内、外源酶复合酶解南美白对虾虾头、虾壳的研究

以南美白对虾加工废弃物虾头、虾壳为原料,筛选了与虾头内源酶复合水解有协同作用的最佳外源蛋白酶,确定并比较了外源酶复合水解的工艺。结果表明,胃蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶与虾头内源酶协同作用最好;以水解度为指标,其与内源酶复合水解的最优工艺分别为:胃蛋白酶酶用量45U/g原料,料水比1∶4.5,反应温度55℃,反应时间6h,pH7.5;碱性蛋白酶酶用量30U/g原料,料水比1∶5,反应温度50℃,反应时间5h,pH7.0;风味蛋白酶酶用量40U/g原料,料水比1∶4.5,反应温度50℃,反应时间6h,pH7.0;其水解度依次为38.26%,35.10%和47.31%,分别比只有内源酶作用的对照组高8.12%,4.96%和17.17%,其中风味蛋白酶与内源酶的协同作用最好。      

内、外源酶复合酶解南美白对虾虾头、虾壳的研究

以南美白对虾加工废弃物虾头、虾壳为原料,筛选了与虾头内源酶复合水解有协同作用的最佳外源蛋白酶,确定并比较了外源酶复合水解的工艺。结果表明,胃蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶与虾头内源酶协同作用最好;以水解度为指标,其与内源酶复合水解的最优工艺分别为:胃蛋白酶酶用量45U/g原料,料水比1∶4.5,反应温度55℃,反应时间6h,pH7.5;碱性蛋白酶酶用量30U/g原料,料水比1∶5,反应温度50℃,反应时间5h,pH7.0;风味蛋白酶酶用量40U/g原料,料水比1∶4.5,反应温度50℃,反应时间6h,pH7.0;其水解度依次为38.26%,35.10%和47.31%,分别比只有内源酶作用的对照组高8.12%,4.96%和17.17%,其中风味蛋白酶与内源酶的协同作用最好。     

虾头的内源蛋白酶酶解研究

本实验对近缘新对虾虾头内所含的内源蛋白酶的性质进行了初步研究，在此基础上分析和比较利用内源蛋白酶对虾头的酶解工艺，当固液比1：2，酶解温度60℃，pH值7．06，酶解时间4h，酶解产物中游离氨基酸含量较高：固液比1：2，酶解温度50℃，pH值8．2，酶解时间4h，酶解产物中TCA可溶性蛋白(短肽)含量较高。     

南美白对虾虾头、虾壳化学成分的对比研究

对比研究了南美白对虾虾头、虾壳的一般化学威分及氨基酸,脂肪酸、矿质元素组成. 结果表明,虾头、虾壳水分舍量最高,分别为78. 44%和75. 15%;蛋白质,灰分、甲壳素含量丰富,以湿重计,虾头中分别为6. 38%、3. 62%和3. 33%,虾壳中分别为5. 22%、5. 30%和6. 67%;虾头中脂肪、总糖及总酸度以湿基计分别为2. 42%、0. 27%和2. 30%,虾壳中则依次为1. 09%、0. 16%和2. 29%.虾头、虾壳中氨基酸种类齐全,矿质元素含量丰富,含有人体8种必需氨基酸、4种呈味氨基酸以及7种时人体有益的微量元素. 虾头、虾壳中油酸、亚油酸,DHA和EPA含量丰富,不饱扣脂肪酸含量分别占游离脂肪酸总量的55. 57%和48. 42%(以干基计). 对比而言,虾头中脂肪、总糖、蛋白质高于虾壳,分别为虾壳的2. 22倍、1. 69倍和1. 22俄虾头中氨基酸总量及游离脂肪酸总量也明显高于虾壳,分别为虾壳的1. 37倍和2. 96倍;但虾壳中甲壳素含量显著高于虾头,为虾头的2. 00倍;此外,虾壳中钙元素含量极高,占原料干重的19. 6%,比虾头高1.87倍.     

