动物性食品中磺胺二甲嘧啶快速检测方法

根据竞争抑制免疫层析原理,应用胶体金免疫层析技术进行磺胺二甲嘧啶在鸡肉和鲫鱼中的残留检测研究。磺胺二甲嘧啶半抗原-OVA和羊抗兔二抗分别作为检测带(T线)和质控带(C线)包被在硝酸纤维素膜上,金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条。所建立的检测体系对标准溶液的灵敏度达到1μg/L。成功检测了鸡肉和鲫鱼中的磺胺二甲嘧啶残留。该方法灵敏度高,所用试剂无毒、无污染,无需借助仪器,样品前处理简便,快速,检测过程可在10 min内完成,可以作为现场快速检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留的有效手段。     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中环丙沙星残留

针对牛奶中恩诺沙星的代谢物环丙沙星残留的问题,该研究开发一种胶体金试纸条快速检测牛奶中的环丙沙星残留。研究制备环丙沙星包被抗原,对环丙沙星抗体进行表征,优化胶体金标记条件,选用最佳标记pH和最佳蛋白添加量,以硝酸纤维素膜为固相载体,环丙沙星包被抗原为检测带(T带),羊抗兔二抗为质控带(T带)。依据免疫竞争法原理,建立胶体金免疫层析试纸条快速检测牛奶中环丙沙星的方法,方法检出限为6.25 ng/mL,对牛奶样品的检出限为12.50 ng/mL。样品前处理方法简单,在10 min内即可目测判断结果。     

乳品中多种抗生素残留胶体金检测方法研究

研究用于牛奶和奶粉中多种抗生素残留同时检测的胶体金免疫层析试纸条。基于胶体金免疫层析技术,搭建抗原包被体系和胶体金标记抗体体系,优化检测方法,考察胶体金快速检测试纸条的检测灵敏度、特异性、准确度和实际样本适应性。试纸条可同时检测卡那霉素、红霉素、林可霉素3种药物在牛奶、奶粉中的残留,检测限分别为50.0,20.0和75.0μg/L,假阳性率和假阴性率均为0,样本无需前处理,检测操作简单,10 min内实现3种药物同时检测。采用胶体金试纸条和液相色谱串联质谱法对20份牛奶和奶粉盲样进行比对试验,阳性样品全部检出,2种方法测定结果一致。建立的胶体金免疫层析技术及试纸条检测准确可靠,适用于现场大批量样本的快速检测和筛选。     

胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗

建立了基于T/C比值的胶体金免疫层析法快速定量检测猪肉中克伦特罗残留的新方法。胶体金免疫层析试纸条的定量检测线性范围为0.1～1.5 ng/g,检测猪肉中克伦特罗残留的最低检测灵敏度为0.19 ng/g。比较了5种猪肉组织样本中克伦特罗的简便提取方法,其中采用0.02 mol/L,含2.8%NaCl的HCl溶液抽提猪肉样品2次的提取方案,克伦特罗的平均回收率达到76.7%,变异系数为7.4%。实际样本加标回收实验显示,加标量为0.5、1.0、2.0及3.0 ng/g时,胶体金试纸条检测回收率分别为(60.4±12.8)%,(70.24±4.2)%,(75.9±4.9)%,(71.1±5.0)%。与传统ELISA方法比对,结果显示2种方法具有较好的相关性(R2=0.9136)。以上实验结果证实,基于T/C比值法的胶体金免疫层析试纸条可用于猪肉组织样品中克伦特罗的快速及定量检测。     

牛奶中新霉素残留胶体金免疫层析快速检测技术的研制

建立了一种快速、简单的检测牛奶中新霉素残留量的胶体金免疫层析法,将抗新霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干于微孔板中,将新霉素人工抗原和羊抗鼠抗抗体分别包被在醋酸纤维素膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),T线的新霉素人工抗原与待测牛奶样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体-胶体金标记物,通过T线和C线的显色情况读出结果.试纸条对牛奶样品的检测限为200μg/L,牛奶样品无需稀释,可直接检测,检测时间只需3～5min,与磺胺类、四环素类、氯霉素类等药物均无交叉反应,检测结果重复性好,可作为现场快速筛查牛奶中新霉素残留的有效手段.     

