一种龙须菜中纯化藻红蛋白的新方法

藻红蛋白(Phycoerythrin,PE)是龙须菜主要的捕光色素蛋白之一,呈红色,具有高荧光量子产率,被广泛应用于生物医学、食品和化妆品行业。本文交替运用疏水层析和分子筛层析分离纯化龙须菜中的PE。先使用低温组织捣碎法对龙须菜细胞进行破壁作为粗提液,硫酸铵分级沉淀处理后经磷酸盐缓冲液重悬,经疏水层析和分子筛层析,最终获得纯度(A₅₆₅/A₂₈₀)达到3.8的PE,同时表征了最终纯化产物的可见光吸收光谱、荧光发射光谱及Gauss解叠运算分析,证明最终纯化得到的PE保持了天然的光学活性和蛋白构象。此纯化工艺为今后从龙须菜中大规模提取PE,开发相关产品提供了良好的借鉴。     

龙须菜藻胆蛋白免疫功能和抗氧化作用的研究

目的探讨龙须菜藻胆蛋白粗提物对小鼠免疫功能和抗氧化能力的影响。方法以硫酸铵沉淀法提取龙须菜藻胆蛋白粗提物,经口给予小鼠100、200、300(mg/kg·d)的藻胆蛋白粗提物,连续灌胃15和30d后,分别测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力及小鼠脾、胸腺指数和血红细胞SOD活性及血清过氧化脂质(LPO)含量。结果藻胆蛋白粗提物能有效增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,刺激小鼠脾脏和胸腺器官的发育;且能极显著地提高血红细胞SOD的活性,降低LPO含量。结论龙须菜藻胆蛋白粗提物具有提高小鼠免疫能力和抗氧化作用。     

红胞藻藻红蛋白的分离纯化及稳定性研究

文章旨在从红胞藻中分离纯化得到试剂级的藻红蛋白,并对其相关性质进行研究。以红胞藻为原料,采用反复冻融、硫酸铵盐析和疏水层析的方法分离纯化藻红蛋白,并对其稳定性进行研究。结果表明,红胞藻经过4次反复冻融后藻红蛋白溶出率最高,两步硫酸铵分级沉淀可使藻红蛋白纯度(A₅₄₅/A₂₈₀)提高到2.45,进一步采用Butyl-S-QZT 6FF疏水层析纯化后藻红蛋白纯度(A₅₄₅/A₂₈₀)达到试剂级,为6.63,回收率为48.9%。纯化的藻红蛋白在545 nm处有最大特征吸收峰,荧光激发峰位于541 nm和553 nm处,发射峰位于587.5 nm处,二级结构主要以α-螺旋的形式存在。藻红蛋白含有3个亚基,分子质量分别为9、10 ku和20 ku,在30～50℃、pH6～8条件下能保持相对稳定。Cu²⁺对藻红蛋白的光谱学性质有一定的影响,在Ca²⁺、Mn²⁺、Zn²⁺、Fe²⁺、Fe³⁺     

葛仙米藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗氧化活性比较研究

在体外模型上,对人工养殖的葛仙米藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗氧化活性进行比较研究。通过考察羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、脂质过氧化抑制能力,对葛仙米中藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗氧化活性进行评价。体外抗氧化作用结果显示藻胆蛋白、藻红蛋白和藻蓝蛋白都有明显的抗氧化作用,但作用方式和抗氧化程度也有不同,在羟基自由基清除试验中,抗氧化活性由强到弱依次为藻胆蛋白藻蓝蛋白藻红蛋白;在超氧阴离子清除试验中藻红蛋白≧藻蓝蛋白藻胆蛋白;在抑制脂质过氧化试验中藻红蛋白藻胆蛋白藻蓝蛋白。人工养殖的葛仙米中藻蓝蛋白、藻红蛋白及藻胆蛋白粗提物具有很好的体外抗氧化活性,但三者抗氧化方式略有差异。     

龙须菜藻胆蛋白的分离及其清除自由基作用的初步研究

龙须菜藻体经细胞破碎,其水溶性提取物经硫酸铵沉淀即得藻胆蛋白粗提物。该粗提物经Sephadex G-100柱层析,可分离出藻红蛋白(PE),其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中仅显示一条带,用SDS-PAGE不连续电泳测定其亚基分子量分别为18000Da和24000Da。该PE的吸收光谱有二峰一肩,最大吸收值在570nm处,属I型R-PE。分别采用Fenton体系和邻苯三酚-鲁米诺发光体系测定藻胆蛋白粗提物及分离的PE清除•OH和O2•能力,结果表明,藻胆蛋白粗提物和分离的PE均有清除自由基作用,但两者间存在差异。     

