抗独特型抗体的研究进展

抗独特型抗体是针对抗体可变区的抗原决定簇（独特型）产生的特异性抗体，其中Ab2β是初始抗原在体内的“内影像”（intemal image），由于可模拟初始抗原而广泛应用于疫苗研究、肿瘤免疫、移植耐受、自身免疫病、食品安全等方面。对近年来抗独特型抗体的研究进展进行综述。     

黄曲霉毒素B_1标准替代物的制备及其在花生样品检测中的应用

以抗黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体的F（ab＇）2片段为抗原免疫兔子,得到AFB1抗独特型抗体。经过酶联免疫吸附法（ELISA）条件的优化,建立AFB1抗独特型抗体最佳竞争抑制曲线。该曲线与AFB1竞争抑制曲线相比较可知,AFB1抗独特型抗体与AFB1之间存在指数增长关系,且相关性系数R为0.999 8。以AFB1抗独特型抗体浓度与其相应的抑制率作标准曲线,ELISA法测定花生中AFB1添加回收率,范围在90.4%～100.2%之间。综上,AFB1抗独特型抗体可以作为AFB1无毒替代标准品。     

抗玉米赤霉烯酮单抗独特型抗体制备与鉴定

目的:研制抗玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)单抗独特型抗体并鉴定其特性,为建立ZEN无毒检测方法提供理论依据。方法:在研制抗ZEN单抗的基础上,将IgG与KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备抗ZEN单抗独特型抗体;同时将经Protein G纯化的单抗用胃蛋白酶酶切获取Fab片段,作为检测原,并采用间接ELISA和间接竞争ELISA对抗独特型抗体特性进行鉴定。结果:所研制的抗独特型抗体能够与ZEN竞争结合ZEN单抗,与ZEN之间存在"内影像"关系。结论:成功研制抗ZEN单抗独特型抗体,可以替代ZEN标准品应用于ELISA检测。     

抗黄曲霉毒素B_1单抗独特型抗体的制备

目的研制黄曲霉毒素B1标准品的替代品并应用于酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法在研制了抗黄曲霉毒素B1单抗的基础上,将抗体用无花果蛋白酶进行酶切,制备出抗黄曲霉毒素B1单抗F(ab’)2片段,并以F(ab’)2片段作为免疫原免疫日本大耳白兔,制备出抗黄曲霉毒素B1单抗独特型抗体,并对该独特型抗体进行鉴定。结果该独特型抗体是Ab2β型,与黄曲霉毒素B1存在内影像关系。结论该抗体可以替代黄曲霉毒素B1标准品应用于ELISA检测。     

抗T-2毒素单抗独特型抗体的制备及应用研究

目的研制T-2毒素标准品的替代品并应用于酶联免疫吸附试验（EusA）。方法在研制了抗T-2毒素单抗的基础上，将抗体用无花果蛋白酶进行酶切，制备抗T-2毒素单抗F（ab’）：片段，并以F（ab＇）：片段作为免疫原免疫日本大耳白兔，研制出抗T-2毒素单抗独特型抗体。结果所研制的抗独特型抗体经过鉴定，是Ab2B型，与T-2毒素存在内影像关系。结论该抗体可以替代T-2毒素标准品应用于ELISA检测。     

绿色无毒黄曲霉毒素B_1免疫检测方法

建立了一种基于抗独特型抗体的绿色无毒的ELISA方法,并用于检测面粉中黄曲霉毒素B1。通过酶解2种抗黄曲霉毒素小鼠单克隆抗体(11A9和1G3)制备F(ab’)2片段,并将其免疫新西兰大白兔制备抗独特型抗体。最终得到两种抗独特型抗体,并对抗独特型抗体和AFB1进行相关性分析。通过实际样品添加回收,其批内回收率为115.60%~121.88%,变异系数在5%以内;而批间回收率为111.89%~126.98%,变异系数低于8%。分析结果准确可靠,表明此无毒绿色ELISA是一种安全可靠的AFB1分析方法。     

抗大田软海绵酸单抗独特型抗体的制备及鉴定

目的:研制大田软海绵酸(okadaic acid,OA)单抗的独特型抗体并鉴定其模拟抗原特性,为建立无毒检测提供借鉴.方法:利用小鼠腹水法大量制备抗OA单抗,经辛酸饱和硫酸铵法纯化后用胃蛋白酶酶切制备F(ab')<,2>片段,免疫日本大耳白兔,取其血清,琼脂扩散法检测血清抗体与抗OA单抗反应活性,ELISA方法鉴定血清...     

