丙酮酸脱氢酶E1α自然突变的结构和特性的研究进展

综述了丙酮酸脱氢酶(PDH)E1α自然突变的结构和特性的研究进展，丙酮酸脱氢酶系是线粒体中的多酶复合体，它的催化作用在能量代谢过程中是非常重要的，人体内的丙酮酸脱氢酶如果缺乏，丙酮酸就不能最终转化成乙酰辅酶A，在临床上表现为乳酸中毒，通常丙酮酸脱氢酶缺乏表现为丙酮酸脱氢酶E1α的机能障碍，E1α的基因含有GDGX26-27NN构形．这种GDGX26—27NN构形普遍存在于以焦磷酸硫胺素(ThDP)作为辅助因子的酶中，E1α的基因定位在X染色体Xp22．1-p22．2，故男性患儿症状严重，且死亡率极高。目前对于人体内的丙酮酸脱氢酶的三维结构还不清楚，但是已经知道的是丙酮酸脱氢酶E1α目然突变与临床新生儿乳酸中毒密切相关。     

丙酮酸脱氢酶活性的基础研究

用分子生物学及酶学的方法,以pQE9-6h为载体质粒,对丙酮酸脱氢酶的功能特性,尤其是酶的活性进行研究,发现丙酮酸脱氢酶活性的变异幅度很大.     

大肠杆菌arpA基因的表达及功能鉴定

E.coli的arpA基因位于异柠檬酸脱氢酶激酶(aceK)基因和异柠檬酸裂解酶调节因子基因(iclR)之间。根据E.coli基因组序列设计引物,利用PCR技术扩增了arpA基因,并将其克隆入pET-28b(+)。经IPTG诱导,ArpA蛋白可以获得高效表达。通过细菌染色体同源重组技术,构建arpA基因敲除菌株ΔarpA-MG1655。ΔarpA-MG1655在葡萄糖-MOPS培养基中的生长速率和野生型E.coli MG1655的生长速率很接近,前者约是后者的95%。ΔarpA-MG1655在乙酸-MOPS培养基中的生长速率几乎与野生型E.coliMG1655一样,说明ArpA对细菌在乙酸-MOPS培养基中的生长没有明显的影响,对乙酰辅酶A合成酶(Acs)没有明显的调控作用。ArpA包含锚蛋白重复序列,与很多真核生物包含锚蛋白重复序列的蛋白质高度同源,分子系统学分析认为一些在病毒和细菌中发现的锚蛋白重复类似蛋白,可能是进化过程中基因水平迁移的结果。     

甲基营养菌代谢甲醛的异化途径

为了更好地理解甲基营养菌代谢甲醛的机制,对甲基营养菌代谢甲醛的异化途径进行了分析和讨论.包括四氢叶酸途径(THF)、四氢甲烷蝶呤途径(H4MPT)、谷胱甘肽(GSH/MySH)途径.着重分析了甲醛异化作用三种途径的反应过程、涉及到的关键酶及其编码基因.甲基营养菌代谢甲醛异化途径是通过辅酶因子自发地或者在酶的催化作用下使甲醛与C1载体结合并将其氧化为中间产物甲酸,甲酸在甲酸脱氢酶的作用下氧化为CO2.深入研究甲醛异化途径关键酶基因及其功能,是构建净化甲醛工程菌和开发净化甲醛转基因植物的关键.     

固定化双酶耦联体系制备手性胺

胺脱氢酶(amine dehydrogenase,Am DH)能够在辅酶的作用下不对称还原前手性酮制备手性胺,并与甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,FDH)构建耦联双酶反应体系,通过酶活检测与高效液相色谱法得出,Am DH和FDH浓度比为4∶1、底物浓度为10 mmol/L、辅酶浓度为0. 025 mmol/L时,是游离双酶耦联体系最优反应条件.为提高双酶耦联体系的稳定性,将聚乙烯亚胺-双酶复合物作为模板和催化剂,诱导钛前驱体Ti-BALDH(titanium(IV) bis-(ammoniumlactato)-dihydroxide)缩聚,形成固定化耦联体系.与游离酶体系相比,辅酶可在固定化酶体系的微环境中高效循环再生,大大提高了多酶耦联体系的催化效率.     

