中药白芍亲缘性分析及分子鉴定标记的筛选

提取4种白芍的DNA基因组,筛选26条随机引物对浙白芍、亳白芍、山白芍和川白芍进行PCR扩增,共扩增出385条带,多态百分率为89%.聚类分析得到山白芍与亳白芍遗传相似性系数最高(为0.723 7),而与浙白芍的遗传相似性系数最低(为0.520 2).其中引物S17,S7,S61,S98筛选到浙江白芍、安徽白芍和山东白芍的分子鉴定标记.实验筛选获得的分子鉴定标记经克隆和测序后,可为白芍的特异性PCR鉴定的引物设计打下基础,也为其他中药材品种的分子水平的鉴定研究提供参考.     

中药白术SCAR分子鉴定标记的筛选和克隆

获取四种白术的SCAR分子标记,并对SCAR分子标记进行回收和克隆.利用PCR技术和10个碱基组成的随机引物对浙白术、河北小白术、湖南平术、安徽徽术进行分子鉴定标记的筛选,对分子鉴定标记进行回收和T-载体克隆.利用随机引物S9,S10经PCR技术,分别从浙白术和河北小白术中获取到SCAR分子标记ZBZ和HBZ,这两个SCAR标记经回收后成功克隆进入T-载体.实验筛选获得浙白术和河北小白术的SCAR分子标记ZBZ和HBZ,克隆后的SCAR标记经测序后,可以为白术特异性PCR鉴定方法的引物设计奠定基础.     

三种南方贝母的RAPD分析

利用RAPD技术对三种南方贝母品种浙贝母、川贝母和湖北贝母进行分析.RAPD扩增结果显示扩增产物的分子量介于100-2300 bp之间,共扩增出39条谱带,多态性条带数在6-10条范围内.引物S303的扩增效果最好,稳定性亦较高,其扩增产物的多态性分布图可以作为浙贝母的中药分子鉴定依据.利用RAPD分析三种南方贝母的遗传关系,发现浙贝母与川贝母亲缘关系较近,和湖北贝母亲缘关系较远,其亲缘关系的远近与地理分布相似.     

RAPD分子标记对高粱DNA经花粉管导入玉米自交系的验证

采用SDS方法纯化高粱总DNA,通过花粉管通道将高粱DNA转化P138、丹改340、7922、06NY-2、组3等5个品种的玉米自交系,后代的玉米种子经随机筛选后在实验室盆栽得到幼苗。使用不同序列的59条RAPD引物,对高梁基因组DNA和导入前后的玉米基因组总DNA进行PCR扩增。结果表明,其中9条引物在后代玉米和玉米原种之间具有RAPD差异,并证明了高梁DNA导入了4个玉米自交系,为今后的玉米自交系花粉管导入法育种的分子检验奠定了基础。     

川渝部分地区野生黄鳝RAPD引物筛选及其在绵阳群体的验证

采用RAPD技术对产自四川绵阳、内江、雅安和重庆忠县的24尾野生黄鳝基因组DNA进行引物筛选,40条随机引物中有4条引物扩增出片段。选择在4个地区黄鳝个体间多态性较丰富的RAPD引物A10在绵阳黄鳝群体进行扩增分析。RAPD引物A10在6个绵阳黄鳝个体的扩增,产生比较清晰的条带并且呈现一定的多态性,绵阳黄鳝群体内的平均遗传相似率为0.8947,群体内的平均遗传距离为0.1053,从一定程度反映出绵阳地区黄鳝较低的遗传多样性。本研究所筛选引物可为黄鳝分子标记和遗传多样性的分析、亲缘关系和种质的鉴定以及遗传资源的保护利用提供参考。     

筛选与鲤鱼抗寒性状相关的微卫星分子标记

为了寻找鲤鱼中与抗寒性状相关的DNA序列,采用142个微卫星引物,对荷包红鲤抗寒品系、柏氏鲤及其杂交F2代中的青灰色抗寒与青灰色不抗寒个体的混合基因组DNA进行分析.经过710次微卫星分子标记检测,首次获得两个(引物HLJ578,HLJ580)与抗寒性状相关的微卫星分子标记.利用这些微卫星分子标记进一步对27个抗寒与不抗寒个体的基因组DNA进行检测,验证其准确性.结果表明:鲤鱼的抗寒性状是数量性状,且受微效多基因调控;与鲤鱼抗寒相关分子标记DNA序列的拷贝数在鲤鱼抗寒与不抗寒个体中存在差异,这些与抗寒性状相关的DNA序列的拷贝数目的多少将最终影响与抗寒性状有关的蛋白质表达量的多少.     

