胶体金免疫层析法快速检测动物组织中残留的喹乙醇

研制胶体金免疫层析法试纸条,用于动物源食品中喹乙醇药物残留的快速检测。将已制备纯化过的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在10min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/m L,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。本实验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。     

胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗

建立了基于T/C比值的胶体金免疫层析法快速定量检测猪肉中克伦特罗残留的新方法。胶体金免疫层析试纸条的定量检测线性范围为0.1～1.5 ng/g,检测猪肉中克伦特罗残留的最低检测灵敏度为0.19 ng/g。比较了5种猪肉组织样本中克伦特罗的简便提取方法,其中采用0.02 mol/L,含2.8%NaCl的HCl溶液抽提猪肉样品2次的提取方案,克伦特罗的平均回收率达到76.7%,变异系数为7.4%。实际样本加标回收实验显示,加标量为0.5、1.0、2.0及3.0 ng/g时,胶体金试纸条检测回收率分别为(60.4±12.8)%,(70.24±4.2)%,(75.9±4.9)%,(71.1±5.0)%。与传统ELISA方法比对,结果显示2种方法具有较好的相关性(R2=0.9136)。以上实验结果证实,基于T/C比值法的胶体金免疫层析试纸条可用于猪肉组织样品中克伦特罗的快速及定量检测。     

牛奶中新霉素残留胶体金免疫层析快速检测技术的研制

建立了一种快速、简单的检测牛奶中新霉素残留量的胶体金免疫层析法,将抗新霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干于微孔板中,将新霉素人工抗原和羊抗鼠抗抗体分别包被在醋酸纤维素膜上作为检测线（T线）和质控线（C线）,T线的新霉素人工抗原与待测牛奶样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体-胶体金标记物,通过T线和C线的显色情况读出结果。试纸条对牛奶样品的检测限为200μg/L,牛奶样品无需稀释,可直接检测,检测时间只需3⁵min,与磺胺类、四环素类、氯霉素类等药物均无交叉反应,检测结果重复性好,可作为现场快速筛查牛奶中新霉素残留的有效手段。      

牛奶中新霉素残留胶体金免疫层析快速检测技术的研制

建立了一种快速、简单的检测牛奶中新霉素残留量的胶体金免疫层析法,将抗新霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干于微孔板中,将新霉素人工抗原和羊抗鼠抗抗体分别包被在醋酸纤维素膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),T线的新霉素人工抗原与待测牛奶样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体-胶体金标记物,通过T线和C线的显色情况读出结果.试纸条对牛奶样品的检测限为200μg/L,牛奶样品无需稀释,可直接检测,检测时间只需3～5min,与磺胺类、四环素类、氯霉素类等药物均无交叉反应,检测结果重复性好,可作为现场快速筛查牛奶中新霉素残留的有效手段.     

胶体金免疫层析法快速检测牛奶中环丙沙星残留

针对牛奶中恩诺沙星的代谢物环丙沙星残留的问题,该研究开发一种胶体金试纸条快速检测牛奶中的环丙沙星残留。研究制备环丙沙星包被抗原,对环丙沙星抗体进行表征,优化胶体金标记条件,选用最佳标记pH和最佳蛋白添加量,以硝酸纤维素膜为固相载体,环丙沙星包被抗原为检测带(T带),羊抗兔二抗为质控带(T带)。依据免疫竞争法原理,建立胶体金免疫层析试纸条快速检测牛奶中环丙沙星的方法,方法检出限为6.25 ng/mL,对牛奶样品的检出限为12.50 ng/mL。样品前处理方法简单,在10 min内即可目测判断结果。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1~200ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%~105.0%之间。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1²00ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%¹05.0%之间。      

胶体金免疫层析法快速检测食品中金霉素残留

研究食品中金霉素残留的胶体金免疫层析法的快速检测方法。采用戊二醛交联法制备金霉素-BSA 免疫抗原,按照常规的免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗金霉素多克隆抗体。纯化后的抗体用ELISA 法检测其特异性和效价。采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为15nm 的胶体金,并制备抗体- 胶体金复合物,以组装检测试纸。通过可见的颜色深浅,检测样品中金霉素的残留量。结果表明：试纸条法的金霉素检测限为0.7μg/mL,在四环素质量浓度大于1.0μg/mL 时,与金霉素存在交叉反应性,其结果与高效液相色谱法测定的结果一致。本方法检测时间仅需5min,适用于食品中金霉素残留的快速检测。     

