高效毛细管电泳法检测橘皮中橙皮苷的含量

应用毛细管电泳法对橘皮中橙皮苷的含量进行了检测,研究了缓冲液的种类、缓冲液的浓度、缓冲液的pH值以及分离电压等对橙皮苷测定的影响。在pH8.0的150 mmol/L硼砂缓冲液、12 kV分离电压下,橙皮苷的测定效果最佳。毛细管电泳法测定橙皮苷的最低检测限为1.25μg/mL,加样回收率是99.75%,相对标准误差是1.98%。     

毛细管电泳法测定发酵液中L-色氨酸的含量

应用高效毛细管电泳法对发酵液中L-色氨酸的含量进行了测定,研究了检测波长、缓冲液pH值、缓冲液浓度、分离电压对L-色氨酸测定的影响。在pH9.5、40 mmol/L硼砂缓冲液、210 nm、25 kV下,L-色氨酸的测定最佳。毛细管电泳仪测定L-色氨酸的检测限为1.389μmol/L,相对标准误差RSD为3.308%,平均加标回收率为101.26%。且高效毛细管电泳法成功用于测定发酵液中的L-色氨酸。预计毛细管电泳法将应用于更广更深的领域。     

毛细管电泳法测定葡萄酒中有机酸含量

运用毛细管区带电泳法直接测定了葡萄酒中酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、乙酸、富马酸、草酸8种有机酸,并研究了缓冲液种类、缓冲液浓度、pH值、表面活性剂、电泳电压、电泳温度对分离度的影响。方法线性范围较宽,各有机酸线性相关系数在0.9990～0.9998之间,有机酸迁移时间及峰面积的RSD分别为0.68%～1.02%及3.68%～5.41%,方法回收率为91.9%～116.9%。方法简便、快速、准确,可对葡萄酒酿造过程快速监控,并对酒的品质进行监测。     

基于蜂蜜中氨基酸的毛细管电泳指纹图谱构建

通过以细菌纤维素(Bacterial cellulose,BC)为流动相添加剂,提高毛细管电泳的分离能力,构建基于蜂蜜中氨基酸的指纹图谱。系统考察了电泳缓冲液种类、离子强度、pH值、分离电压及BC添加量对氨基酸分离效果的影响。结果表明:以30 mmol/L,p H 9.8硼砂-磷酸盐缓冲液为电泳缓冲液,BC添加量为0.5%,25 kV作为分离电压时,17种常见氨基酸的异硫氰酸荧光素的衍生物能在25 min内实现基线分离。最优电泳条件下,17种氨基酸的异硫氰酸荧光素的衍生物在相应浓度范围内线性关系良好,相关系数大于0.993,检测限为2.5×10~(-4)μmol/L~30.0×10~(-4)μmol/L。精密度试验表明:17种氨基酸衍生物峰面积相对标准偏差(Relative standard deviations,RSDs)(n=11)分别为1.84%~5.50%(日间,n=5)和0.94%~3.10%(日内,n=11)。洋槐蜜中17种氨基酸添加回收率在81.10%~96.15%,RSDs(n=3)小于8.22%。     

利用Native制备电泳分离来源于Rhizopus microsporus var. chinensis的葡萄糖淀粉酶同工酶

将Native制备电泳应用于Rhizopus microsporus var. chinensis中2个葡萄糖淀粉酶同工酶的分离,考察了电泳缓冲系统、凝胶浓度和凝胶长度对分离效果的影响。结果表明:先使用Ornstein-Davis系统分离同工酶,再使用0.02mol/L,pH6.2的NaAc.CH3COOH缓冲液洗脱,在长度为6cm的7%的Native电泳胶上,2个性质相近仅电泳迁移率略有差别的同工酶能有效分离。分离回收的蛋白质可保持其活力,便于后续研究。     

高效毛细管电泳同时分离多种酚类物质

建立了高效毛细管电泳同时分离测定芦丁、槲皮素、绿原酸、咖啡酸、没食子酸和原儿茶酸6种酚类物质的分析方法。考察了缓冲液种类、离子浓度和pH、分离电压、运行温度等电泳参数,确立了最佳的电泳条件:缓冲液为20 mmol/L磷酸二氢钠-20 mmol/L硼砂,pH7.5,分离电压为20 kV,运行温度为30℃,紫外检测波长214 nm。结果表明,6种物质在12 m in内得到完全分离,且各组分质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,R2为0.998 7~0.987 4。方法精密度试验中,迁移时间的RSD为0.280%~0.425%,峰面积的RDS为5.228%~8.506%,回收率为85.11%~101.98%。该法快速、简便、准确,具有较高的灵敏度。     

