制麦过程中添加金属离子与赤霉素对大麦发芽过程淀粉酶系影响的研究

大麦发芽过程中,添加不同浓度的金属离子Mg2+、Ca2+、Zn2+、K+、Na+和赤霉素(GA3)对α-淀粉酶、β-淀粉酶和极限糊精酶活性有一定的激活和抑制作用;实验发现,添加量分别为:Mg2+50mg/kg,Ca2+50mg/kg,Zn2+20mg/kg,K+60mg/kg,Na+80mg/kg,GA30.5mg/kg时,对上述3种淀粉酶酶活均有一定的激活作用。与单独用金属离子或赤霉素浸麦相比,金属离子和赤霉素的配合使用对3种淀粉酶的酶活提高作用更为显著。     

磁性淀粉微球固定化脂肪酶的研究

磁性淀粉微球为载体,采用戊二醛交联法固定化脂肪酶。磁性淀粉微球的主要组成是淀粉和磁粉。结果得到,磁性固定化脂肪酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率、最适温度和最适pH值分别为4897.15U/g、50.59mg/g、98.58U/mg、72.73%、45℃和8.0。Ca2+、Na+和Mg2+对固定化脂肪酶和自由酶有激活作用,作用大小顺序为Ca2+>Mg2+>Na+。Cu2+和Fe2+对固定化脂肪酶和自由酶有抑制作用,Cu2+的作用尤其明显。脂肪酶被固定化后其热稳定性(在水介质和正己烷中)、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶明显提高。固定化脂肪酶和自由酶在4℃下,pH8的PBS和正己烷中保存34d后,其相对活力分别是78.3%和98.8%。     

大麦发芽过程中添加金属离子对纤维素酶和蛋白酶活力影响研究

在大麦发芽的过程中蛋白酶和纤维素酶是关系到麦芽和啤酒质量的重要酶类,通过浸泡方式添加金属K+、Na+、Cu2+、Mg2+、Zn2+离子,来提高制麦酶系中纤维素外切酶和蛋白酶的活力,加速大麦胚乳细胞壁的溶解和提高麦汁中α-氨基氮的含量,这对于啤酒发酵是非常重要的。实验发现:Na+、K+、Mg2+、Zn2+和Cu2+对纤维素酶活力有一定的影响,而对蛋白酶活力有很大的影响,当其浓度分别达到60mg/kg、60mg/kg、40mg/kg、20mg/kg、20mg/kg时,两种酶活力达到最大值。     

云芝(Coriolus versicolor)木质素过氧化物酶(LiP)酶学性质分析

研究云芝(Coriolus versicolor)产木质素过氧化物酶(Lip)酶活力随时间的变化情况,以及温度、pH 值、金属离子及化合物对云芝LiP 酶活力和稳定性的影响,对该酶底物浓度效应和Km 值进行测定。结果表明：云芝培养12d,其酶活力最高,为72U/mL。该酶的最适温度为40℃,在30～40℃范围内稳定;最适pH 值为2.5,pH 值在2.0～3.5 较稳定;Zn2+ 对LiP 有激活作用,Na+ 对酶活力没有影响,Ca2+、K+、Mg2+、Mn2+、Cu2+ 及EDTA、SDS、β- 巯基乙醇都表现出抑制作用;Km 值为2.05 × 10-4mol/L。     

根霉凝乳酶的分离纯化及其酶学特性研究

采用70%乙醇对凝乳酶进行粗提,回收率为52.65%.采用DE-52和Sephadex G-75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力1813.74 U/mg,回收率为11.25%.该酶的最适反应pH为5.7,在pH 5～7.5范围酶活力保持稳定;最适反应温度45℃,60℃保持20min,酶完全失活.Ca2+、Fe2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Al3+对该酶的活力有不同程度的促进作用,其中以Al3+和Ca2+的促进作用最显著,Na+和K+对该酶的活力有抑制作用.通过SDS-PAGE测定,该酶的分子质量约35kDa.     

羊血凝血酶制备条件优化

以羊血为试材,凝血酶比活力为指标,在凝血酶原沉淀pH、激活时间、激活温度、Ca2+浓度等单因素实验基础上,采用正交实验优化羊血凝血酶制备条件。结果表明,参试因子对凝血酶比活力影响大小顺序为pH、激活温度、Ca2+浓度和激活时间,最佳工艺条件为:pH5.2、激活时间2.5h、激活温度30℃、Ca2+浓度0.1mol/L。在此条件下,分离纯化的凝血酶比活力达268.3U/mg。     

Na~+、Ca~(2+)对淀粉浆中耐高温淀粉酶酶解效果的影响

在20%淀粉浆中添加不同量的Na+、Ca2+,研究它们对耐高温淀粉酶酶解淀粉的影响,结果表明:Na+、Ca2+对耐高温淀粉酶的酶解效果均有提高作用,最佳添加量分别为2.61mmol/kg和0.50mmol/kg。此外对Na+、Ca2+与溶液电导率的关系进行了研究,结果表明Na+、Ca2+的浓度与溶液的电导率呈明显的线性关系,在实际生产中可通过测定粉浆电导率来指导Na+、Ca2+的添加。     