胶体金免疫层析技术测定食品中黄原胶

目的:建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测新方法,用于食品中黄原胶的快速筛查。方法:用黄原胶抗原标准品免疫新西兰大白兔,制备得到高效价的抗黄原胶多克隆抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并将其与抗黄原胶多克隆抗体标记制得金标抗体;在硝酸纤维素膜检测线上,预包被黄原胶标准抗原,质控线上包被羊抗兔IgG,采用竞争法,制成黄原胶胶体金免疫层析检测试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性和稳定性进行了试验。结果:该试纸条检测样品的敏感性为3g/kg。结论:研制出黄原胶胶体金免疫层析试纸条及其检测方法,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,5min可出检测结果,可用于现场大量样品的快速检测。     

胶体金免疫层析法快速检测食品中金霉素残留

研究食品中金霉素残留的胶体金免疫层析法的快速检测方法。采用戊二醛交联法制备金霉素-BSA 免疫抗原,按照常规的免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗金霉素多克隆抗体。纯化后的抗体用ELISA 法检测其特异性和效价。采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为15nm 的胶体金,并制备抗体- 胶体金复合物,以组装检测试纸。通过可见的颜色深浅,检测样品中金霉素的残留量。结果表明：试纸条法的金霉素检测限为0.7μg/mL,在四环素质量浓度大于1.0μg/mL 时,与金霉素存在交叉反应性,其结果与高效液相色谱法测定的结果一致。本方法检测时间仅需5min,适用于食品中金霉素残留的快速检测。     

上转换荧光猝灭试纸条检测牛奶中磺胺喹恶啉

目的:根据荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的原理,构建一种基于上转换荧光纳米材料的新型免疫标记荧光猝灭试纸条检测牛奶中的兽药磺胺喹恶啉(sulfaquinoxaline,SQX)残留。方法:通过热分解方法合成上转换纳米荧光材料,通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒。将合成的上转换荧光颗粒固定在试纸条C线上,并将上转换荧光颗粒与SQX包被抗原的混合物固定在T线上,将胶体金标记的SQX单克隆抗体喷涂在金标垫上。滴加样品后,随着样品液的流动,金标抗体会移动到T线处并与SQX包被抗原结合,这种结合会导致抗体上的纳米金颗粒(受体)与T线上的上转换颗粒靠近(供体),从而发生FRET,产生荧光猝灭。在980 nm激发器激发波长下通过目测检测荧光强弱变化,从而实现对SQX的检测。结果:该免疫荧光猝灭试纸条检测SQX的方法检测限为1μg/L,牛奶样品的检测限为8μg/L。整个检测过程不超过15 min。结论:该方法操作简便、灵敏度高、检测时间短、结果易于判断,可以满足牛奶中SQX残留的现场快速检测的要求。     

牛奶中黄曲霉毒素M1胶体金试纸条的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,单克隆抗体胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装。所研制的黄曲霉毒素M1快速检测试纸条的检测限为0.3μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率为0。试纸条使用简单方便,适合进行现场快速检测牛奶中残留的黄曲霉毒素M1。     

食品中单增李斯特氏菌检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的建立

目的建立食品中单核增生李斯特氏菌快速检测PCR-免疫胶体金试纸条法。方法通过设计特异性引物建立单增李斯特氏菌检测PCR方法并使用免疫胶体金技术建立PCR产物快速检测试纸条;用试验菌株检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的检测特异度与敏感度。使用新建方法对市售肉制品和乳制品中单核增生李斯特氏菌进行检测,验证该方法在食品检测中的可行性。结果 PCR-免疫胶体金法具有良好的特异度,敏感度比标准琼脂糖凝胶电泳法高100倍。采集乳品样品131份,阳性样品1份,检出率1.53%;肉制品224份,阳性样品4份,检测率1.79%。结论建立的单增李斯特氏菌检测PCR-免疫胶体金试纸条法特异度好,敏感度高,适用于食品中单增李斯特氏菌的检测。     

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定

目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。     

胶体金免疫层析技术快速检测沙丁胺醇残留

建立胶体金免疫层析检测法,用于动物组织或饲料样品中沙丁胺醇残留的快速检测。采用胶体金免疫竞争法,将兔抗沙丁胺醇多克隆抗体-胶体金标记物包被在胶体金聚酯结合垫上,并将沙丁胺醇-BSA抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线,与待测试样中的沙丁胺醇竞争结合胶体金标记的兔抗沙丁胺醇多克隆抗体,从而判断试样中是否有沙丁胺醇存在。本文优化了检测试剂,可检测出猪肉等组织和饲料试样中沙丁胺醇的低限浓度为2 ng/mL,与盐酸克伦特罗的交叉反应率为2.67%,且试验在3 min内完成,肉眼可判断结果。本检测方法检测沙丁胺醇,灵敏度高,特异性好,可用于现场的快速检测和筛查。     

胶体金免疫层析法测定牛羊肉中掺杂鸡肉

目的建立胶体金免疫层析法快速检测牛羊肉中掺杂鸡肉的方法。方法采用柠檬酸三钠制备胶体金溶液,以真空干燥的方式制备有金标抗体的微孔试剂,将鸡IgY包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的检测线(T线),兔抗羊抗体包被于硝酸纤维素膜(NC膜)的质控线(C线),向硝酸纤维素膜依次贴上吸水纸和样品垫,切条组装成试纸条。样品经磷酸盐处理,加入至金标抗体的微孔中,用试纸条检测,胶体金分析仪检测T/C线的颜色信号。结果该方法对牛羊肉中掺入鸡肉的检出限为3%,重复性和特异性较好,其他动物组织对其无干扰,检测时间仅需要15 min。结论该方法操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,适用于牛羊肉中掺杂鸡肉的现场快速筛查和检测。     