L-乳酸脱氢酶生产菌的选育及产酶条件

从泡菜汁中筛得一株胞内L-乳酸脱氢酶(L—LDH)活性较高的植物乳杆菌RS2—2，采用亚硝基胍和超声波同时作用进行诱变，使其比活力由3．48U／mg提高到7．49U／mg，并对突变株的产酶条件进行了研究．     

乳酸脱氢酶A(ldha)基因的克隆与原核表达

乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶,在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸;当动物体内缺乏葡萄糖时,还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录PCR获得了Hela细胞中的ldha基因,并将它克隆到pET28a(+)载体上,获得重组表达载体pET28a(+)-ldha。重组质粒通过转化法转入宿主E.coli BL21(DE3)溶源菌中。SDS-PAGE分析表明,在1.0 mmol·L-1异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组子成功表达了一条分子质量约为36 kDa的目标蛋白。     

Pichia stipitis木糖醇脱氢酶基因XYL2在酿酒酵母中的表达

通过PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶（XDH）基因XYL2。将该基因连入酵母表达载体pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶（TPI）启动子下，得到融合表达载体pYZ－XYL2。通过电转化方法将pYX－XYL2转入酿酒酵母Saccharomyces cereuisiaeW303-1A中，酶活测定表明在酿酒酵母中树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶基因XYL12得到活性表达，酿酒酵母转化子粗酶液中木糖醇脱氢酶比活为每毫克蛋白0．6U左右，约为供体菌的2．4倍。与基因供体菌不同，木糖醇脱氢酶基因在酿酒酵母中表达不需木糖诱导，为组成型表达。     

复合菌系对玉米秸秆的降解特性

采用分批实验,通过对玉米秸秆降解过程中的pH、纤维素酶活性、微生物组成及秸秆降解率的检测,考察了复合菌系对玉米秸秆的降解特性.结果表明,在整个降解过程中,体系的pH处于6.5～7.5之间,基本保持稳定;Cb酶(β-葡萄糖苷酶)、Cx酶(内切β-1,4-葡聚糖酶)及C1酶(外切β-1,4-葡聚糖酶)随着秸秆的降解,依次进入高活性阶段,呈现出一定的协同性.真菌数量保持较高水平,细菌数量一直稳步上升,秸秆降解率在整个降解过程中也一直稳步上升.说明复合菌系具有一定的稳定性.     

福寿螺多功能纤维素酶（EGXA）的结构功能研究

利用点突变的方法构建了E332A、E332S和D1290Q的多功能纤维素酶(EGXA)的突变体,研究了在甲醇酵母中重组表达的突变体的酶学性质.结果表明:E332可能是该酶的活性必需基团,而D290Q突变体的外切葡聚糖酶及内切木聚糖酶活性均提高2～3倍,对EGXA研究及其应用提供了理论依据.     

酿酒酵母胞内代谢关键酶对乙醇的耐受性

分别添加2％、4％、6％、8％乙醇的酵母细胞糖酵解途径和三羧酸循环中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、异柠檬酸裂解酶活力等关键代谢节点处的酶活力,以期考查关键酶对酒精的耐受性.实验结果表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶对酒精的耐受能力较强,添加8％乙醇时的酶活力较无乙醇时提高23....     

酿酒酵母胞内代谢关键酶对乙醇的耐受性

分别添加2%、4%、6%、8%乙醇的酵母细胞糖酵解途径和三羧酸循环中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、异柠檬酸裂解酶活力等关键代谢节点处的酶活力,以期考查关键酶对酒精的耐受性。实验结果表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶对酒精的耐受能力较强,添加8%乙醇时的酶活力较无乙醇时提高23.65%;丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶和乙醇脱氢酶表现出对酒精的耐受力较差,丙酮酸激酶和乙醇脱氢酶在添加2%乙醇时的酶活力较无乙醇时分别降低77.7%和62.72%,异柠檬酸脱氢酶在添加8%乙醇时的酶活力仅为0.003U;苹果酸脱氢酶和异柠檬酸裂解酶表现出对酒精良好的耐受性,在添加8%乙醇时的酶活力较无乙醇时分别提高256.25%和276.16%。     

论复自治微分系统的奇点量

本文研究复自治微分系统(E),得到如下的主要结果:(i)引入奇点量概念,实现了实系统中焦点量和鞍点量的统一;(ii)定义 Lie 不变量概念,得到奇点量结构定理和广义对称原理;(iii)计算了(E_(?))的全部120个基本 Lie 不变量,并应用奇点量结构定理得到(E_2)和(E_(?)~((3)))的奇点量公式及可积性条件.     

