传统发酵食品-浆水中微生物的分离与初步鉴定

通过对浆水中的微生物进行分离培养及数量测定，查明了浆水中的优势菌为乳酸菌及酵母菌，其次尚有少量放线菌，霉菌为污染菌。从不同样品中分离得到了2株乳酸菌、3株酵母菌，1株放线菌及2株霉菌，通过对其形态、培养特征及生物学特性的研究，初步鉴定2株乳酸菌分属于乳杆菌属（Lactobacillus）和明串珠菌属（Leaconostoc）；3株酵母菌分属于酒香酵母属（Brettanomyces）、隐球酵母属（Cryptococcus）及裂殖酵母属（Schizosaccharomyces）；放线菌属于诺卡氏菌属（Nocardia）；2株霉菌分属于青霉属（Penicillium）和曲霉属（Aspergillus）。     

新疆传统发酵牛乳中酵母菌的分离鉴定

以新疆塔城地区自然发酵牛乳为原料,对发酵酸奶中酵母菌进行分离。通过形态学和生理生化特性对其进行鉴定。研究结果表明：从酸牛奶中分离得到3株酵母菌,通过显微镜观察及生理生化特性鉴定,确定2株属于克鲁维酵母属Kluyveromyces,为马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus;1株属于酵母属Saccharomyces,为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。     

泡姜低温保存中微生物区系的研究

在29d的检测期间,杀菌保存的泡姜中没有分离到细菌、酵母菌、霉菌和大肠杆菌。低温保存的泡姜在29d的检测期内,检测出较多的乳酸菌、非乳酸细菌和酵母菌,这三类菌均随保存时间的延长而减少。低温保存泡姜在整个检测期内,共分离到84株典型乳酸菌,经生理生化实验鉴定出植物乳杆菌32株、弯曲乳杆菌7株、短乳杆菌6株、肠膜明串珠菌属5株、乳球菌属2株、乳杆菌属32株;酵母菌分离鉴定出3个属,主要为酵母属以及少量的假丝酵母属和汉逊氏酵母属;只在保存的前2d检测到个别的青霉属和毛霉属;在整个检测期内,没有分离到大肠杆菌。     

天山一号冰川产脂肪酶酵母菌的筛选及其系统发育分析

通过对天山一号冰川底部沉积层耐低温酵母菌的分离和其中产脂肪酶酵母菌株的筛选,了解冰川微生物生理多样性和系统发育多样性,为低温脂肪酶生物技术的研发奠定基础。采用RB琼脂平板涂布分离可培养酵母菌,通过橄榄油选择培养基和吐温80选择培养基筛选产脂肪酶的耐低温菌株。对分离菌株表型特征、最适生长温度进行比较,结合26S r DNA基因序列同源性分析确定产脂肪酶菌株的多样性和系统进化地位。从57株分离物中筛选到12株产脂肪酶的耐低温酵母菌株,其中7株属于隐球菌属(Cryptococcus),2株属于掷孢酵母属(Sporobolomyces),2株属于红酵母属,1株属于Mrakiellaspp。天山一号冰川冻土中产脂肪酶的耐低温酵母菌多样性较丰富,依据其生长温度的范围,均属于耐冷菌。     

西藏灵菇发酵乳中优势菌群的分离鉴定

通过对西藏灵菇菌块的电镜扫描观察和发酵乳液中微生物的分离、纯化及生理生化鉴定,确定了西藏灵菇发酵乳中的优势菌群为乳酸球菌、乳酸杆菌、酵母菌和醋酸菌。其中乳球菌归为5个种属,分别为粪肠球菌、坚强肠球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、假肠膜明串珠菌、类肠膜明串珠菌;乳杆菌归为3个种属,分别为短乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌;酵母菌归为4个属,分别为酵母属、酒香酵母属、假丝酵母属、类酵母属;醋酸菌鉴定为恶臭醋杆菌。     