毛云芝菌固体发酵产漆酶的分离纯化及酶学性质

作者对毛云芝菌利用桑叶和麸皮固体发酵所产漆酶进行了分离纯化,并研究了纯化后漆酶的酶学性质。将毛云芝菌固体发酵漆酶粗提液通过离心、过滤、大孔树脂脱色、硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose fast flow层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,结果得到电泳纯的漆酶,纯化倍数15.53,酶活回收率51.21%。用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量62 600;该酶反应的最适温度为50℃,在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中最适pH值为4.0,在醋酸缓冲液中最适pH值3.0;氧化ABTS的Km为0.093 mmol/L,对邻苯二酚的Km为3.71 mmol/L。     

胶束电动毛细管电泳法分离检测五种β-内酰胺类抗生素

采用毛细管电泳法,基于胶束电动模式与有机添加剂协同作用,分离检测5种β-内酰胺类抗生素。考察运行缓冲液的构成及各组分浓度、pH值、分离电压等因素对电泳分离的影响。优化后的电泳运行缓冲液包含20mmol/L Na2HPO4-20mmol/L NaH2PO4 (pH8.5),20mmol/L十二烷基硫酸钠和体积分数25%甲醇。在18kV电压下5种抗生素在15min内达到基线分离。各组分线性关系良好,检出限5.3～8.1mg/L,进样精密度RSD 3.8%～5.5%。研究表明,对分子结构特别相近的抗生素,通过表面活性剂胶束准固定相与有机添加剂协同作用来改善分离效果是可行的。     

苦丁茶中酚酸类化合物的HPCE分离测定

通过建立了高效毛细管电泳法同时分离测定苦丁茶中山奈酸、芦丁、没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸、没食子酸、原儿茶酸等7种酚酸类物质含量的方法。对缓冲液离子浓度和pH、分离电压和毛细管温度等电泳分离条件进行了优化,结果发现在柱温25℃、电压20kV、20mmol/L pH7.5磷酸二氢钾-硼砂缓冲液的电泳条件下,可在13min内实现了7种酚酸类物质的分离检测。本方法具有较高的灵敏度,呈现较好的线性关系,r为0.9982~0.9996,迁移时间重现性为0.1557%~0.1664%,峰面积重现性为1.080%~3.466%,回收率为80.14%~93.24%。本研究采用建立好的方法测定了不同产区苦丁茶中7种酚酸类化合物的含量。     

胶束电动毛细管电泳法分离检测5种β-内酰胺类抗生素

采用毛细管电泳法,基于胶束电动模式与有机添加剂协同作用,分离检测5种β-内酰胺类抗生素。考察运行缓冲液的构成及各组分浓度、pH值、分离电压等因素对电泳分离的影响。优化后的电泳运行缓冲液包含20mmol/L Na2HPO4-20mmol/L NaH2PO4(pH8.5),20mmol/L十二烷基硫酸钠和体积分数25%甲醇。在18kV电压下5种抗生素在15min内达到基线分离。各组分线性关系良好,检出限5.3～8.1mg/L,进样精密度RSD 3.8%～5.5%。研究表明,对分子结构特别相近的抗生素,通过表面活性剂胶束准固定相与有机添加剂协同作用来改善分离效果是可行的。     

反向高效液相色谱测定发酵液中的聚苹果酸

采用高效液相色谱柱AlltimaTMC18(4.6 mm×150 mm,4μm)上定量测定发酵生产的聚苹果酸,流动相为乙腈和0.025 mol/L磷酸二氢钾混合溶液(磷酸调pH 2.5)(V:V=5:95),流速1.0 mL/min,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量5μL。发酵液经离心除菌体、纯沉除多糖、水解处理后进样,可以将其中的L-苹果酸完全分离定量。采用液相方法的回收率为98.70%~100.65%,RSD为0.4~1.11%。采用试剂盒的方法的回收率为96.7~97.23%,RSD为0.57~1.19%。可见,液相的精确度和试剂盒相差不大。但液相的价格相对比试剂盒要便宜很多,说明该法是测定发酵液中聚苹果酸的一种很有效的方法。     