红毛藻藻红蛋白的分离纯化及性质研究

从红毛藻(Bangiafusco-purpurea)中分离纯化得到纯度较高(A565/A280为5.0)的藻红蛋白(phycoerythrin,PE)。纯化过程包括:硫酸铵分级沉淀,阴离子交换柱层析,凝胶过滤柱层析。通过扫描藻红蛋白的紫外可见光谱,确定其为R-藻红蛋白。用SDS-PAGE及银染色法测定了组成R-藻红蛋白各亚基的相对分子量。并研究了pH值、温度、光照等理化因子对R-藻红蛋白稳定性的影响。     

响应面法优化红胞藻中藻红蛋白提取工艺及体外抗氧化性研究

利用响应面分析法优化藻红蛋白的提取工艺。在单因素实验基础上,使用硫酸铵分级沉淀提取纯化藻红蛋白,选超声时间、温度、功率为影响因素,以藻红蛋白得率为响应值,根据Box-Behnken实验设计原理对藻红蛋白提取工艺进行响应面分析,优化藻红蛋白提取工艺。结果表明:在超声时间为16 min、温度为33℃、功率为750 W时藻红蛋白得率取得最大值。在此优化条件下进行验证性实验,测得蛋白得率为15.93%,与预测值相对误差为2.50%,表明该优化工艺具有良好的可行性。藻红蛋白对O-2·和ABTS+·具有一定的清除作用,其IC₅₀分别为0.025 mg/m L和0.023 mg/m L。      

葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗炎和抗紫外活性比较研究

目的:对葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎和抗紫外活性进行体外比较研究。方法:通过Lipopolysaccharide(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α,比较葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎活性;通过Ultraviolet radiation B(UVB)辐照诱导NIH-3T3成纤维细胞损伤,考察藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗紫外损伤活性。结果:体外抗炎结果显示LPS能极显著诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α(P<0.01),藻蓝蛋白和藻红蛋白均能极显著抑制LPS诱导RAW264.7分泌的NO和TNF-α的含量水平(P<0.01),其中藻红蛋白抑制NO分泌能力高于藻蓝蛋白,藻蓝蛋白对TNF-α的分泌抑制作用高于藻红蛋白。体外抗紫外损伤结果显示UVB 4000 mJ/cm²可以成功诱导NIH-3T3细胞的紫外损伤,但是藻蓝蛋白和藻红蛋白对NIH-3T3细胞的紫外损伤并无明显保护作用。结论:葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白具有很好的体外抗炎活性,但两者对UVB诱导的细胞损伤并无明显保护作用。     

坛紫菜R-藻红蛋白的稳定性研究

为了揭示坛紫菜R-藻红蛋白（R-PR）的环境稳定性变化规律,分别研究了不同光照强度、温度、pH和金属离子条件下坛紫菜R-藻红蛋白光谱特性的影响。研究结果表明:坛紫菜R-藻红蛋白在40℃以下、弱光（2000lux以内）及pH5.0～8.0条件下相对稳定,光谱特性基本无变化;其中4℃、pH7.0的避光条件下R-PE尤为稳定;高温、紫外线、酸碱环境均影响坛紫菜R-PE稳定性,导致在565nm和498nm处特征吸收峰发生显著减弱并逐渐消失。坛紫菜R-藻红蛋白的两种藻胆色素的热稳定性关系为:藻尿胆素>藻红胆素。此外,Fe2+、Fe3+、Cu2+对坛紫菜R-PE的稳定性的破坏作用显著,而Ca2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+对其稳定性影响较小。      

坛紫菜R-藻红蛋白的稳定性研究

为了揭示坛紫菜R-藻红蛋白（R-PR）的环境稳定性变化规律,分别研究了不同光照强度、温度、pH和金属离子条件下坛紫菜R-藻红蛋白光谱特性的影响。研究结果表明：坛紫菜R-藻红蛋白在40℃以下、弱光（2000lux以内）及pH5.0～8.0条件下相对稳定,光谱特性基本无变化;其中4℃、pH7.0的避光条件下R-PE尤为稳定;高温、紫外线、酸碱环境均影响坛紫菜R-PE稳定性,导致在565nm和498nm处特征吸收峰发生显著减弱并逐渐消失。坛紫菜R-藻红蛋白的两种藻胆色素的热稳定性关系为：藻尿胆素〉藻红胆素。此外,Fe2＋、Fe3＋、Cu2＋对坛紫菜R-PE的稳定性的破坏作用显著,而Ca2＋、Mg2＋、Zn2＋、Mn2＋对其稳定性影响较小。     