胶体金免疫层析法快速检测食品中庆大霉素残留

应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测食品中庆大霉素残留的方法。采用免疫竞争法,柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记抗庆大霉素单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,庆大霉素偶联抗原和羊抗兔二抗分别包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线)和控制线(C线),制备检测庆大霉素的胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性进行测定。测试结果表明:庆大霉素快速检测试纸条的灵敏度为0.7μg/mL,检测时间为10min,稳定性和特异性良好,与其他同类物质无交叉反应,其检测结果与酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果呈现了很好的一致性。该方法快速简便、灵敏度高、特异性强、准确性和稳定性好,非常适合现场快速检测庆大霉素。      

胶体金免疫层析法检测食用肉中的氨基脲

制备特异性胶体金免疫层析试纸条,检测肉类食品中氨基脲的残留。用活性酯法将氨基脲(SEM)衍生物CPSEM交联到牛血清白蛋白(BSA)上制备完全抗原CPSEM-BSA,将硫酸铵沉淀法纯化的抗CPSEM单克隆抗体标记到柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,通过优化C/T线及金标抗体工作浓度,制备检测氨基脲的胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性进行测定。制备的试纸条检测5min后即可用肉眼观察到结果;对SEM的最低检测限达0.72ng/ml;除与呋喃西林有弱交叉反应外,与其他同类物均无交叉反应;该试纸条对猪肉中添加的SEM检测结果与酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果呈现了很好的相关性;试纸条在室温下保存7周后不会失效。通过制备针对SEM的试纸条所建立的胶体金免疫层析法(ICA),快速简便、灵敏度高、特异性强、准确性和稳定性好,基本能达到商用检测要求。     

动物性食品中磺胺二甲嘧啶快速检测方法

根据竞争抑制免疫层析原理,应用胶体金免疫层析技术进行磺胺二甲嘧啶在鸡肉和鲫鱼中的残留检测研究。磺胺二甲嘧啶半抗原-OVA和羊抗兔二抗分别作为检测带(T线)和质控带(C线)包被在硝酸纤维素膜上,金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条。所建立的检测体系对标准溶液的灵敏度达到1μg/L。成功检测了鸡肉和鲫鱼中的磺胺二甲嘧啶残留。该方法灵敏度高,所用试剂无毒、无污染,无需借助仪器,样品前处理简便,快速,检测过程可在10 min内完成,可以作为现场快速检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留的有效手段。     

胶体金免疫层析试纸条快速检测水和玉米中阿特拉津的残留

本文以胶体金作为抗体标记物,建立了一种检测阿特拉津残留的免疫层析试纸条快速检测方法.该方法的检出限为2ng/mL,10min内可以得到检测结果.本文以自来水和玉米作为样品进行了添加回收实验,水样不需要任何前处理直接检测,水样的检出限为2 ng/mL;玉米样品经简单前处理后检测,玉米样品的检出限为40 ng/g,且该方法的检测结果与间接竞争ELISA方法的结果一致.该方法具有成本低、操作简单、灵敏度高、检测快速,结果易于判定等优点,适用于大量样品的现场筛选.     

胶体金试纸条同时检测鲤鱼中7种苯并咪唑类药物的残留

为检测鲤鱼中苯并咪唑类药物残留,降低其对人体造成的危害,本文基于单克隆抗体之上建立胶体金试纸条检测方法。首先以2-甲氧基羰基氨基-3H-苯并咪唑-5-羧酸为半抗原,用活化酯法偶联蛋白质制备免疫原,免疫小鼠,进行细胞融合制备单克隆抗体,而后用合成的胶体金标记单克隆抗体制备胶体金试纸条。通过间接竞争ELSIA法(ic-ELISA)测得阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的半抑制浓度(IC50)分别为0.44、0.16、3.47、5.62、0.62、0.10、5.77 ng/mL。胶体金试纸条在鲤鱼中的阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的检测限分别为4、2、50、100、10、1、100 ng/g,检测时间为15 min。因此,该方法灵敏度高、成本低、速度快且无需仪器辅助,适宜现场大量鲤鱼样本的快速检测。     

