内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

利用A¨KTA UPC-900快速蛋白液相色谱系统(FPLC)从黑曲霉发酵粉中分离纯化出内切β-葡聚糖苷酶。分离纯化后的酶比活力提高了8.1倍,回收率为7.5%。经SDS-PAGE电泳分析该内切酶的相对分子质量为26 400。酶学试验研究表明:该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为4.8,Lineweaver-Burk法求得动力学参数,Km和Vmax分别为6.838×10-3mg/mL、2.906×10-2(mL.min)/mg。并确定了FPLC层析缓冲液的离子强度为4.8 mmol/L时分离效果达到最佳。     

果胶内切酶在果胶化学结构解析上的应用

探讨了果胶内切酶在果胶化学结构解析上的实际应用。商品果胶酶经过Sepharose CL-6B凝胶柱层析分离纯化,得到纯化果胶内切酶。利用纯化果胶内切酶对果胶物质的化学结构进行分析比较。     

节杆菌β-1,3葡聚糖内切酶的分离纯化与特性研究

通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和柱层析从节杆菌（Arthrobacter sp．）粗酶制剂分离纯化得到β-1,3葡聚糖内切酶。经SDS凝胶电泳和柱层析测得纯化酶为单体酶,分子量为32．5kDa;纯化酶N末端的10个氨基酸序列为APGDLLWSDE,在pH5～8之间稳定,最适pH6．5,最适温度55℃,但50℃以上失活很快。纯化酶对昆布4,5,6,7糖及昆布多糖底物的米氏常数分别为0．12,0．11,0．067,0．066mM和0．16mg／mL,也可水解热凝胶和地衣多糖,葡糖苷内切酶H（Streptomyces griseus）不能分解它,证明该酶不含糖基。该酶属于糖基水解酶16族系。     

绿色木霉内切葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

采用DEAE-650C弱阴离子交换层析、CM-650M弱阳离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶层析和Octyl Sepharose CL-4B疏水层析等分离纯化技术,从绿色木霉M1发酵液中分离纯化得到4个电泳纯的内切葡聚糖酶组分(EG1、EG2、EG3和EG4),比活力分别为41.83,139.96,117.72,126.50 U/mg,分子质量分别为25.4,28.8,56.3,60.5 ku,最适反应温度分别为50,45,55,60℃,最适反应p H分别为6.0,5.0,4.0,5.0,米氏常数Km值分别为9.51,5.06,4.16,4.86 mg/m L。组分EG1、EG3和EG4在30~50℃范围较稳定,组分EG1、EG2和EG4在p H4.0~6.0范围稳定性较好,而组分EG3只在p H5.0的条件下较稳定。Zn2+、Mg2+和K+对组分EG4有激活作用,对组分EG1、EG2和EG3有抑制作用,Ca2+对组分EG1、EG2和EG3有激活作用。     

黑曲霉DL08内切葡聚糖酶基因的克隆表达及酶学性质研究

通过反转录PCR(RT-PCR)从黑曲霉(Aspergillus niger)DL08中提取内切葡聚糖酶基因(GeneBank No.KJ437592),PCR测序表明该基因全长999个核苷酸,编码332个氨基酸,预测相对分子质量为36.75 kDa,等电点(pI)为4.38,命名eg1。结构域分析表明,该蛋白包括18个氨基酸构成的信号肽和C末端1个糖基水解酶家族5的催化结构域。重组内切葡聚糖酶蛋白通过Ni-NTA亲和层析柱纯化,酶学性质研究表明,以羧甲基纤维素钠为底物时重组酶最适作用pH为5.0,最适作用温度为45℃。通过薄层层析法检测重组内切葡聚糖酶酶解1%羧甲基纤维素钠的产物,主要为连续寡糖。这些特性为纤维素酶酶解纤维素生产生物化学品和可再生生物燃料提供技术参考。     

芋头多酚氧化酶的分离纯化与酶学特性

以鲜芋头为原料,通过提取、30％～80％饱和度硫酸铵沉淀、透析、超滤,以及柱层析等步骤对芋头多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)进行逐级分离纯化,并探讨其酶学特性及抑制剂对其作用规律.结果 表明:经DEAE-Sepharose、Superdex G-75色谱柱纯化后,得到了电泳纯PPO,比活力为2...     