龙须菜多糖硫酸化对免疫活性的影响

分别采用改良的氯磺酸- 吡啶法和HCl- 甲醇法对龙须菜多糖进行硫酸化修饰与脱硫处理,探讨不同硫酸基含量的天然多糖、硫酸化多糖和脱硫多糖对由环磷酰胺引起的免疫力低下小鼠免疫功能的影响。结果表明：与模型组比较,天然多糖对提高小鼠的脾脏指数(P ＜ 0.05)、巨噬细胞的吞噬活性(P ＜ 0.05)、脾细胞增殖转化能力(P ＜ 0.05)、NK 细胞杀伤活性(P ＜ 0.01)等作用最强,其次是硫酸化多糖,而脱硫多糖作用最弱;这3 种多糖都能显著促进免疫抑制小鼠的溶血素和溶血空斑的形成(P ＜ 0.01),其中天然多糖和硫酸化多糖优于脱硫多糖。显示龙须菜多糖能显著提高免疫力低下小鼠的免疫功能,但多糖中硫酸基含量与免疫作用非线性关系,增加或脱除天然多糖硫酸基其免疫活性均下降,尤其是脱除硫酸基后免疫活性显著降低。     

龙须菜超滤多糖体外抗氧化活性研究

首次研究了超滤纯化方法对龙须菜多糖抗氧化活性的影响。采用化学发光法,研究了龙须菜粗多糖GCp和超滤获得的多糖GCpF1,GCpF2在体外对羟自由基、超氧自由基和过氧化氢的清除作用。结果表明,三种粗多糖均有一定的清除作用,尤其是当低浓度时,清除率与多糖浓度呈现一定的线性关系,其中超滤获得的多糖GCpF1和GCpF2对3种活性氧的清除作用优于GCp。     

潮汕沿海龙须菜的营养成分和多糖组成分析

对南澳海域龙须菜的营养成分及其活性多糖的组成进行了分析。结果表明,龙须菜粗蛋白、总糖、粗脂肪、粗纤维、灰分含量分别为(%):19.14、43.76、0.5、4.8、28.77,并富含人体八种必需氨基酸和牛磺酸及Fe、Zn等必需微量元素;其多糖含量为31.05%,用DEAE-纤维素离子交换柱层析,可从热水提取的多糖中分离出3个级分;化学分析、纸层析和红外光谱分析表明龙须菜多糖主要由D-半乳糖和3,6-内醚-L-半乳糖组成的含有β-糖苷键的硫酸多糖,但各级分3,6-内醚-L-半乳糖及硫酸基含量相差较大;该多糖的主要组分是低浓度NaCl洗脱的由55.8%D-半乳糖和42.1%3,6-内醚-L-半乳糖以及9.12%硫酸基构成的。     

龙须菜多糖的提取及其免疫调节活性研究

本文采用水提法、酸提法和酶提法提取龙须菜多糖,比较了不同方法对提取率的影响,并测定了酸提法制备的龙须菜多糖的化学组成及免疫活性。结果发现:采用柠檬酸提取龙须菜多糖的提取率最高,为27.66±0.49%,为水提法的1.86倍;其产物多糖的总糖含量、蛋白质含量、糖醛酸含量以及硫酸基含量分别为62.24±1.09%、1.54±0.15%、6.25±0.72%和16.74±0.11%,未检出多酚类物质。此外,龙须菜多糖对RAW 264.7细胞具有显著的促增殖作用,并且能够显著地提高RAW 264.7细胞吞噬中性红的能力;且龙须菜多糖不仅能够提高光老化小鼠的胸腺指数和脾脏指数,还能降低小鼠血清白介素-10的含量,提高小鼠血清肿瘤坏死因子-α的含量,这些研究表明龙须菜多糖具有较强的提高小鼠免疫功能的能力,能够缓解光老化过程中的免疫抑制现象。     

不同提取方法对龙须菜多糖性质的影响

本文以龙须菜为原料,比较了热水、超声、超声协同热水和柠檬酸提取4种方法所得多糖的性质。研究表明:柠檬酸提取所得多糖的得率最高,为17.81±0.34%,其多糖分子量和粘度较低,多糖分子量的均一性较高。抗氧化实验表明,柠檬酸提龙须菜多糖具有较高的抗氧化性,其氧自由基清除能力(ORAC)值可达298.735±6.57μmol Trolox/g,在多糖浓度为2.0 mg/m L时,DPPH自由基清除率可达65.79±0.3%,还原力为0.765±0.01,均显著高于其他方法所提多糖。柠檬酸提多糖能够有效地抑制α-淀粉酶的活性。相关性分析表明,龙须菜多糖的多糖含量及糖醛酸含量与抗氧化、α-淀粉酶抑制活性之间呈正相关,而硫酸基含量、分子量、PDI值和粘度与抗氧化、α-淀粉酶抑制活性之间呈负相关。因此,柠檬酸提取是一种有效的提取龙须菜多糖的方法。该法能有效地提高多糖得率,增加产物中糖醛酸含量,降低硫酸基含量、分子量及其粘度,并提高多糖分子量的相对均一性。     

