米曲霉KFRI 888产中性蛋白酶、a-淀粉酶酶学性质的研究

通过对米曲霉KFRI888产中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶学特性进行了研究,实验发现,当温度高于40℃时,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着温度的升高而下降。而中性蛋白酶的最适作用pH为7.0～8.0,淀粉酶的最适作用pH为6.0～7.0,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着NaCl浓度的升高而下降,但a-淀粉酶耐盐性能比中性蛋白酶强。金属离子Ca2 、K 、Mg2 对a-淀粉酶有激活作用,且基本不影响蛋白酶的酶活。     

米曲霉KFRI 888产中性蛋白酶、a-淀粉酶酶学性质的研究

通过对米曲霉KFRI888产中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶学特性进行了研究,实验发现,当温度高于40℃时,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着温度的升高而下降。而中性蛋白酶的最适作用pH为7.0～8.0,淀粉酶的最适作用pH为6.0～7.0,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着NaCl浓度的升高而下降,但a-淀粉酶耐盐性能比中性蛋白酶强。金属离子Ca2+、K+、Mg2+对a-淀粉酶有激活作用,且基本不影响蛋白酶的酶活。      

米曲霉1228产α-淀粉酶特性的研究

对米曲霉1228产α-淀粉酶的特性及部分酶学性质进行了研究.结果表明,在发酵培养基中豆粕含量20%、NaCl浓度2%、初始pH6.6的条件下,采取3%的接种量,31 ℃培养108 h,此时的酶活最大.该酶的最适作用温度为55 ℃,最适pH为5.0,Ca2+对酶有激活作用,Fe2+、Fe3+、Mn2+、Ba2+和Cu2+对其有不同程度的抑制.     

米曲霉产中性蛋白酶条件的优化

以豆瓣酱中分离的米曲霉M1为出发菌株,研究了该米曲霉产蛋白酶的分布及最佳培养温度、时间、pH值等,优化了米曲霉最佳培养基的组成.结果表明,米曲霉产中性蛋白酶的能力最强.产中性蛋白酶适宜的培养条件为:麸皮∶水=1∶1 (w/w),最佳培养温度为30℃,培养时间为72h.培养基的组成为:酵母粉添加量2.0％,蛋白胨添加量0.2％,硝酸钾添加量0.1％,麦芽糖添加量0.1％,葡萄糖添加量0.1％,硫酸铵添加量2.0％.在此条件下培养,最高酶活达到12113.85U/g干基,比优化前提高22.98％.     

真菌α-淀粉酶产生菌的筛选及酶学特性的研究

通过对实验室中保藏4种真菌菌株进行液体发酵与固体发酵研究，筛选出最佳的α-淀粉酶产生菌米曲霉FSO179，固体发酵产酶水平为910．3u／g，液体产酶水平为656.6u／mL。该酶酶学特性研究表明：该酶作用的最适温度为55℃，50℃保温30min仍保留80％；最适作用pH为4．0，pH稳定范围为3.5-6.0之间。Fe^2＋、Ba^2＋、Cu^2＋、Mn^2＋、Fe^3＋金属离子对酶具较强抑制作用。而Ca^2＋对酶具有一定激活作用。     

茶多酚对米曲霉α-淀粉酶的回收及其特性的影响

研究绿茶中多酚类对米曲霉来源的α－淀粉酶特性的影响。从绿茶中提取茶多酚（TP），对米曲霉α－淀粉酶进行络合，沉淀及回收；以Bernfeild法测定α－淀粉酶与TP络合后，在不同温度，不同pH值，不同底物浓度的活性变化。结果表明：茶多酚对米曲霉α－淀粉酶无活性抑制作用，两者之间具有起混作用；0．3％的茶多酚浓度，获得最大α－淀粉酶活性回收率（约71％）；α－淀粉酶与TP络合后，阳适反应温度由30－50℃范围变为60－70℃；最适pH值由3．0－8．0变为5．0－6．0；在80℃下，活性变化总趋向与游离的α－淀粉酶；180min后能够保85％的酶活力，但是在前40min，酶活力下降较快；Lineweever-Burk图表明，络合后的α－淀粉酶Km由0．18％变为1．03％（可溶性淀粉底物浓度）。结论：米曲霉α－淀粉酶与TP络合后活性不受抑制并可通过这种络合回收，络合后的α－淀粉酶，最适反应温度及最达pH值变大，变窄，对底物的亲和力下降。     