南美白对虾虾头内源酶的分离纯化

对南美白对虾虾头的内源酶进行分离纯化及酶学性质的研究。利用正交正交试验优化了硫酸铵粗提内源酶最佳工艺条件:缓冲溶液pH6.8,硫酸铵一级沉淀饱和度20%,硫酸铵二级沉淀饱和度80%。虾头内源酶经硫酸铵分级沉淀后,再经Sephadex G-50葡聚糖凝胶柱层析纯化,得到组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等3个酶活峰。对酶活最高的组分I进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱分析,表明组分Ⅰ中主要活性酶分子质量约为41.0kDa。凝胶层析分离组分Ⅰ最适作用pH为7.0～9.0,最适作用温度为60～70℃。     

南美白对虾虾头内源酸性蛋白酶的分离纯化及其酶学特性研究

通过10%～50%的硫酸铵盐析和两次柱层析,从南美白对虾虾头的匀浆液中分离纯化出一种内源酸性蛋白酶,经电泳分析测得其分子量为27.45ku,该酶的Km值、Vmax值、最适pH和最适反应温度分别为2.01g/L、26.39μg/min、3.0和30℃。内源酸性蛋白酶的热稳定性较差,Pepstatin A和EDTA对该蛋白酶表现出强烈的抑制作用,Hg+能完全抑制该蛋白酶,但Ca2+却能激活该蛋白酶。据此推断该蛋白酶是一种金属蛋白酶,该酶活性中心含有一些金属离子,其性质类似于胃蛋白酶类。     

响应面分析法优化复合酶酶解南美白对虾虾头的工艺条件

以南美白对虾虾头为原料,对复合酶酶解的工艺条件进行优化,制备高水解度的虾头酶解液。首先确定最佳复合酶组合,然后通过单因素试验和响应面分析法优化并确定最佳的酶解条件。结果表明,采用风味酶与中性酶组合对虾头进行酶解(风味酶:中性酶为1:1,酶活比),加酶量2000U/g 蛋白、料液比2:1(g/ml)、pH7.33、温度54.27℃、时间3.97h。酶解后增味氨基酸含量明显增加,酶解蛋白液的风味良好,可以作为调味品基料使用。     

虾头内源酶酶解物的ACE抑制活性分析

采用正交实验对影响虾头自溶的因素(pH值、温度、固液比和自溶时间)进行了优化,优化条件为:45℃,pH4,固液比1:3,时间2h,其ACE抑制率达到了40.7%(2mg/mL)。分析测定了经Sephadex G-25分离后的各组分的IC_(50)值及氨基酸组成。分子质量分布为403～84 u的组分对ACE的抑制作用最高,IC_(50)值为0.75mg/mL。该组分中与ACE抑制活性相关的7种氨基酸占氨基酸总量的58.9%。     

南美白对虾虾头制备鲜味水解物的研究

本文以25 ℃下自溶6 h后的南美白对虾虾头为原料,采用酶水解法进行鲜味水解物的制备。以鲜味滋味、蛋白质回收率、肽得率和水解度为评价指标,进行外源酶的选择和酶解工艺条件的逐步优化研究。研究表明,经四种单酶酶解,均明显提升酶解效率,其中菠萝蛋白酶(Bromelain)和风味蛋白酶(Flavorzyme)能有效提升酶解液的鲜味、降低苦涩味。制备具有良好鲜味特征水解物的条件为:自溶后的虾头,加入菠萝蛋白酶(420 U/g样品)和风味蛋白酶(12 U/g样品)两种酶(料液比1:1.5 (g/mL)),在pH7.5、50 ℃下酶解3 h,该工艺下蛋白质回收率、肽得率和水解度分别可达79.75%、71.71%和18.28%。获得水解物氨基酸组成中ΣEAA/ΣAA与ΣEAA:ΣNEAA分别为37%和1:1.7。65%的总蛋白氨基酸释放为游离氨基酸,其中,59%的总蛋白鲜甜味氨基酸释放为游离氨基酸,水解物营养价值高且具有良好鲜味。     

利用内源蛋白酶对虾头水解的研究

本文研究了温度、固液比、时间、pH值等因素对近缘新对虾虾头内源蛋白酶酶解反应的影响 ,并用二次旋转正交实验确定了反应的最佳条件。结果表明最佳水解条件为 :固液比 1:2 ,pH值 6 .81,温度 5 3℃ ,时间 5h。     