龙须菜酸性多糖对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

本文主要研究龙须菜酸性多糖(GLSPs)对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用。通过流式细胞术检测GLSPs对小鼠体内肿瘤细胞的细胞凋亡和细胞周期的影响;MTT法检测GLSPs对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤活性的影响;组织病理学方法检测GLSPs对荷瘤小鼠肿瘤和免疫器官(脾脏、胸腺)的影响。结果显示,GLSPs能够促进荷瘤小鼠体内H22肝癌细胞凋亡,显著抑制肿瘤生长。以200 mg/(kg?d)和600 mg/(kg?d)GLSPs灌胃管理荷瘤小鼠28 d,小鼠的平均体积抑瘤率分别为84.65%和94.58%。免疫学试验显示,GLSPs能够明显改善荷瘤小鼠脾脏肿大和胸腺萎缩的组织病变情况,增强荷瘤小鼠免疫器官的免疫功能,同时能够有效调节荷瘤小鼠白细胞和淋巴细胞的激增,显著增强荷瘤小鼠由ConA和LPS诱导的T、B细胞的增殖能力,提高脾NK细胞的杀伤活性,多方面提高荷瘤小鼠机体的免疫水平,提示GLSPs通过免疫调节作用达到体内抗肿瘤效果。     

龙须菜多酚提取工艺优化及其体外抗氧化活性

以龙须菜为原料,研究超声波辅助提取龙须菜多酚的工艺条件及其抗氧化活性。单因素考察液料比、提取温度、超声时间对龙须菜多酚含量的影响,在此基础上,利用响应面分析法优化提取工艺。结果表明,液料比40:1(mL/g)、提取温度60℃、超声时间40min为龙须菜多酚提取最佳工艺条件(龙须菜多酚提取量为1.62 mg GAE/g)。体外抗氧化活性研究表明,龙须菜多酚具有一定清除DPPH自由基和羟自由基的能力,其IC_(50)值分别为56.67,18.78μg/mL,分别相当于15.89,536.4μg/mL的抗坏血酸。     

混合发酵法制备龙须菜膳食纤维

目的:采用发酵法制备龙须菜膳食纤维,优化最佳制备工艺。方法:以绿色木霉和米曲霉为发酵菌,以产品得率为考察指标,采用正交试验优化龙须菜膳食纤维最佳制备工艺。结果:龙须菜膳食纤维最佳制备工艺为料液比1:5(g/mL)、发酵温度28℃、pH6.0、发酵时间7d、接种体积比1:1。结论:发酵法制备龙须菜膳食纤维可行,最佳制备工艺条件下膳食纤维的得率为71.36%,膨胀力为14.5mL/g,持水力为6.23g/g。     

东海红藻龙须菜的营养成分分析及评价

分析龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)的主要营养成分、18 种氨基酸及矿物质的含量,并与其他藻类如海带、紫菜、羊栖菜等进行营养学对照评价。结果表明,龙须菜的主要成分是多糖类和粗纤维,占藻体的59.4%,蛋白质含量18.9%,在几种海藻中较高。氨基酸组成均衡,必需氨基酸(EAA)占氨基酸(TAA)总量的36.6%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值(EAA/NEAA)为0.58;呈味氨基酸占总量的51.5%;谷氨酸、天门冬氨酸、亮氨酸、丙氨酸等含量相对较高。脂肪含量较低,为0.8%。矿物质和维生素含量丰富,其中Mg、Fe、Ca、Na、Zn 等含量都很高,尤其是Fe、Mg 含量高于海带、紫菜。 因此龙须菜是一种高膳食纤维、高蛋白、低脂肪的富含矿物质的食用海藻。     

非水溶性龙须菜多糖在猪肉肠中保水性的研究

本文主要研究脱除酸性多糖的龙须菜粉对猪肉肠保水性能的影响,分别考察了龙须菜粉和磷酸盐对猪肉肠的蒸煮损失率、离心损失率、质构特性和微观结构的影响。实验表明,复合磷酸盐(CPP)在各组磷酸盐中保水性最好,在磷酸盐最大允许添加量(0.5%)下,添加龙须菜粉使猪肉肠的蒸煮损失率、离心失水率分别下降了95.27%、71.62%,相对于CPP组分别下降了37.20%、32.50%,差异显著(p0.05),且随着龙须菜粉增加保水效果逐渐增强;猪肉肠的弹性、硬度、粘聚性、咀嚼度和回复性随添加量的增大逐渐改善,当添加量在3.5~4%之间时,各组质构特性较CPP组均有不同程度的提高;观察200倍电镜下肠体微观结构,添加龙须菜粉的猪肉肠形成致密连续的结构且比较均一,较其他各组更加利于水分的固定。因此实验最终确定了龙须菜粉在3.5~4%的添加量下较CPP能更好的改善肉制品品质。