啤酒中有机酸含量的RP-HPLC检测条件优化及其酿造过程中动态分析

该研究对反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定啤酒中有机酸含量的方法进行优化,最终确定了RP-HPLC法测定啤酒中草酸、乳酸、酒石酸、乙酸、苹果酸、α-酮戊二酸、抗坏血酸、柠檬酸、琥珀酸9种有机酸的检测条件,并结合发酵机理对啤酒酿造过程中的有机酸含量动态变化进行分析。结果表明,RP-HPLC优化条件为：检测波长215 nm、流动相缓冲液0.10 mol/L KH2PO4、pH值3.0、流速0.6 mL/min。有机酸在质量浓度0.2～400.0 mg/L范围内线性关系良好（R2均＞0.99）,加标回收率79.3%～110.0%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为0.3%～11.5%,表明该方法精密度高、准确性良好。在啤酒酿造过程中有机酸总量及乙酸、琥珀酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、α-酮戊二酸含量呈现先增长后平稳的趋势,草酸、抗坏血酸、酒石酸含量变化相对平稳。     

采用离子排斥色谱法分析发酵液中的琥珀酸等代谢产物

采用离子排斥液相色谱法对琥珀酸及发酵液中常见的代谢产物进行了分析。以高交联度磺化苯乙烯-二乙烯基苯共聚物多孔微球作为固定相的Aminex HPX-87H离子色谱柱为分析柱,利用示差折光检测器对9种有机酸(琥珀酸、柠檬酸、α-酮戊二酸、苹果酸、丙酮酸、乳酸、乙酸、甲酸和丙酸)、葡萄糖及乙醇进行了较成功的分离,并应用于琥珀酸放线杆菌发酵液的产品分析。通过色谱条件优化,选定了55℃柱温和10 mmol/LH2SO4作为流动相。发酵液样品中有机酸、葡萄糖和乙醇的平均回收率在96.0%-104.8%,精密度偏差在0.4%-3.5%范围内。     

不同发酵度低浓啤酒中有机酸与缓冲性的研究

采用下面发酵法酿造了4种7°P啤酒(发酵度分别为57.6%、63.4%、67.9%、72.5%),使用RP-HPLC检测到啤酒中9种主要有机酸,并测定了成品啤酒的缓冲容量。使用SAS9.0统计软件对成品啤酒中有机酸与缓冲性之间的相关性进行了分析,结果显示,α-酮戊二酸、乳酸与缓冲性显著相关,相关系数分别为-0.962 80、-0.985 27(P<0.05);富马酸、琥珀酸与缓冲性一般相关,相关系数分别为0.90269、0.92811(P<0.10)。     

离子排斥色谱-双检测器法同时测定果蔬中的糖、有机酸和维生素C

本文建立了离子排斥色谱-双检测器同时测定农产品中糖类、有机酸和维生素C含量的快速分析方法。选用离子排斥色谱串联DAD和RID双检测器法,以菠菜和西红柿为试样,0.05%硫酸溶液为提取剂,均质提取2 min,同时测定农产品中糖类、有机酸和维生素C含量。对比了不同提取剂、不同提取方式的提取效果,探究了流动相中不同硫酸浓度对有机酸分离效果的影响。结果表明:均质提取法是最为简单高效的提取方法;离子排斥色谱法精密度高(RSD 0.62~1.63%),重复性好(变异系数0.77~8.54%),回收率在87.8-109.8%,测定结果优于国标法。     

永春老醋耐酸微生物分离纯化及葡萄醋发酵应用

该研究对永春老醋发酵过程样品中主要微生物进行了分离纯化,从中筛选出3株具有较高耐酸性菌株YCA-6、YCL-5和YCL-6,经16S rDNA序列分析发现分别属于巴氏醋杆菌（Acetobacter pastemianu）、瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）、干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）。利用乳酸菌和醋酸菌混合微生物菌株进行葡萄醋的静置液态发酵,利用Box-Behnken试验对其添加比例进行了优化,并对其有机酸组成进行了分析。结果表明,菌株YCA-6、YCL-5和YCL-6接种量分别为3.0%、5.0%和5.0%的条件下混合进行葡萄醋静置发酵获得的葡萄醋总酸（以醋酸计）约为6.5 g/100 mL。     

Using sludge fermentation liquid to improve wastewater short-cut nitrification-denitrification and denitrifying phosphorus removal via nitrite