DNA条形码技术在动物角制品鉴别中的应用

利用动物线粒体12 S rRNA和16 S rRNA基因序列片段对动物角制品进行种属鉴别,为DNA条形码技术在角制品分子鉴定提供有效方法.收集犀牛角、水牛角、黄牛角和山羊角作为研究材料,采用优化提取步骤的商业化提取试剂盒进行基因组DNA的提取,以提高基因组DNA的浓度及质量.采用PCR扩增及测序技术获得所有样本12 S...     

篌竹变种的RAPD分析

文章利用RAPD技术分析研究了篌竹5个变种及同属的2个近缘种的遗传关系。从200条RAPD引物中筛选出19条进行分析,共检测到随机扩增位点249个,其中多态位点223个,占总位点的89．56％。研究结果表明,①RAPD技术能将篌竹的5个变种及同属的2个近缘种明显区别开来,而且在篌竹种下也存在一定的遗传变异。②RAPD分子标记对竹类植物种下等级的分类有一定的可靠性,可以成为研究竹子种内遗传的有力工具。     

辽宁地区大白菜基因组DNA的RAPD分析

文章以七种不同类型的大白菜为实验材料,选用改进的CTAB法进行七种大白菜基因组DNA提取,使用28条随机引物进行初步的筛选,筛选出有效引物5条进行RAPD-PCR反应体系的分析,利用NTsys 2.10e软件得出七种大白菜相似系数及树状图。多态性分析结果表明：5条引物在七种大白菜基因组DNA样品中共扩增出67条条带清晰且重复性好的DNA带,其中有41条具有多态性,多态性比率为61.2%,呈现出较为丰富的多态性。使用NTsys 2.10e软件进行聚类分析结果表明：七种大白菜基因组DNA样品的相似系数,介于0.4~0.8之间,即得平均相似系数为0.6。     

珍稀药用植物竹节参SRAP-PCR反应体系的构建与优化

人参属重要的药用植物竹节参(Panax japonicus C.A.Mey)野生资源已近濒危,开展其遗传多样性研究对于资源保护和可持续利用具有重要意义。研究构建并优化了竹节参DNA的SRAP-PCR扩增体系。以竹节参根茎为材料,对PCR反应体系中的d NTPs、DNA模板、引物、Taq DNA聚合酶浓度和复性第二阶段的退火温度等条件进行探索和研究,得到了能稳定扩增竹节参基因组的最佳反应体系(25μl):DNA 40ng,d NTPs 0.2 mmol/L,Primer 0.36μmol/L,10×PCR Buffer 2.5 ul,Taq DNA polymerase 2U,退火温度50℃。进一步检测了随机组合的24对引物,进行扩增,得到了2对带型清楚、重复性较好的引物Me1/Em5和Me3/Em1。以这2对引物对10个不同产地竹节参DNA样品进行SRAP-PCR扩增。产物的电泳图谱表明,竹节参不同产地的DNA谱带多态性丰富,带型清晰,重复性好。说明建立的该SRAP-PCR反应体系稳定可靠,为利用SRAP分子标记技术研究竹节参的植物遗传多样性奠定了工作基础。     

基于RAPD分子标记的藜蒿种质资源遗传多样性分析

【目的】蒿属植物种类多,分布地域广,种间差异小,形态学等常规方法难以有效鉴定和区分不同种质资源。明晰国内藜蒿不同种质资源间的亲缘关系,保护其遗传多样性。【方法】利用RAPD分子标记,对6个省份共102份藜蒿样品DNA进行PCR扩增,扩增结果用POPGENE32、STRUCTURE等软件分别进行遗传多样性指标计算、聚类分析和群体结构分析。【结果】共有11条RAPD引物扩增出95条带,其中多态性条带93条,多态性比率为97.89%。102份藜蒿资源的种群间基因分化系数(Gst)为0.410 9,基因流(Nm)为0.717 0,遗传相似系数在0.61～0.98之间。【结论】供试的102份藜蒿资源遗传变异主要发生在群体内,存在一定程度的基因流动,具有丰富的遗传多样性。UPGMA聚类和贝叶斯聚类均将102份藜蒿资源分为3类。     

巨龙竹基因组DNA的提取及RAPD反应条件的优化

用改良CTAB法从巨龙竹硅胶干燥的叶片中提取基因组DNA，成功地进行RAPD扩增，通过正交法以RAPD反应条件优化。6个试验因子的最适条件为：模板DNA1－1.5ng/μl，引物0.8-1.0μmol/L,dNTPs0.1-0.5mmol/L,Mg^2 2.0-2.5mmol/L,Taq酶0.5-1.0U，退火温度35－36℃。     

荔枝离体培养物DNA提取方法的研究

采用十二烷基硫酸钠(SDS)并补加非水溶性聚乙烯吡咯烷酮法,提取荔枝胚性培养物基因组DNA,有效地去除了植物组织中所含的多酚、单宁、色素及多糖类物质,得到高质量的荔枝胚性培养物基因组DNA.此DNA适合作为PCR模板应用,能较好地用于RAPD分析,这是一种简便、快捷、经济的荔枝胚性培养物基因组DNA提取的方法.     