真菌毒素免疫分析中新型检测元件的研究进展

真菌毒素免疫分析是基于抗体与真菌毒素间的相互作用 . 虽然具有高亲和力及特异性的抗体制备技术已非常成熟,但代替传统抗体或真菌毒素的新型检测元件越来越受到人们的关注.这些元件分为以重组抗体片段为代表的重组类检测元件,如单链抗体,以化学法人工合成的合成类检测元件,如分子印迹聚合物,及其他用于取代真菌毒素标准品的检测元件,如抗独特型抗体.本文重点综述了新型真菌毒素检测元件的研究进展,及其在真菌毒素免疫分析中的应用前景.     

基于噬菌体展示纳米抗体的绿色免疫PCR检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇

目的：在获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）抗独特型纳米抗体的前期基础上,将纳米抗体作为酶标抗原的替代物,应用于荧光定量免疫聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）体系,实现DON的高灵敏、绿色免疫分析。方法：将特异性结合DON抗体的噬菌体展示纳米抗体（P-28）作为竞争抗原,以编码P-28纳米抗体的DNA为靶标,设计特异性PCR扩增引物,优化荧光定量免疫PCR退火温度、抗DON抗体浓度、P-28投入量等参数,建立基于间接竞争模式的荧光定量免疫PCR检测DON的方法。结果：本研究建立的荧光定量免疫PCR方法线性检测范围为0.1～1 000 ng/mL,IC50值为（3.96±2.21）ng/mL,最低检出限为0.048 ng/mL,并与其他真菌毒素无交叉反应。结论：该方法直接使用噬菌体展示纳米抗体作为竞争抗原的替代物,应用于免疫PCR体系,避免了使用传统的化学合成酶标抗原所带来的环境污染、操作毒性等缺陷,并具有良好的特异性及灵敏度。     

“多宝鱼”抗体疫苗有望面世

能够有效预防包括“多宝鱼”在内的“海鱼细菌病多联抗独特型抗体疫苗”成果转化工作取得实质性进展。由解放军第四军医大学和北京卓越海洋生物科技有限公司共同研发的针对牙鲆鱼的“海鱼细菌病多联独特型抗体疫苗”目前正在申请国家农业部的《新兽药注册证书》。     

抗黄曲霉毒素B1独特型纳米抗体的表达及复性

目的快速制备大量具有生物活性的独特型纳米抗体F7。方法构建pET22b-F7原核表达载体,转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,对诱导温度、诱导剂浓度和诱导时间进行优化。结果独特型纳米抗体F7表达量有所增加但主要以包涵体形式存在。经过包涵体的溶解、复性获得了具有生物活性的抗AFB1独特型纳米抗体,ELISA证实复性后的蛋白依然存在对鼠源AFB1抗体的结合特性。结论为后续抗体的性质研究和改造奠定了基础。     

抗黄曲霉毒素B1独特型纳米抗体的表达及复性

目的 快速制备大量具有生物活性的独特型纳米抗体F7。方法 构建pET22b-F7原核表达载体, 转化至大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中进行诱导表达, 对诱导温度、诱导剂浓度和诱导时间进行优化。结果 独特型纳米抗体F7表达量有所增加但主要以包涵体形式存在。经过包涵体的溶解、复性获得了具有生物活性的抗AFB1独特型纳米抗体, ELISA证实复性后的蛋白依然存在对鼠源AFB1抗体的结合特性。结论 为后续抗体的性质研究和改造奠定了基础。     

小分子免疫分析技术及其研究进展

小分子物质抗原表位单一,不能同时结合两个抗体,限制了夹心法在小分子残留检测中的应用,因此小分子免疫学分析方法主要采用竞争模式。近年来,随着生物合成全抗原、纳米抗体、抗独特型抗体等生物识别元件的成功应用,开拓了小分子免疫分析技术的新领域。本文从生物识别元件的角度综述了近几年小分子免疫学检测方法的研究进展,并对小分子免疫分析的发展趋势进行展望。     

副溶血弧菌多克隆抗体的制备及其特性分析

确定了副溶血弧菌多克隆抗体的制备方法:用体积分数0.05%甲醛于30℃灭活副溶血弧菌4 h制备抗原,并将此抗原分多次,以不同剂量免疫新西兰大白兔获得特异性多克隆抗体,以山羊抗兔IgG-HRP作为酶标二抗,通过间接ELISA法测定其多克隆抗体的效价、敏感性和特异性。结果表明:在免疫的第5周产生大量高效价抗体,效价最高可达1.6×105;此多克隆抗体对副溶血弧菌检测灵敏度为1×105CFU/mL;交叉反应和阻断试验结果显示,此多克隆抗体具有很强的特异性。     