延边泡菜品质评价以及耐盐酵母菌的筛选

从延边11 个泡菜样品中分离出37 株酵母菌,根据其子囊孢子、假菌丝和细胞形态等生理生化特征,可将其分为爱尼拉酵母属、拿逊酵母属和毕赤氏酵母属等9 个属。再从中筛选出6 株耐盐酵母菌。对6 株耐盐酵母菌的26S rDNA D1/D2区域进行测序,通过序列分析和构建系统发育树,进行种属鉴定。结果表明：6 株耐盐酵母菌分别来自两个属。LB1-3和YB1-3属于酿酒酵母属,LB1-3被鉴定为Kazachstania turicensis;YB1-3被鉴定为Kazachstaniaexigua。LD1-3、TB1-3、YL1-2和TL1-2属于酵母属,被鉴定均为赛瓦酵母（Saccharomyces servazzii）。     

新疆塔城牧区原料乳中酵母菌的分离鉴定

为研究新疆塔城牧区原料乳中酵母菌的分布情况,从该地区采集了7份原料乳样品,通过传统培养方法,采取形态学、生理生化特性鉴定、5.8S rDNA序列同源性分析相结合的方法,分离得到33株酵母菌,共鉴定出6个属8个种,其中20株库德毕赤酵母Pichia kudriavzevii(61%)为优势菌株;2株发酵毕赤酵母Pichia fermentans(6%);3株美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima (9%);2株乳酸克鲁维酵母Kluyveromyces lactis (6%);2株马克思克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus(6%);2株胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa(6%);1株葡萄有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum(3%);1株单孢酿酒酵母Kazachstania unispora(3%)。研究表明,该地区原料乳中的酵母菌多样性较好,有其独特的酵母菌资源,这为研究本地区的微生物资源提供了基础资料。     

传统黄酒淋饭酒母制作过程微生物的变化和作用

搭窝糖化期：乳酸球菌以肠球菌属、明串珠菌属、片球菌属、乳球菌属、酒球菌属等属的菌株为主，且有极少量乳酸杆菌。静止期：升酸幅度较大，酵母增殖迅速。搅拌期：酵母快速产酒精，乳酸球菌数迅速下降，乳酸杆菌数大量增加达到高峰期，醪液pH值又降至最低；是酵母、乳酸菌(乳酸球菌、乳酸杆菌)变化最剧烈的时期；此期间拟内孢霉酵母的作用已小。淋饭酒母制作过程中乳酸球菌、乳酸杆菌起到非常重要的作用，把酒药、曲、熟地上接入的酵母和乳酸杆菌顺利培养成酒母。乳酸球菌、乳酸杆菌是保障淋饭酒母制作正常进行、顺利完成的关键菌。影响淋饭酒母制作的主要因素：气温、曲、操作手法、水。淋饭酒母中主要微生物来源于酒药、曲和生产场地。淋饭酒母的作用：接种、作掺醅、冲缸、淋饭酒、家酿酒、分离酵母菌和乳酸杆菌等。(孙悟)     

传统米发糕发酵剂中乳酸菌和酵母菌的分离鉴定

对米发糕发酵所用的传统发酵剂中的乳酸菌和酵母菌进行分离培养和初步鉴定,从中分离纯化出3 株乳酸菌和5 株酵母菌,通过菌落形态观察及生物学特性的研究,初步鉴定3 株乳酸菌均属于干酪乳杆菌属,5 株酵母菌均属于酒香酵母属。     

西藏灵菇颗粒中菌种的分离鉴定

从西藏灵菇颗粒中分离出TK-B1、TK-B2、TK-B3、TK-B4、TK-B5 5株细菌及TK-F1、TK-F2、TK-F3 3株酵母菌,利用形态学观察、生理生化实验及细菌的16S r DNA同源性鉴定、真菌的26/28S r DNA同源性鉴定,经过同源性比对及系统发育树分析,5株细菌分别是乳酸乳球菌乳酸亚种、开菲尔乳杆菌、芽孢杆菌、冲绳醋酸菌、东方醋酸菌,3株酵母菌分别是单孢酿酒酵母、单孢酵母、东方伊萨酵母。其中的冲绳醋酸菌是首次在西藏灵菇颗粒中分离出来。     