牛β-乳球蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制及检测应用

研制了一种可快速检测羊乳及制品中牛源β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析试纸条。通过杂交瘤技术制备牛β-lg特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成30 nm胶体金颗粒,并用于标记牛β-lgmAb。采用竞争法研制免疫层析试纸条,将胶体金标记的牛β-lgmAb包被于金标垫,牛β-lg和羊抗鼠IgG标记于硝酸纤维素膜分别作为检测线(T线)和质控线(C线),牛β-lg和二抗的最佳包被浓度均为1.0 mg/mL。制得的单克隆抗体纯度都在90%以上,效价均在10000以上且特异性较好。该试纸条对牛β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为3.13μg/mL,对牛源α-CN,牛源β-CN,牛源κ-CN,牛源α-LA,BSA均未产生交叉反应,对脱脂羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉的LOD值为5%,并用该方法对市售羊奶及配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化的ELISA试剂盒一致。该方法前处理快速简单,可在5 min内对牛β-lg进行检测,可用于羊乳制品的现场快速检测。     

Advantage of Eu3+‐Doped Polystyrene Microspheres Compared with Colloidal Gold Used in Immunochromatographic Assays for the Detection of Melamine in Milk

Colloidal gold and Eu³⁺‐doped fluorescent microspheres were applied as labels to develop the immunochromatographic strips for detecting melamine in milk. Under the optimized condition, the visual detection limit of colloidal gold‐immunochromatographic test strip (ICTS) was 150 μg/L of melamine in phosphate‐buffered saline (PBS), although the visual detection limit of fluorescent nanoparticles (FN)‐ICTS was 75 μg/L in PBS. As thermal acceleration test, FN‐ICTS could be stored at 37 °C for at least 11 d before sample testing, but the color of the lines on colloidal gold‐ICTS faded away after 7‐d storage. The visual result of FN‐ICTS was more stable than that of colloidal gold‐ICTS, and the fluorescence intensity of the line on FN‐ICTS could be maintained up to 30 d at 22 °C after sample testing. Once the immunochromatographic strips were used to detect melamine in milk, no negative effect of milk components on the performance of FN‐ICTS was identified, whereas the performance of colloidal gold‐ICTS was significantly influenced by milk matrix.     

胶体金免疫层析法检测食品中的磺胺类药物残留

建立了一种用于快速检测动物源性食品中五种磺胺类药物,磺胺异噁唑(SIZ)、磺胺噻唑(STZ)、磺胺对甲氧嘧啶(SME),磺胺甲二唑(SMT)、磺胺氯哒嗪(SCPA)残留的胶体金免疫层析方法.采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20nm的胶体金,将对磺胺类药物具有广谱特异性的多克隆抗体-肢体金复合物喷涂在玻璃纤维上,并将人工合...     

免疫检测用的胶体金制备工艺的优化研究

利用抗坏血酸液相还原法制备适用于免疫检测用的胶体金纳米颗粒,并采用紫外/可见光分光光度计对胶体金颗粒的光学吸收特性进行表征.通过对实验中抗坏血酸的加入浓度、加热程度以及稳定剂作用的探讨.发现当氧化剂HAuCl_4的浓度为1%时,反应体系中抗坏血酸浓度控制在1%,制备得到的胶体金颗粒较小且有较好的均一性;良好的加热并适量添加PEG能提高胶体金的质量.实验还发现胶体金溶液的最大吸收峰和其粒径之间存在一定的线性关系,其线性度达到0.9768,线性回归方程为Y=2.834X+474.16.     

胶体金标免疫固相膜检测动物性食品中氟甲喹

氟甲喹(flumequine,FLU)是动物专用的抗生素,滥用或超标使用会造成动物性食品中的残留问题,对人类健康造成危害。以活泼酯法制备氟甲喹完全抗原,免疫新西兰大耳白兔获得抗血清,通过间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定抗血清的效价和亲和性,效价为1∶12 800,纯化后抗体的IC50达到0.055 ng/mL。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并用于标记FLU多克隆抗体制备免疫金。以硝酸纤维素膜为固相载体,包被上包被原和酶标二抗作为检测线和控制线,优化检测条件:封闭液为5%脱脂乳、酶标二抗稀释40倍、包被量1.0μg、免疫金稀释度1∶5(体积比)、金标抗体与待测溶液混合比例1∶5(体积比)。在最优条件下,制成FLU胶体金标记免疫固相膜,最低检出限达40μg/L。建立的胶体金标记固相膜免疫检测方法适于大量样品的快速定性筛查。