抗龋齿蛋黄抗体的制备及功能性研究

本论文系统地研究了抗龋齿蛋黄抗体的制备方法,并对其功能性进行了实验。实验结果显示经变异链球菌免疫后可得到高活性蛋黄抗体。体外模拟实验表明经变异链球菌免疫的蛋黄抗体确实具有抗牙菌斑形成的能力,从而具备防龋齿的功效。     

副溶血弧菌间接ELISA快速检测法的建立

以副溶血弧菌1.2164作为抗原,免疫新西兰兔,获得效价为1.6×105的多克隆抗体;以此多克隆抗体作为一抗,山羊抗兔IgG-HRP作为酶标二抗,建立副溶血弧菌的间接ELISA快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最佳工作浓度分别为107cfu·mL-1和1∶4000;酶标二抗最适工作浓度为1∶1000。将该方法标准化后进行检测实验,交叉实验表明,此多克隆抗体与其它菌株交叉反应结果为阴性;阻断实验表明,其具有较高的特异性,阻断率高达86.53%。结果表明:此法在6h内即可检测出浓度为104cfu·mL-的副溶血弧菌,且与其它菌株均无交叉反应。     

脱氧雪腐镰刀烯醇（呕吐毒素）酶标抗原的合成及免疫抗体的制备

利用琥珀酸酐法合成了脱氧雪腐镰刀烯醇-琥珀酸酐衍生物(3-HS-DON),并用DCC法将该衍生物与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到的结合物(DON-HS-BSA)作为免疫抗原免疫新西兰大白兔,获得效价为1∶10000的特异性抗脱氧雪腐镰刀烯醇(DON)的抗体。同时,用EDC法将3-HS-DON与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得到酶标抗原(DON-HS-HRP)。通过圆二色光谱(CD)看到偶联后蛋白二级结构发生了改变,酶活稍有下降;用分光光度法测得酶标抗原酶活损失<5%,偶联物中DON与HRP的结合比为5.29。说明:该酶偶联物及制备的抗体可作为酶联免疫吸附法(ELISA)或免疫传感器法测试脱氧雪腐镰刀烯醇时所需的酶标抗原及抗体。     

灵芝酸A多克隆抗体制备及酶联免疫吸附测定法的建立

以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示：多克隆抗体中存在靶向偶联抗原3个区域的独特型抗体,总效价为1∶78 125,其中抗灵芝酸A特异性抗体效价为1∶3 125。间接竞争酶联免疫吸附测定法的灵芝酸A检出限为0.3μg/L,半数抑制浓度为4.0μg/L,线性范围在0.6～27.3μg/L之间。样品测定批间变异系数低于10%,样品加标回收率在82.9%～118.6%之间,对22份灵芝粉剂产品的测定结果显示不同品牌产品中灵芝酸A含量的差异极显著,该法测定结果与高效液相色谱法的测定结果相比,相关系数为0.972。结果表明,间接竞争酶联免疫吸附法测定灵芝酸A可行,该方法能够为灵芝保健品市场中相关产品的质量监控提供一种辅助方案。     

甲基苯丙胺人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用化学法合成甲基苯丙胺人工抗原,将此抗原免疫新西兰大白兔制备抗甲基苯丙胺多克隆抗体,利用EDC法将甲基苯丙胺人工抗原与蛋白质载体BSA偶联,经蛋白质电泳以及紫外扫描检测,证明甲基苯丙胺人工抗原合成成功.用间接酶联免疫检测法检测,证明制备得到了高效价的甲基苯丙胺多克隆抗体血清,且与甲基苯丙胺人工抗原具有高特异性反应,可用于甲基苯丙胺免疫学检测方法的研究。     

隐性孔雀石绿多克隆抗体的制备及鉴定

研究制备孔雀石绿(MG)代谢物隐性孔雀石绿(LMG)多克隆抗体进而间接鉴定鱼体中孔雀石绿的残留。首先利用化学方法合成含羧基的隐性孔雀石绿衍生物(CLMG),然后采用碳化二亚胺法偶联牛血清白蛋白(BSA)合成免疫抗原隐性孔雀石绿-BSA,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗隐性孔雀石绿多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附实验(iELISA)测定抗血清中抗隐性孔雀石绿多克隆抗体效价。结果表明：抗隐性孔雀石绿的抗体效价为1: 32000,可用于隐性孔雀石绿的免疫学检测。