高加索酸奶中乳酸菌的分离与鉴定

从自然发酵的5份酸奶样品中,通过平板划线等方法分离筛选乳酸菌。经形态特征,生理生化特性及糖发酵试验等,筛选到12株乳酸菌,分别为:乳杆菌7株,其中:3株德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus),3株瑞士乳杆菌(Lactobacillus hel-veticus),1株罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri);乳酸球菌5株,包括3株嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus),2株乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.Cremoris)。     

产细菌素嗜盐四联球菌的筛选及鉴定

从传统露天酿造工艺的酱油中分离出12株乳球菌,对其进行形态、生理生化特性研究及16S rDNA序列分析,鉴定为嗜盐四联球菌。在排除酸作用后,WZ-3菌株发酵液对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌具有较好的抑菌活性,经胃蛋白酶、胰蛋白酶处理后,发酵液抑菌活性略有下降。因此初步认为该菌株为产细菌素的嗜盐四联球菌。     

酸奶中污染酵母菌和霉菌的分离及鉴定

以室温放置直至变质的市售酸奶为样品,从中分离出2株酵母菌和4株霉菌,分别命名为Y1、Y2、M1、M2、M3、M4。酵母菌采用形态学和26SrDNAD1/D2区序列分析鉴定,确定Y1为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis),Y2为马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)。霉菌经菌落及菌体形态学鉴定,确定M1、M2、M4为青霉(Penicillum),M3为白地霉(Geotrichum candidum)。     

馒头老酵子中酵母菌的分离鉴定及发酵特性分析

从馒头老酵子中分离纯化得到三株酵母菌(Y-1、Y-2、Y-3),以这三株酵母菌为研究对象,研究其发酵性能的差异。经ITS区序列分析后,鉴定Y-1与Y-2为酿酒酵母,Y-3为阿氏丝孢酵母。结果表明,Y-1与Y-2这两株酿酒酵母的生长能力比Y-3阿氏丝孢酵母强;Y-1的最适生长温度是28 ℃,Y-2的最适生长温度是28~32 ℃,Y-3的最适生长温度是36 ℃;Y-1最适生长pH为5.1~5.6,Y-2最适生长pH为5.1,Y-3最适生长pH为4.1;酵母菌发酵面团能力及液化力、糖化力、酯化力都显示Y-2>Y-1>Y-3。通过对三株酵母菌发酵性能的分析发现,酿酒酵母发酵性能优于阿氏丝孢酵母。     

发酵乳球菌菌株的PCR鉴定

对9株发酵乳球菌标准菌株进行MRS固体平板培养基划线分离和镜检观察,采用特异性PCR对其进行鉴定,划线分离得到11株菌;依据各菌种代谢酶编码基因序列差异设计菌种特异性PCR引物,进行PCR扩增,将其在菌株水平上鉴定为9株菌(6株乳酸乳球菌、2株嗜热链球菌和1株无乳链球菌)。实验还获得了2个乳酸乳球菌的种特异性PCR引物LclamyLF-R和LclmapA2F-R、2个嗜热链球菌的种特异性PCR引物SttglgPF-R和SttamyLF-R以及可能是标准菌株AS1.1936的株特异性的PCR引物LclamyYF-R。     