大麦芽极限糊精酶的分离纯化及酶学特性分析

将大麦芽提取的极限糊精酶粗酶液,利用硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤色谱等分离方法对极限糊精酶进行逐步分离纯化。结果表明：纯化倍数为31.23,回收率为8.81%。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,图谱显示样品具有较高的纯度,分子质量约为97kD。同时研究了纯化前后极限糊精酶在不同作用环境下酶的活性变化,发现纯化后样品在温度45℃和pH 5.5左右具有最大酶活性,与粗酶液中酶活性相比具有明显差异。在体系中添加不同浓度的金属离子,结果发现,Mg2+、Ca2+、Mn2+在浓度较低时,对酶活性具有激活作用,而浓度较高时,则具有抑制作用;整体上,K+对酶活性影响不大;Zn2+、Fe2+对酶活性具有抑制作用。     

蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的。本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0Na /K 磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na /K 磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液。蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mg2 、Zn2 、Fe2 、Fe3 、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3 激活作用最明显,Cu2 严重抑制蒜氨酸酶活性。以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min。     

樱桃谷鸭胸肉脂肪氧合酶的分离纯化及其酶学特性研究

用硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose柱层析法分离纯化樱桃谷鸭胸肉中脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX),同时对酶学性质进行研究。结果显示：在DEAE-Sepharose柱层析时,当NaCl洗脱浓度在0.3～0.35mmol/L时,LOX被分离出,LOX经过分离纯化后其纯化倍数可达到54.3,SDS-PAGE电泳显示其分子质量约为96kD;粗酶和纯酶性质略有不同;以亚油酸为底物,粗酶和纯酶的最适底物浓度分别为6.4、10mmol/L,最适反应温度分别为40、30℃,最适pH值分别是5.0、5.5;纯酶Km=1.139mmol/L、Vmax=0.07608U/min,纯酶与底物的亲和能力大于粗酶。     

根霉凝乳酶的分离纯化及其酶学特性研究

采用70%乙醇对凝乳酶进行粗提,回收率为52.65%.采用DE-52和Sephadex G-75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力1813.74 U/mg,回收率为11.25%.该酶的最适反应pH为5.7,在pH 5～7.5范围酶活力保持稳定;最适反应温度45℃,60℃保持20min,酶完全失活.Ca2+、Fe2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Al3+对该酶的活力有不同程度的促进作用,其中以Al3+和Ca2+的促进作用最显著,Na+和K+对该酶的活力有抑制作用.通过SDS-PAGE测定,该酶的分子质量约35kDa.     

枇杷多糖的提取纯化及理化性质初步研究

本文建立了枇杷多糖的提取纯化方法,并对提取的枇杷多糖进行了理化性质分析。枇杷多糖经40％乙醇分级得到的组分Lens 5,用Sephadex G-150凝胶柱层析得到单一峰,Lens 5的酸性水解液经纸层析和薄层层析分析,其单糖组成为葡萄糖和木糖,用Sephadex G-150凝胶柱层析法测得其相对分子量为43000道尔顿。     

乳铁蛋白的特性、分离纯化方法及特点

乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,在初乳中含量较高,乳铁蛋白具有多种生物学功能,如抗菌性、抗氧化、抗病毒、抗癌症等。乳铁蛋白的分离纯化方法较多,就吸附色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、固定化单克隆抗体法、超滤法、盐析法等进行了概述,并就其工业化生产方法进行了展望。     

白藜芦醇提取及分离纯化技术的研究进展

综述了近年来白藜芦醇的提取和纯化方法,其中提取技术包括有机溶剂浸提法、超声波或微波辅助提取法、酶解法、超临界萃取等;纯化技术有柱层析、薄层层析、高效逆流色谱等。     

发酵豆酱中蛋白酶高产细菌的筛选及所产蛋白酶的酶学特性研究

从发酵豆酱中分离出四种产蛋白酶细菌,采用Folin-phenol法测定其蛋白酶活力,筛选出产酶活力最强的菌株,并进行酶学特性的研究。结果表明:该酶的最适反应温度为55℃;最适作用pH为8.5;该酶具有较好的稳定性;在pH6.0～8.5条件下稳定;NH+4对该蛋白酶有明显的激活作用,Pb2+、Fe3+则对其表现出强烈的抑制作用;在55℃、pH8.0条件下,该酶解反应的表观米氏常数为0.056%。     

