黑曲霉脂肪酶Lip A的异源表达与酶学性质分析

脂肪酶在油脂分解和脂质合成方面具有广泛应用,是一种很有前途的生物催化剂。该研究对来源于黑曲霉的脂肪酶Lip A进行了异源表达及催化特性研究。结果表明,该重组脂肪酶的最适温度为50℃,最适pH为8.0,并且在40～60℃和pH 5.0～8.0有较好的稳定性。该酶对有机试剂有较好的耐受性,金属离子Ca²⁺和Mg²⁺对脂肪酶水解活性有促进作用,Fe³⁺、Zn²⁺和Cu²⁺严重抑制该酶活性。反应动力学参数表明,对硝基苯酚乙酸酯是脂肪酶Lip A的最适底物,其反应K_m为(0.228±0.05) mmol/L,催化常数K_cat为(0.023±0.001) s^-1。生物信息学分析表明,脂肪酶Lip A是abH23同源家族Rhizomucor mihei脂肪酶中的一员。黑曲霉脂肪酶Lip A具有催化乳酸和乙醇生成乳酸乙酯特性,为其在酿造领域的应用奠定了基础。     

黑曲霉产菊粉酶的条件及其酶学性质的研究

对黑曲霉SL-09在摇瓶条件下产菊粉酶的奈件及其酶学性质进行了研究。结果发现,接种量和装瓶量对产酶影响不大,而pH值影响较为显著,最佳产酶pH值为6．0;在对催化条件的研究中发现最佳反应温度、底物浓度和pH值分别为60℃、60g/L和6．0;锰离子对酶活有较强的激活作用,最适浓度为1．5×10mol／L;同时发现该酶存在着严重的产物抑制现象,当果糖浓度大于1％时,菊粉酶活力将大幅度下降。     

脂肪酶产生菌产酶条件的研究

对脂肪酶产生菌进行了筛选,并对优势菌株杆菌的产酶条件进行研究.研究包括培养基组成(碳源、氮源、无机盐)、初始pH值等影响因素.通过正交试验,获得了较为优化的脂肪酶产酶条件,获得的最大酶活为68.58 U/mL.     

江米酒脂肪酶酶学特性的研究

本实验对从中式传统奶酪的凝乳剂江米酒中提取的脂肪酶的酶学特性进行研究,以便进一步研究脂肪酶与中式传统奶酪的风味之间的关系。结果表明,江米酒脂肪酶的最适反应温度为45℃,酶活力在50＂C以下比较稳定。江米酒脂肪酶的最适反应pH为6．0,酶活力在pH6．0～7．0之间比较稳定。Na＋、K＋、Ca2＋、Mg2＋均对脂肪酶活力有促进作用,其中Ca2＋对脂肪酶活力有着显著的促进作用。Fe2＋、Znn、Cu2＋对酶活力有抑制作用。     

黑曲霉HU53菌株产酸性蛋白酶的条件和酶学性质

本文报道了黑曲霉（Aspergillus niger)HU53菌株产酸性蛋白酶的固体发酵条件优化和酶学特性的研究结果。适合该菌株的最佳固体发酵培养基为麦麸38．8％，豆粕9．7％，NH4NO31．5％和水50．0％，最佳起始pH5．5。在28℃下发酵50h后酸性蛋白酶的比活力达到93．8U／g，且在52h发酵期内基本不产孢子。该酸性蛋白酶的最佳反应酸碱度为pH3．0，最佳反应温度为50℃，对酪蛋白的Km为2．8016mg／ml，在40℃下保温180min后相对酶活力为93．50％。2．0mmol／L的Cu^2 和Mn^2 对该酸性蛋白酶具有极其显著的激活作用，相对酶活力分别为对照的171．9％和121．1％；而相同浓度的Fe^3 和Ca^2 则对其表现出强烈的抑制作用，相对酶活力分别仅为对照的62．5％和44．6％。     

四川腊肉中产脂肪酶霉菌筛选及产酶条件研究

对四川腊肉中高产脂肪酶霉菌进行分离鉴定,并对其产酶条件进行研究。以罗丹明B为显色剂,利用平皿生化反应法对四川腊肉中高产脂肪酶的霉菌进行筛选,对分离菌株进行分子生物学鉴定,研究其在不同时间、温度及初始p H条件下产酶情况。结果表明:分离获得一株产脂肪酶能力较强的霉菌,经鉴定为团青霉(Penicillium commune),其最适产酶条件为,当发酵时间为48h,温度为30℃,初始p H为8.0时,其脂肪酶活力可达384.05U/100m L。     