玫瑰香干红葡萄酒自然发酵过程中优势酵母分离鉴定及其应用潜力分析

为酿造特色玫瑰香干红葡萄酒,开发本土发酵剂是目前重要发展方向。从昌黎产区玫瑰香干红葡萄酒自然发酵醪中共分离得到337株酵母,通过WL(Wallerstein laboratory)鉴别培养基对其进行分类鉴定、计数,将其鉴别为7大类,根据计数结果选取优势酵母接种至BIGGY(bismuth sulphite glucose glycine yeast)固体培养基,从中进一步筛选不产H2S酵母,进行分子鉴定,结果显示HBKS-Y1、HBKS-Y3为酿酒酵母,HBKS-Y2为葡萄汁有孢汉逊酵母。考察3株本土酵母酿造因子耐性,发现3株酵母对乙醇、SO2、糖度均具有较高耐性,满足葡萄酒酿造要求;以商用活性干酵母FX10葡萄汁发酵为对照,考察3株酵母对玫瑰香葡萄汁单菌、混菌发酵理化指标和香气成分的影响,3株本土酵母单菌和混菌发酵各指标(例如:还原糖、酒精度、总酸、挥发酸、甘油和乙醛含量)均符合干红葡萄酒酿造标准。同时发现,与HBKS-Y2单菌发酵相比,3株酵母混菌发酵总酸和挥发酸含量降低,对葡萄酒有益,且混菌发酵对葡萄酒其他理化指标没有不利影响。本土酵母发酵尤其是混菌发酵,表征玫瑰香品种香气的萜烯醇类物质含量明显高于活性干酵母发酵。以上结果表明,3株本土酵母可以应用于玫瑰香干红葡萄酒的酿造,且3株酵母混菌发酵对突出玫瑰香干红葡萄酒品种香气具有一定的应用潜力。     

番茄自然发酵液中酵母菌的分离鉴定及其特性研究

为研究番茄自然发酵液中的酵母菌及其特性，对发酵30 d番茄发酵液中的酵母菌分离纯化，通过菌落形态、镜检特征和26S rDNA序列对分离的菌株进行鉴定，并对该菌的生长特性和耐受性进行评价。结果表明，从番茄发酵液中分离出TY-1、TY-2和TY-3 3株酵母菌均为毕赤酵母属（Pichia）中的库德毕赤酵母种（P.kudriavzevii）；其中TY-1和TY-2亲缘关系较近，且与P.kudriavzevii strain SLDY-035菌株的同源性为99%，故选取TY-1进行后续实验；TY-3与P.kudriavzevii small subunit ribosomal菌株的同源性为100%。TY-1和TY-3的最佳生长温度为29℃、pH5.5，对10%~30%葡萄糖和6%~9%酒精具有一定的耐受能力。结果表明，从番茄发酵液中分离得到的酵母菌株具有良好的生长性能，可为果蔬发酵剂的开发奠定基础。     

产地葡萄酒优良酵母菌株的筛选及鉴定

从山东、甘肃、宁夏、陕西、新疆酿酒葡萄产区采集的99份葡萄果粒中分离到酵母258株,通过抗性和发酵特性评价,筛选出3株发酵性能优良的菌株.经菌落特征、细胞形态、生理生化特性鉴定,结合26S rDNA D1/D2序列,菌株ZYFJQ和QLMLZ2被鉴定为酿酒酵母,菌株ZYY73-2被鉴定为葡萄酒有孢汉逊氏酵母.     

蜂蜜中酵母菌的分离鉴定及蜂蜜酒的研制

采用稀释涂布平板法分离纯化蜂蜜样品中的菌株,并对其进行鉴定,并对蜂蜜酒进行了研制并对其挥发性成分进行测定。结果表明,从12份采自云南文山的蜂蜜样品中分离出5株酵母菌（Y3、Y5、Y7、Y9、Y10）,经5.8S rDNA-ITS 序列分析,结合形态学特征初步鉴定为暹罗接合酵母（Zygosaccharomyces siamensis）。5株菌用于蜂蜜稀释液发酵,其中菌株Y3发酵的蜂蜜酒酒香和果香浓郁,是较好的蜂蜜酒发酵菌株。以同时蒸馏萃取（SDE）-气质联用（GC-MS）技术对菌株Y3发酵的蜂蜜酒风味成分进行分析,共检测出41种挥发性成分,主要成分为2-苯乙醇（58.11%）和异戊醇（25.43%）。