高产蛋白酶和淀粉酶米曲霉菌株的选育

从J2、M2和Q2三株米曲霉菌中选择出总酶活力最高的J2作为出发菌株,通过紫外诱变后,得到突变菌株Y3,其酸性蛋白酶活力由出发菌株的313 U/g提高至986 U/g,提高了215％,碱性蛋白酶活力由出发菌株的6936 U/g提高至10385 U/g,提高了49.7％,中性蛋白酶活力由出发菌株的5675 U/g提高至9034 U/g,提高了59.2％,且淀粉酶活力也由出发菌株的284 U/g提高至412U/g,提高了45.1％.经传代实验表明,突变菌株Y3的遗传特性稳定.     

米曲霉Y6产中性蛋白酶和内切葡聚糖酶的研究

以提高中性蛋白酶和内切葡聚糖酶酶活为目的,优化了米曲霉Y6的制曲工艺。在单因素的试验基础上,采用正交试验优化的米曲霉Y6中性蛋白酶的最佳制曲工艺参数为温度30℃,接种量1.0×107个孢子/g干基,培养时间42h,含水量80%,其酶活达到3637U/g;内切葡聚糖酶的最佳制曲工艺参数为温度为30℃,接种量0.25×107个孢子/g干基,培养时间48h,含水量100%,其酶活达到810U/g。     

米曲霉M3中性蛋白酶的提取及酶学特性研究

采用硫酸铵沉降法分离纯化米曲霉M3所产中性蛋白酶，并对其酶学性质进行了研究。结果表明：用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达159781．1μ／g；该酶的最适反应温度为50℃，最适作用pH值为7．5；该酶在30～40℃时具有良好的热稳定性，在pH值6．5—7．5的条件下酶是稳定的；NH4^1 ，K^1 对该蛋白酶有明显的激活作用，Fe^3 则对其表现出强烈的抑制作用。     

米曲霉今野菌株所产α-淀粉酶性质的研究

采用硫酸铵盐析 ,再透析提纯得到米曲霉今野菌株的α -淀粉酶 ;该酶能耐受 5 0～ 65℃的高温 ,在 65℃处理 2小时后剩余酶活力为 85 % ;采用正交实验得其在反应过程中所受因素影响大小为酶液浓度 >底物浓度 >pH值 >温度 ,酶反应的最适pH为 6 0 ,最适温度为 60℃ ;以可溶性淀粉为底物时 ,该α -淀粉酶的Km值为 5 8× 10 - 1mol/L ;当NaCl浓度超过 30 %时 ,对酶活有明显的抑制作用 ,剩余酶活力只有 15 %。当NaCl浓度在 18%以下时 ,剩余酶活力在 90 %以上     

米曲霉高产生淀粉酶菌株的诱变选育

以米曲霉y18为出发菌株,通过紫外诱变(UV)和硫酸二乙酯(DES)2次诱变,获得产生淀粉酶活力酶较高的菌株y18-U-36-D-40,酶活达到434.5U/mL,比出发菌株提高153.35%,菌株经过7次传代,酶活稳定。     

米曲霉固态发酵麻疯树籽饼产中性蛋白酶条件的研究

以实验室筛选出的米曲霉(Aspergillus oryzae)Asp-1为菌种,麻疯树籽饼为发酵主料,采用固态发酵法生产中性蛋白酶.考察了固态发酵培养基液固比、初始pH、接种量等发酵条件,以及麻疯树籽饼中添加麸皮、碳源、氮源对该菌株产酶能力的影响.经单因素和正交实验获得最佳发酵条件为:培养基液固比1:1,初始pH 6,接种量每10 g培养基含有1×108个孢子,培养基中麸皮添加量10%、葡萄糖添加量0.5%、蛋白胨添加量1%.最佳条件下发酵2 d酶活可达3 759.8 U/g.     