黑曲霉5143脂肪酶离子注入诱变及酶学性质的研究

以产脂肪酶菌株黑曲霉Aspergillus niger51-43为出发菌株,经氮离子注入技术对其进行诱变,筛选获得酶活力有较大提高且传代稳定的正突变菌株L7,其脂肪酶活力达29.17U/mL,较原初酶活力19.28U/mL提高了151.3%。在此基础上,对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,高产突变株L7所产脂肪酶的最适作用温度为30℃,最适作用pH8.0,在50℃和pH6.0～9.0之间有很好的稳定性。Ca2+、Na+、Mg2+对该酶有一定的激活作用,而Cu2+、Mn2+、Fe2+、Co2+、Zn2+则抑制该酶的活性。      

新疆传统奶酪中产脂肪酶乳酸菌的优选及酶学特性研究

实验采用传统培养法结合三丁酸甘油酯平板法和铜皂法,对新疆伊犁地区、哈密地区和塔城地区的23份手工奶酪样品中高产脂肪酶乳酸菌进行优选,从中筛选出4株高产脂肪酶乳酸菌,B2-5为植物乳杆菌(Lacto-bacillus plantarum);T1-5和T1-3为融合魏斯氏菌(Weissella confusa);H1-6为...     

根霉ZZ-3脂肪酶发酵条件的优化及酶学性质研究

对根霉ZZ-3脂肪酶产酶条件的优化及脂肪酶酶学性质进行了研究。结果表明,250 mL三角瓶液体培养,培养基装液量100 mL,根霉ZZ-3产脂肪酶的最佳培养基为：黄豆粉3 g/100mL,（NH4）2S040.3 g/100mL,MgS04 0.2 g/100mL,K2HPO4 0.2 g/100mL,花生油0.3 g/100mL,pH自然。在温度28℃、转速150 r/min,摇床培养时间2 d,发酵酶活力达到124.60 U/mL。对该酶的酶学性质进行了初步研究,该酶最适pH7.5,最适反应温度37℃,在pH7～9、温度低于40℃条件下酶活稳定。     

产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化

从土壤样本中分离出一株具有较高活力的产脂肪酶菌株,初步确定为假单胞菌属。对该脂肪酶产酶条件进行优化,最佳碳源为糊精、氮源为硫酸铵,最适发酵温度为30℃,最适起始pH为7.0。     

黑曲霉B0201生料发酵产单宁酶的提取及酶学性质研究

对黑曲霉B0201利用五倍子为诱导物生料发酵产胞外单宁酶的提取及酶学性质进行了研究。结果表明:硫酸铵两步沉淀的饱和度为40%和90%;该酶的最适温度为40℃,最适pH为5·0,低于60℃时的热稳定性高,60℃以上迅速失活。Zn2+、Mg2+、吐温80、EDTA等对酶活力无明显影响,Fe3+、Cu2+、Fe2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+、Al3+等对酶有抑制作用。以没食子酸丙酯（PG）为底物,单宁酶的米氏常数Km为0·514mmol/L,Vmax为71·8μmol/L·min。      

疏棉状嗜热丝孢菌耐热脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

综合考虑密码子偏爱性、RNA稳定性以及自由能等因素,对疏棉状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）耐热脂肪酶（tll）基因序列进行密码子优化并全基因合成。将合成的tll基因连接到克隆载体,然后亚克隆到表达载体pHGWPT-tll,采用根癌农杆菌介导转化无孢黑曲霉SH-2。经过三丁酸甘油酯平板、SDS-PAGE以及Western Blotting鉴定,成功表达了tll基因。发酵72h,转化子脂肪酶酶活最高达36U/mL。转化子经等离子诱变得到的突变株的脂肪酶比活力比出发菌株提高约37%。      

黑曲霉C2J6脂肪酶的保存稳定性研究

为提高黑曲霉（Aspergillus niger）C2J6脂肪酶的储存和后续使用的稳定性,通过单因素试验和Box-Behnken响应面优化试验, 考察了其在糖类、醇类、盐类稳定剂中的保存稳定性。 结果表明,添加单一稳定剂,相对酶活保持在63.50%左右;而复合稳定剂因协同效 应的存在更有利于酶的稳定化,酶液中添加丙三醇3.54 mol/L,硫酸镁0.14 mol/L,果糖5%,此条件下保存48 h后相对酶活能达到72.90%。 关键词：     