反应动力学理论和n型金属氧化物EF的变化范围

首先，提出了一种用化学反应动力学来研究半导体点缺陷浓度统计分布的理论；其次，用这个理论来研究了有2次施主能级的n型金属氧化物费米能级EF，给出EF的下限EFm为Ed2-RTln2； 第三，用泊松方程的解和电中性方程来估算费米能级，得出EF的上限EFM为Ed1-RTln2.     

填料对液龄分布函数的影响

通过对同样反应器在填充填料和空床的情况下做液龄分布试验,分析得出填料在反应器中对液龄分布函数的影响:有填料反应器液龄分布函数形式为:E(t)=f1E1(t) (1-f1)E2(t) E3(t),其中E3(t)为填料吸附作用的因子.     

SBR工艺强化反硝化除磷及控制参数

采用SBR反应器,通过在厌氧—好氧运行模式(Ⅰ)中介入缺氧段,即厌氧—好氧—缺氧—好氧运行模式(Ⅱ),缺氧与好氧条件下磷的吸收量的百分比值由28.2%升高至68.3%,实现了反硝化同步除磷、脱氮.系统稳定运行了90个周期,ρ(COD)、ρ(PO_4~(3-)-P)、ρ(TN)平均去除率分别为92.0%、98.0%、81.5%.通过间歇实验发现,ρ(NO_2~--N)=30mg/L时,NO_2~--N对反硝化吸磷并无影响,并且能作为电子受体,与NO_3~--N相比,反硝化吸磷速率更快.实验对pH值、E_(ORP)进行在线检测发现,厌氧阶段E_(ORP)曲线上的拐点对应磷的释放终点;好氧阶段ⅠE_(ORP)和pH值曲线上的拐点则对应着硝化终点;缺氧阶段pH值的拐点对应反硝化终点;好氧阶段ⅡE_(CRP)和pH值的拐点分别对应COD降解和吸磷终点.因此,pH值、E_(ORP)能作为实时控制参数,来提高脱氮、除磷效率.     

原点为鞍点且具有代数初积分的三次系统的全局相图

本文讨论了原点为鞍点且具有代数初积分的三次系统的奇点的拓扑结构,并给出了全局相图     

小型蒸发器(E20)代表性和折算系数的分析

以黑龙江省二龙山蒸发实验站资料为基础，分析了E20对E-601和E20对20m^2蒸发池的代表性以及月、年蒸发量折算系数。     

E_2系统极限环线(3,1)分布参数区间的扩大

本文对一类 E_2系统进行了研究,在保证极限环线(3,1)分布的情况下,扩大了参数 n 的变化区间,在较弱条件下给出了该系统具有极限环线(3,1)分布的一个充分性条件。     

Oil source and migration process in oblique transfer zone of Fushan Sag,northern South China Sea

The oblique transfer zone in the Fushan Sag, a syndepositional dome sandwiched between the Bailian and Huangtong sub-sags, has been the most important exploration target. The major oil observation occurs in the E_2l_1~(L+M) and the E_2l_3~U. 46 oil and rock samples reveal that the oil in the transfer zone is mostly contributed by the Bailian sub-sag, though the source rock conditions, hydrocarbon generation and expulsion histories of the Bailian and Huangtong sub-sags are similar. The E_2l_3~U oil, characterized by high maturity, Pr/Ph ratio and oleanane/C_(30)-hopane ratio, shows a close genetic affinity with the E_2l_3~b source rocks, while the E_2l_1~(L+M) oil, characterized by lower maturity, Pr/Ph ratio and oleanane/C_(30)-hopane ratio, is suggested to be derived from the E_2l_(1+2)~b source rocks. The homogenization temperatures of aqueous fluid inclusions, taking the burial history of the reservoirs into account, reflect that the oil charge mainly occurred from mid-Miocene to Pliocene in the oblique transfer zone. The oil transporting passages include connected sand bodies, unconformities and faults in the Fushan Sag. Of these, the faults are the most complicated and significant. The faults differ sharply in the west area, the east area and the oblique transfer zone, resulting in different influence on the oil migration and accumulation. During the main hydrocarbon charge stage, the faults in the west area are characterized by bad vertical sealing and spatially dense distribution. As a result, the oil generated by the Huangtong source rocks is mostly lost along the faults during the vertical migration in the west area. This can be the mechanism proposed to explain the little contribution of the Huangtong source rocks to the oil in the oblique transfer zone. Eventually, an oil migration and accumulation model is built in the oblique transfer zone, which may provide theoretical and practical guides for the oil exploration.