双酚A快速检测胶体金试纸的研制

为建立一种快速检测双酚A(BPA)的方法,本论文建立以胶体金为基础的免疫层析法(GICA)。首先通过BPA人工抗原免疫Balb/c小鼠,然后利用正常的杂交瘤技术制备BPA的单克隆抗体,所制备的抗体经过辛酸-硫酸铵(CA-AS)沉淀法纯化后并鉴定为IgG2b亚型。胶体金是由柠檬酸三钠还原氯金酸而制得,通过紫外扫描光谱和透射电镜检测,结果表明胶体金在530 nm有单一吸收峰、粒径约为30 nm。用其标记BPA单克隆抗体,制备金标抗体。本研究所制备的胶体金免疫层析试纸条的检测限为100 ng/mL,检测时间为10 min,交叉反应表明,试纸条和BPA的结构类似物双酚酸、任基酚和辛基酚无交叉反应,有良好的再现性。该方法能够方便、快捷、有效的检测环境中的BPA,免疫层析试纸的研制为BPA进行现场快速的检测奠定了基础。     

胶体金试纸条快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留

目的：旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的检测方法。方法：应用竞争抑制免疫层析原理,研制磺胺二甲基嘧啶胶体金试纸条。结果：该试纸条检测限为10ng/mL、检测时间5min,与其他磺胺类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为100μg/kg。结论：该方法操作简便、灵敏度高且特异性强,可实现对食品样品中磺胺二甲基嘧啶残留的快速检测。     

胶体金免疫层析技术快速检测沙丁胺醇残留

建立胶体金免疫层析检测法,用于动物组织或饲料样品中沙丁胺醇残留的快速检测。采用胶体金免疫竞争法,将兔抗沙丁胺醇多克隆抗体-胶体金标记物包被在胶体金聚酯结合垫上,并将沙丁胺醇-BSA抗原包被在硝酸纤维素膜上作为检测线,与待测试样中的沙丁胺醇竞争结合胶体金标记的兔抗沙丁胺醇多克隆抗体,从而判断试样中是否有沙丁胺醇存在。本文优化了检测试剂,可检测出猪肉等组织和饲料试样中沙丁胺醇的低限浓度为2 ng/mL,与盐酸克伦特罗的交叉反应率为2.67%,且试验在3 min内完成,肉眼可判断结果。本检测方法检测沙丁胺醇,灵敏度高,特异性好,可用于现场的快速检测和筛查。     

应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究

本文介绍了一种快速检测赭曲霉毒素A的胶体金试纸条的研制方法，其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。测试结果表明赭曲霉毒素A快速检测试纸条的检测限为10ng／ml，检测时间为10min，加上使用方便，经济适用，使之适合于赭曲霉毒素A现场快速检测之用。     

基于纳米抗体的胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中腐霉利

为探索纳米抗体在小分子有害物胶体金免疫层析方法（colloidal gold immuno-chromatography assay,GICA）应用的可行性,以农药腐霉利为模型,系统研究胶体金标记参数、胶体金工作缓冲液以及样品前处理方法等对GICA的影响。结果表明：胶体金颗粒大小、标记pH值及抗体用量是保证纳米抗体-金标探针稳定性的关键因素。在最佳工作条件下,纳米抗体GICA检测腐霉利的检出限、半抑制浓度和可视检出限分别为0.44、6.29μg/L和200μg/L,其灵敏度比基于传统单克隆抗体的GICA提高了4.1倍。采用QuEChERS对韭菜、黄瓜、番茄等样品进行前处理,利用纳米抗体优良的有机溶剂耐受性,省去了有机溶剂吹干程序,加标样品平均回收率介于80.1%～109.6%之间,且对实际样品的检测与标准气相色谱-质谱法结果一致。本研究表明纳米抗体作为一种新型原料可替代传统抗体用于小分子有害物的快速检测,所建立的腐霉利GICA方法具有灵敏、准确、快速和简便等优势,可用于蔬菜腐霉利残留的快速筛查。