米曲霉蛋白酶动力学特性的研究

研究了在不同底物浓度、温度和pH下米曲霉蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的动力学特性。在反应时间为10min时,最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为9。实验表明米曲霉蛋白酶水解酪蛋白生成酪氨酸的反应符合米氏方程,根据实验数据回归得到温度为40℃时的速度方程为r=0.243CS/0.0282+CS,反应速度与氢离子浓度的关系为r=lgCH++3.14013/0.19759+0.05484(lgCH++3.14013)+(lgCH++3.14013)2。该蛋白酶在50℃下的失活规律符合双指数模型,相对酶活力与时间的关系为a=0.82531e(-0.02169t)+0.17469e(-0.41914t)。在4～50℃的范围内,蛋白酶水解反应的活化能Ea为30.67kJ。还研究了不同化学组分对蛋白酶活力的影响,发现10mmol/L的H3BO3和Mg2+对该蛋白酶有一定的激活作用,而EDTA、SDS、Zn2+、Mn2+和Sn2+对蛋白酶有明显的抑制作用,10mmol/L的H2O2对该蛋白酶的抑制作用不明显。     

Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮

介绍了Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮的具体做法。采用麸皮保藏法可以使Xi-3米曲霉保藏18年之久且菌种优良性状不变；行之有效的复壮措施，提高了保藏菌株的优良性状和生产性能，为种质资源的可持续发展作出了贡献。     

豆酱种曲培养过程中米曲霉Y29与3.042产酶特性比较

将米曲霉Y29菌株和沪酿3.042菌株在豆酱制种曲过程中产生的蛋白酶和淀粉酶的活性进行了比较,结果表明:米曲霉Y29菌株的酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力的峰值分别比米曲霉沪酿3.042菌株高了45.55%,15.13%,9.86%,而α-淀粉酶和糖化酶活力二者无显著差异;并且两菌株蛋白酶和淀粉酶酶活高峰出现的时间也一致。     

不同酱油米曲霉制曲过程中的酶活变化分析

米曲霉是酱油酿造过程中的关键微生物,其蛋白酶活的高低及其它酶系的健全程度直接影响到酱油产率及品质的高低。研究对国内外三种优良酱油生产米曲霉菌株的制曲性能进行研究,分析了中性蛋白酶、酸性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶等重要酶系的酶活力变化趋势。结果表明:沪酿3.042的中性蛋白酶活高于RB-A,RB-C;而RB-C在其它酶系方面则具有更高的活力。其中,沪酿3.042、米曲霉RB-A在制曲39h时酶活力最高,米曲霉RB-C在制曲42h时酶活力最高。研究对米曲霉制曲时间的控制具有一定的指导意义。     

米曲霉M3产蛋白酶特性研究

对比了本课题组从自然发酵的豆酱中分离的三株蛋白酶活力较高的菌株，对其中蛋白酶活力最高的菌株M3的菌丝和孢子形态进行了观察，初步判断为米曲霉，并对其培养条件进行了探索。结果表明：M3在培养基组成为麸皮：葡萄糖：水=9：1：5的条件下，接种3mL孢子菌悬液，28℃培养72h时酶活最高。     

真菌α-淀粉酶酶学性质研究

真菌α-淀粉酶是淀粉生产麦芽了对比研究.结果表明:两种酶最佳试验稀释倍数为1000;最适pH值均为5.5;在50℃以下时热稳定性较好,高于60℃时酶活损失较多;Ca2 浓度在7mmol/L时对两种酶都有激活作用.     

产中性蛋白酶种曲培养基的优化及酶学特性研究

以中性蛋白酶活力为检验指标,采用响应面法对米曲霉产中性蛋白酶的种曲培养基进行优化,确定其最佳配方组成为：面粉用量2．24g,花生粕用量8．46g,氯化钙用量0．028g,种曲中性蛋白酶活力高达15559．40U／g。经研究纯化后中性蛋白酶酶学特性,发现中性蛋白酶的最适pH为7．0,在pH5．0-7．0范围内具有良好的稳定性;最适作用温度为50℃,在40-55℃条件下能保持较高的酶活力;试验金属离子对蛋白酶没有显著的激活作用,Ba^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋和Cu^2＋具有显著的抑制作用。     

酿造酱油米曲霉产中性蛋白酶提取与酶学性质研究

对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶的提取及部分性质进行了研究.结果表明硫酸铵分级沉淀的饱和浓度范围为40%～80%;该中性蛋白酶的最适作用温度为 60 ℃,最适pH 值为 7.0.40 ℃下酶稳定性较好,60℃下处理 20 min,粗酶中几乎检测不到酶活力;中性蛋白酶pH 稳定范围为 6.0～8.0.Km值为2.84 mg/mL;最大反应速度Vmax为0.32 mg/(min·mL).Mg2 对酶活有激活作用,Cu2 、Fe3 、Zn2 、Mn2 不同程度抑制酶活性,其中Cu2 、Fe3 强烈抑制酶活性.