酶解南美白对虾下脚料制备抗氧化酶解液的研究

以南美白对虾加工下脚料(虾头虾壳)为原料,采用内源酶、中性蛋白酶,通过控制pH、水料比、酶解温度、酶解时间和酶用量等条件进行酶解,从而制取抗氧化酶解液,以还原能力、清除羟基自由基能力为指标选择最优的酶解条件。结果表明,内源酶最佳酶解条件为:pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为40℃、酶解时间为6h,此时还原力为0.668,·OH清除率为67.24%;中性蛋白酶的最佳酶解条件为:酶用量为60U/g原料,pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为60℃、酶解时间为5h,此时还原力为0.672,·OH清除率为68.43%。在最佳酶解条件下,两种酶解液的还原力与·OH清除率大小排列为:中性蛋白酶>内源酶,但两者相差不大,从经济能源的综合因素考虑,选用内源酶较合适。     

酶解对乳清蛋白抗原性影响的研究

研究了酶解对乳清蛋白抗原性的影响。选择了7种常见蛋白酶在同一水解模式下水解乳清蛋白，用竞争ELISA法测定水解物的残留抗原性，从而间接测定其过敏性变化。结果表明，酶解能有效降低乳蛋白抗原性，但水解物仍能与特异抗体反应，保留一部分抗原性。不同酶对乳清蛋白过敏原的影响不同，酶的特异性对乳清蛋白水解物的抗原性有较大的影响，碱性蛋白酶降低乳蛋白抗原性的效果最佳，对抗β-乳球蛋白（β-LG）和抗α-乳白蛋白（α-LA）抗体的抗原性分别降低了50．02％和99．72％。     

乳清蛋白酶解条件优化

用二次回归正交旋转组合设计对乳清蛋白酶解条件进行优化,建立酶法水解乳清蛋白的水解度与水解温度、水解时间、加酶量等三因素的正交回归模型。结果表明:在反应温度57℃、加酶量8 214U/g·蛋白条件下酶解114min,可获得中性蛋白酶水解乳清蛋白的最大水解度11.72%,与模型值基本相符。     

酶法从虾壳中提取甲壳素工艺优化的研究

利用蛋白酶水解虾壳,以水解率为指标,研究了各种条件对水解效果的影响。通过比较不同蛋白酶的水解效果,发现碱性蛋白酶的水解效果最好,最适的水解条件为:碱性蛋白酶添加量5000U/g,pH8.5,水解温度60℃,水解时间6h,水解pH为8.5,底物质量浓度2g/100mL,在此条件下,水解率达到78.3%。最后通过扫描电镜(SEM)观察了采用不同脱除蛋白方法处理后的甲壳素表面状态,酶法与碱法脱蛋白对甲壳素表面微观状态影响不同,酶法脱蛋白后甲壳素表面较光洁,证实本方法分离效果合理。      

利用虾头内源酶模拟胃肠道消化制备短肽的研究

本文利用虾头内源性蛋白酶构建模拟胃肠道的消化系统,酶解虾头蛋白制备短肽。结果表明,在模拟消化过程中,虾头蛋白释放量、水解度和水解产物低于3000 u分子量的组分呈现出两次显著增加趋势,显示虾头内源性类胃蛋白酶和类胰蛋白酶在模拟消化不同阶段起到的酶解作用。在模拟胃部消化条件下制备的产物其分子质量集中在2000~3000 u左右;在模拟肠道消化条件下制备的产物其分子量主要集中在1000 u以下。以上结果表明,利用虾头内源性蛋白酶模拟胃肠道消化可制备高附加值的短肽产物,实现虾头蛋白的高效回收。      

大豆异黄酮糖苷酶法水解工艺研究

通过正交试验及方差分析,得到大豆异黄酮糖苷酶法水解为大豆异黄酮苷元最佳工艺条件:在pH 6.0缓冲液体系中,酶解温度为38℃,酶解时间为90 min,加酶量为4.0 mg(4%),酶法水解率为82.55%。     

虾头酶解及反应型虾味香料的研究

本研究以中国对虾虾头为原料,通过确定及优化酶解条件,制备了虾头酶解液,再将酶解液浓缩到一定浓度,添加某些单体氨基酸及还原糖,发生美拉德反应,得到虾味浓郁、高仿真度的虾味香料。