板栗多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

从板栗中分离纯化得到多糖并研究其抗氧化活性.采用沸水提取、Sevag法除蛋白、80%乙醇沉淀的方法从板栗中提取得到板栗多糖CPS.CPS经DEAE-纤维素柱分离纯化后,于蒸馏水洗脱液中得到一个纯化多糖组分CPS1.以VC为对照,试验了CPS与CPS1对羟自由基、超氧阴离子自由基、过氧化氢的清除能力及还原能力.结果表明,CPS与CPS1均具有一定的清除羟自由基、超氧阴离子自由基、过氧化氢的能力及还原能力,而且与多糖的浓度成正相关性.其中,CPS对过氧化氢的清除作用效果与VC相当.另外,经纯化精制后的CPS1对羟自由基、超氧阴离子自由基、过氧化氢的清除作用及还原能力均低于CPS.     

香菇子实体多糖Le-Ⅲ的提取、分离及纯度鉴定

对香菇子实体多糖其中一个级分Ｌｅ－Ⅲ的提取分离和纯度鉴定等方面进行了研究。     

谷物蛋白分离纯化方法的研究进展

谷物蛋白由于具有高度异质性、低溶解度和容易聚集等因素,导致其非常难以分离纯化和鉴定。为充分了解谷物蛋白的结构与功能,实现对谷物蛋白的分离纯化,阐述了几种常见谷物蛋白的组成及特点,对近年来国内外有关谷物蛋白的分离纯化原理与模式的研究进展进行了综合评述,同时展望今后谷物蛋白分离纯化的研究方向。     

莱菔多糖分离纯化及相对分子质量初探

采用超声辅助提取莱菔粗多糖(RP),经Sevag法脱除蛋白,苯酚-硫酸法测定其多糖含量。葡聚糖凝胶SephedexG-100进一步分离纯化,得到酸性多糖RP1和RP2。采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)对纯化后的两组分分别进行分析。实验结果表明:多糖含量为49.1%,RP1、RP2保留时间几乎相同,计算得平均相对分子质量分别为2.9741×104Da和3.1038×104Da。     

降解β-胡萝卜素双加氧酶的分离纯化及其部分酶学性质

研究了西方许旺酵母菌发酵产生双加氧酶的分离纯化及其酶学特性,并利用该酶降解β-胡萝卜素生成香味物质。通过摇瓶发酵,并对粗酶液进行硫酸铵梯度沉淀、半透膜透析、DEAE-Sepharose离子交换和Sephadax G-100凝胶过滤等处理,得到转化β-胡萝卜素生成香气物质的双加氧酶。实验结果表明,西方许旺酵母菌发酵产生的双加氧酶被纯化了36.43倍,酶活力回收率为21.0%,分子量为55.0 ku。酶的最适温度为40℃,最适p H为8.5;金属离子对降解β-胡萝卜素双加氧酶活力的影响为:Fe²⁺>Mg²⁺>K⁺>Na⁺>Mn²⁺>Cu²⁺>Ca²⁺>Zn²⁺>Ag⁺。Fe²⁺和Mg²⁺能明显增强酶活力,而Zn²⁺和Ag⁺能抑制酶活力;SDS和胃酶抑素对酶活力有显著抑制作用。降解β-胡萝卜素双加氧酶的K_m=8.24×10^-4mol/L,V_max=2.16×10^-4mol/（min·mg）。      

分子蒸馏技术在天然产物分离纯化中应用进展

分子蒸馏技术是一种新型分离技术,具有真空度高、操作温度低和物料受热时间短等独特优点,在天然产物分离与提纯方面有着重要应用。该文对分子蒸馏技术在天然产物分离与纯化中应用进展进行综述。