奶粉基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合奶粉材料进行分子标记检测的DNA提取方法,以市售奶粉为材料,采用6种不同的方法提取基因组DNA,并比较这6种方法的提取效果．结果表明,除异丙醇沉淀法和十二烷基硫酸钠法(SDS法)外,其他4种方法提取的基因组DNA均适用于聚合酶链式反应(PCR)检测．同时,结合基因组DNA的纯度和质量浓度,明确奶粉基因组DNA提取方法的优劣依次为:热解法、异硫氰酸胍法、高盐低pH法和十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)．     

北野豌豆及其近缘种基因组DNA的提取和RAPD稳定的反应体系的建立

采用改进的CTAB法,成功提取了北野豌豆及其近缘种的基因组DNA,电泳结果显示DNA质量和产量均较高,并以此DNA为模板,成功建立了RAPD稳定的反应体系：总体积10μL,包括10ng的DNA,1×的反应缓冲液,1．5mmol·L^-1MgCl2,0．2μmol·L^-1引物,0．2mmol·L^-1dNTP混合物和1．0U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为：先在92℃下变性3min,然后在92℃下变性1min、40℃下复性1min、72℃下延伸2min反应45个循环,最后72℃延伸10min。     

用组合引物PCR法简便快速筛选阳性正向克隆

PCR扩增的小片段DNA用T载体连接.转化受体菌后观察不到典型的蓝/白斑.用插入片段的特异性引物对菌落进行PCR来筛选阳性正向重组于,测序鉴定结果吻合率达100%,说明当利用颜色特性挑选阳性克隆成为困难时,菌落PCR技术是一种简单、快速、可靠的筛选方法.     

油葵SSR反应体系的优化

采用改良CTAB法从油葵种仁中提取基因组DNA,用于SSR—PCR反应。对影响油葵SSR—PCR反应的几个重要因子进行了探讨,确定了最佳的反应体系：在总体积为25uL中,DNA为2.0ng／uL,Mg^2＋浓度为1.5mmol／L,dNTPs浓度为0．2mmol／L,Taq酶量为2．0U,引物浓度为0．25umol／L,退火温度为52-54℃,扩增的谱带清晰、多态性丰富。该SSR—PCR反应体系为油葵亲缘关系分析奠定了技术基础。     

用RAPD技术对两个地区药用植物肉苁蓉多态性的比较分析

采用RAPD技术对内蒙古阿拉善盟和巴彦淖尔盟两个地区的药用寄生植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Maenend Ma)的基因组DNA进行随机扩增,对得到的DNA指纹图谱进行分析,从20个随机引物中筛选出4个能扩增稳定且谱带清晰的引物,得到的多态性片段中有相同的条带,也存在差异性条带,根据DNA谱带所计算的各品种的相似系数范围为0.672～0.971.对6个品种UPGMA聚类分析讨论各品种之间的亲缘关系.     

基于gyrB基因的克罗诺杆菌属菌株PCR快速检测方法的建立

43株克罗诺杆菌属菌株和5株肠杆菌属菌株的gyrB基因被克隆并测序,根据已测序的结果设计了一对特异性引物.经优化后的PCR反应体系只能扩增到43株克罗诺杆菌属菌株的目的片段(438 bp),而无法扩增出其他30株非克罗诺杆菌属菌株.通过系统生物学试验评价得出:该PCR方法的基因组DNA检测灵敏度是1.41 pg/PCR.将56 cfu阪崎克罗诺杆菌菌株ATCC 29544人工污染到3种不同的婴幼儿配方粉中,经人工增菌培养(37℃)6 h后即可扩增到目的片段.将该方法应用于25份实际样品的检测中,结果有3份样品扩增到目的片段.但是经传统的国家标准方法进行检测,只有2份样品检测到克罗诺杆菌属菌株.该方法的建立为快速准确鉴定食品中克罗诺杆菌属菌株提供了一种非常有用的技术手段.     

水稻单个端粒长度定量测定及分析

端粒是真核生物线性染色体末端的特殊结构,一定长度的端粒在维持真核生物遗传信息完整性和染色体结构稳定性中起重要作用.建立一种简单快捷定量测定水稻单个端粒绝对长度的方法对研究水稻各个染色体端粒具有积极的意义.研究将特殊接头连接到水稻染色体端粒的G-overhang末端,并利用近端粒区域的特定引物以及下游接头引物,通过PCR技术,获得所需鉴定的端粒,结合DNA凝胶电泳成像分析系统,定量检测水稻单个端粒的长度.结果显示本方法可以通过少量水稻基因组DNA有效测定单个端的粒长度.