Wastewater biological nutrient removal (BNR) by short-cut nitrification-denitrification (SCND) and denitrifying phosphorus removal via nitrite (DPRN) has several advantages, such as organic carbon source saving. In this paper, a new method, i.e., by using waste activated sludge alkaline fermentation liquid as BNR carbon source, for simultaneously improving SCND and DPRN was reported. First, the performance of SCND and DPRN with sludge fermentation liquid as carbon source was compared with acetic acid, which was commonly used in literatures. Sludge fermentation liquid showed much higher nitrite accumulation during aerobic nitrification than acetic acid (81.8% versus 40.9%), and the former had significant anoxic denitrification and phosphorus uptake. The soluble phosphorus and total nitrogen removal efficiencies with sludge fermentation liquid were much higher than with acetic acid (97.6% against 73.4% and 98.7% versus 79.2%). Then the mechanisms for sludge fermentation liquid showed higher SCND and DPRN than acetic acid were investigated from the aspects of wastewater composition, microorganisms assayed by 16S rRNA gene clone library, and fluorescence in situ hybridization. More NO(2)(-)-N accumulated by the use of sludge fermentation liquid was attributed to be more humic acids in the influent, which inhibited nitrite oxidizing bacteria (NOB) more serious than ammonia oxidizing bacteria (AOB), and more AOB but less NOB were observed in the BNR system. The reasons for sludge fermentation liquid BNR system exhibiting greater short-cut denitrifying phosphorus removal were that there were less glycogen accumulating organisms and more phosphorus accumulating organisms and anoxic denitrifying phosphorus removal bacteria with higher nitrite reductase activity.     

红糖醋不同发酵阶段产物有机酸变化及抗氧化活性研究

以红糖为原料,采用液态深层发酵法酿造红糖醋,分析红糖醋不同发酵阶段产物有机酸组成,研究总多酚、总黄酮含量及抗 氧化活性的变化。 结果表明,红糖醋、红糖酒醪及红糖液分别检出10种、9种及8种有机酸,主要为乙酸、乳酸、甲酸、抗坏血酸、琥珀酸、 苹果酸、柠檬酸、草酸。 红糖液中琥珀酸和红糖醋中乙酸含量最高,分别为4 971.09 mg/L和28 273.35 mg/L。 在发酵过程中,红糖液中 总多酚和总黄酮含量由0.94 mg/mL和0.50 mg/mL降至红糖醋中0.87 mg/mL和0.17 mg/mL。 不同发酵阶段产物抗氧化能力的顺序为红 糖液＞红糖酒醪＞红糖醋。 总多酚和总黄酮含量与DPPH自由基清除能力有一定相关性,相关系数分别为0.855 5和0.883 0,与总还原力 有较强的相关性,相关系数分别为0.9078和0.9093。     

红茶菌发酵罗城毛葡萄13种有机酸的同时检测

为解决目前尚无对红茶菌发酵液中多种有机酸同时检测方法的问题,本文利用液相色谱建立红茶菌发酵液13种有机酸的准确定量方法,并对发酵过程中的典型有机酸变化进行跟踪。优化后的色谱条件:Atlanis T3色谱柱,流动相为0.02 mol/L KH₂PO₄(pH=2.6),流速0.4 mL/min,等度洗脱,柱温30 ℃、检测波长210 nm。此色谱条件下,葡萄糖醛酸和草酸完全重合(只能用葡萄糖醛酸标准曲线相对定量),但其它11种有机酸均能有效分离。定量方法线性范围较宽,R2>0.990,定量限0.080~4.789 mg/L,加标回收率92.68%~107.35%,相对标准偏差<5%,葡萄糖酸、乙酸、苹果酸在发酵过程中一直增加,而其它酸类呈先升后降趋势。葡萄糖酸、乙酸是主要的有机酸,在17 d的发酵液中所测有机酸占75.03%和10.46%。本研究建立的有机酸检测方法适合红茶菌发酵样品的检测,为红茶菌发酵毛葡萄生产酸性功能软饮品提供了基础依据。     

利用醋酸发酵液提高清香型白酒中酸酯含量的研究

以清香型白酒生产的副产物大曲酒尾为培养基主要成分,经醋酸发酵制取醋酸发酵液,将其应用于清香型白酒生产中,通过考察醋酸发酵液的添加量,研究了其对酒醅发酵和清香型白酒酸酯含量的影响。试验结果表明,采用＂清蒸二次清＂工艺,在大酒醅发酵时添加醋酸发酵液,发酵结束后大酒醅酒精度略微下降,但添加醋酸发酵液可明显提高大渣酒中的主体酸酯含量;二酒醅发酵按照传统工艺进行,发酵结束后二酒醅酒精度呈增加趋势,二酒中的酸酯含量与对照无明显变化。理化指标结果表明,当醋酸发酵液添加量使大酒醅含量为3.0mg醋酸/g醅时,酒中主体酸酯含量提高较为显著,大酒中乙酸和乙酸乙酯分别提高了138.35%和85.43%,2次发酵总酯提高了25.93%。