酶在水溶液中高级结构的稳定性,而表面活性剂能降低溶液表面自由能,降低蛋白酶从溶液扩散到羊毛纤维表面的能垒.     

Purification and characterization of organic solvent-stable protease from organic solvent-tolerant Pseudomonas aeruginosa PST-01

An organic solvent-stable protease (PST-01 protease) in a culture broth of organic solvent-tolerant Pseudomonas aeruginosa PST-01 was purified by successive hydrophobic interaction chromatography using Butyl-Toyopearl gels. The purified enzyme was homogeneous as determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. PST-01 protease had a molecular mass of 38 kDa. The optimum temperature and pH for casein hydrolysis were 55 degrees C and 8.5, respectively. PST-01 protease was stable at pH 8-12 and below 50 degrees C and was determined to be a metalloprotease which was inhibited by EDTA, 1,10-phenanthroline, and phosphoramidon. PST-01 protease inhibited by EDTA was reactivated completely by the addition of zinc or cobalt ions. The stability of PST-01 protease in solutions containing water-soluble organic solvents or alcohols was higher than that in the absence of organic solvent. Furthermore, in general, PST-01 protease was more stable than commercially available proteases, namely, subtilisin Carlsberg, thermolysin, and alpha-chymotrypsin, in the presence of water-soluble organic solvents or alcohols.     

一种芽孢杆菌中性蛋白酶启动子的克隆和验证

为研究1398中性蛋白酶高效表达的分子机制,对其生产菌株进行了基因组测序和比对,确认了表达该中性蛋白酶的操纵子序列及结构。通过构建1398中性蛋白酶表达质粒,将其转入枯草芽孢杆菌;以gfp为报告基因,将包含P1398在内的不同启动子分别构建到质粒p MK4,转入枯草芽孢杆菌。发酵研究结果表明:P1398是一种底物自发诱导的高效启动子,是菌株表达1398中性蛋白酶的关键因素。1398中性蛋白酶在枯草芽孢杆菌中可获得稳定的表达量,其中在164中活性最高(1210 U/m L);重组枯草芽孢杆菌在LB中培养时,P1398介导的GFP的表达量低于P43和Pxyl A,而在工业培养基PPB中,其表达量为Pxyl A介导的GFP的2.14倍。因此,P1398可用于食品工业酶重组生产菌株的构建。      

玉米ACE抑制肽水解酶的筛选及酶解条件的优化

酶解玉米蛋白粉(蛋白含量为70%)制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,通过酶的筛选实验确定了AS.1398中性蛋白酶作为最佳水解酶,在此基础上,进行pH、温度、底物浓度、加酶量[E]∶[S]的单因素实验,并且确定4种因素的参数值进行L9(34)正交实验,采用体外检测ACE抑制率和肽得率为指标来确定最佳工艺条件。研究结果表明,选用AS.1398中性蛋白酶作为水解酶,水解时间在2h时,pH7.0,温度50℃,底物浓度5%,加酶量[E]∶[S]为1.5∶100,得到的最大ACE抑制率为85.65%,肽得率为58.64%。