黑曲霉产糖化酶液态发酵条件研究

以糖化酶活力为指标,通过单因素实验,分别考察了添加物、补料时间和补料量对黑曲霉发酵产糖化酶的影响。通过正交实验,考察了发酵条件对黑曲霉发酵产酶的影响。结果表明,添加0.4%的(NH4)2SO4作为促进剂可使酶活提高17%,最佳补料时间为48 h,补料量6 mL,补料可使发酵周期由原来的96 h延长到120 h;最佳发酵条件为接种量15%,250 mL三角瓶装液量50 mL,初始pH为4.5。     

黑曲霉果胶酶产生条件的初步研究

本文报道了黑曲霉A3.1在麦麸固体培养基的产酶条件,在不同氮源试验中以(NH4)2SO4为最佳,该菌产酶的最佳条件为28℃,含水量45%,起始pH5.0,时间3d.     

黑曲霉固态发酵产羧肽酶条件优化及在酱油酿造中的应用

该研究以羧肽酶活力为考察指标,采用响应面法对1株高产羧肽酶的黑曲霉（Aspergillus niger）H1-6固态发酵产酶条件进行优化。首先采用单因素试验结合Plackett-Burman（PB）试验筛选出重要影响因子：麸皮添加量、水分含量和接种量,通过最陡爬坡试验获得重要影响因子的峰值范围,最后采用Box-Behnken试验、响应面分析对重要影响因子进行优化。结果表明,黑曲霉H1-6的最优产酶培养条件为：麸皮添加量36%、豆粕添加量50%、NaCl添加量10%、pH值为6.0、含水量56.6%,接种量1.3%。在此优化条件下,固态发酵羧肽酶的酶活力达到938.33 mU/g。将该羧肽酶粗酶液添加到酱油酿造中,能有效提高酱油中氨基态氮的含量（达到1.38 g/100 mL）,进而提高其鲜味。     

黑曲霉液体深层发酵产纤维二糖酶的研究

纤维二糖酶（cellobiase）是纤维素酶系中的重要组分之一,目前由里氏木霉（Trichoderma reesei）生产的纤维素酶制剂中纤维二糖酶的活力明显偏低,限制了纤维素的糖化效率。本文采用一个黑曲霉菌株（Aspergillus niger ZU-04）,在液态发酵条件下生产纤维二糖酶,对主要的发酵工艺参数进行了研究,结果表明,培养基中添加1.0%的麸皮对纤维二糖酶的形成有明显的促进作用;葡萄糖、玉米浆粉的适宜浓度分别为2.0%、0.3%;变温培养缩短了产酶周期,培养4d,酶活力达到最高,为6.23IU/mL。采用黑曲霉纤维二糖酶与里氏木霉纤维素酶协同水解酸预处理后的玉米芯,当纤维素酶用量为20IU/g底物时,纤维二糖酶活力和滤纸酶活力比例为0.43,2d酶解得率达到91.1%。     

黑曲霉脂肪酶合成单月桂酸甘油酯

从黑曲霉中提出了一种具有很高催化活性和选择性的脂肪酶,为证明这种脂肪酶的高选择性,用此酶直接催化甘油和月桂酸反应合成单月桂酸甘油酯,并且优化了反应的工艺参数。实验表明,采用甘油月桂酸摩尔比为1∶1.5,脂肪酶与底物质量比为0.5%,水与底物质量比为3%的条件在50℃下反应12h,可使月桂酸转化率达到91.2%,单酯含量高达70%。     

黑曲霉产纤维素酶混合发酵条件的研究

为选出高产纤维素酶菌株,对不同菌株进行筛选,通过4种纤维素酶活力大小比较单一菌株与混合菌株的产酶能力。利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定各单一菌株及混合菌株的内切葡聚糖酶活、滤纸酶活、外切葡聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活,筛选最优组合,在单因素试验的基础上通过响应面试验确定最佳产酶条件。结果表明,混合菌最佳产酶条件：混合菌株D2∶D2-1=2∶1,发酵时间6 d,接种量6%,发酵温度28 ℃。优化后滤纸酶活力达到156.26 U/mL,较优化前的滤纸酶活（113.96 U/mL）提高了37.1%。