乙酸异戊酯高产菌脂肪酶的特性研究

以乙酸异戊酯高产菌株Loq-c为试验材料,从菌体中提取制备脂肪酶,研究其酶学特性,结果表明：该酶催化反应的最适温度在30 ℃左右,在40 ℃以下具有良好的热稳定性;催化体系的pH在6.0～7.0时,酶的相对活力和稳定性较高,而当pH≤4.0时酶表现得不稳定,酶活力低。金属离子Mg2+和Ca2+能明显促进酶的催化能力,Cu2+和Ag+能明显抑制酶的催化能力,Na+、K+和Zn2+对酶催化的影响不显著。正交试验结果表明,菌株Loq-c脂肪酶最佳酶活条件为：温度在30 ℃,pH值为7.0,Mg2+浓度为5.0 mmol/L。在此最佳条件下,酶活力高达535.8 U/mL。     

重组微小毛霉凝乳酶的发酵条件及其酶学性质

通过对重组微小毛霉凝乳酶(recombinant Mucor pusillus rennet,RMPR)发酵条件的研究,确定甲醇诱导体积分数1%、初始OD600nm 0.5、装瓶量100mL/500mL 摇瓶、诱导时间96h 为发酵最适条件。培养液离心取上清用硫酸铵分级沉淀获得粗酶液,并对其酶学性质进行研究,经测定该酶的最适反应温度为60℃,30～45℃酶较稳定,保温90min,剩余凝乳酶活力达86.5%;酶在pH5.5～7.0 范围内,随pH 值升高,凝乳酶活力逐渐降低,pH5.5时凝乳酶活力最高。当Ca2+ 浓度为0.03mol/L 时凝乳酶活力最高,Na+ 浓度对凝乳酶活力没有明显影响,Ni2+ 和Fe2+对酶有抑制作用,Mn2+、K+、Mg2+ 对酶有一定的促进作用。     

亚硝酸还原酶的分离纯化及其性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellulose柱层析、SephadexG-75凝胶过滤层析,由巨大芽孢杆菌(B.megaterium MPF-906)分离纯化得到亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR),分子量为35ku.NiR反应的最适温度和pH值分别为40℃和6.5.热稳定性较好,80℃保温4h后仍有50％的酶活力.在pH5.5～9.0均较稳定,残余酶活都在60％以上.Cu2+、Ba2+能提高酶活力;Mn2+、Pb2+对酶活力有明显抑制作用;Na+、Fe3+、M2+、Al3+对其有轻微抑制作用;Ca2+、Zn2+对酶活力影响不大.亚硝酸钠为底物,该酶的Km=8.6mmol/L,Vmax=4.1U/mg,该酶的适电子供体为抗坏血酸20mol/L、0.1mol/L的连二亚硫酸钠和0.075mol/L的草酸钠.     

欧文氏菌乳糖酶的分离纯化及其酶学性质研究

对欧文氏菌Erwinia sp.E5株所产β-半乳糖苷酶进行分离纯化,所得纯酶的比酶活为554.92U/mg.蛋白质。对纯化得到的酶进行酶学性质研究,其最适反应温度为40℃,在20℃保持40%以上的酶活力;该酶最适反应pH为7.0,在pH 6.5体系中保持95%的酶活力;Mg2+和Na+对该酶具有激活作用,而Ca2+为弱抑制剂。乳糖水解试验显示该酶在乳糖含量小于10%的反应体系中具有较高反应速率。     

牛玻璃酸酶酶学特性的研究

以牛睾丸为原料,对纯化后玻璃酸酶的酶学性质进行研究。结果表明,牛玻璃酸酶水解透明质酸钠的最适pH和温度分别为4.5、37℃,在4⁴5℃酶活稳定性较好。NaCl和BSA浓度分别为0.2、0.45mol/L时具有较高的酶活力。金属离子抑制该酶活力的顺序为,Fe3+>Mn2+>Zn2+>Al3+>Ca2+>K+>Mg2+。硫酸软骨素A浓度为1.2mg/mL时,酶活损失31.08%。硫酸软骨素B浓度为0.012mg/mL时,酶活增加1.36%。硫酸软骨素C浓度为1.2mg/mL时,酶活损失45.07%。肝素在0.012mg/mL时对酶存在抑制作用。人类血清蛋白在0.012mg/mL时可增加1.05%的酶活。半胱氨酸使酶失活。      

内切型菊粉酶酶学性质的研究

以食品与生物工程实验中心酶工程实验室保藏的黑曲霉菌种作为菌源,利用黑曲霉细胞深层发酵法生产内切型菊粉酶。通过测定发酵液酶活,从20株黑曲霉菌株中筛选得到产菊粉酶活力最高的编号为E133131的一株黑曲霉菌株,酶活为0.66U/mL。对黑曲霉E133131号菌株所产内切型菊粉酶进行了酶学性质的研究,得到以下结论:最适pH为4.5;最适温度为60℃;最佳底物浓度为4mmol/L;米氏常数(Km)为1.434mmol/L;Ca2+对内切型菊粉酶有激活作用,当加入浓度为1.5mmol/L的Ca2+时,使酶活从0.66U/mL提高到1.09U/mL;Mn2+、Cu2+和Mg2+对内切型菊粉酶有抑制作用,其中Cu2+的抑制作用最大,使酶活从0.66U/mL降低到0.095U/mL;Na+、K+、Zn2+、Fe2+、Mg2+对内切型菊粉酶的酶活影响不大;pH在4.5~8.0范围内,温度在50~60℃之间,内切型菊粉酶的酶活力较稳定。     

木耳菜过氧化物酶活性及其影响因素的研究

对鲜木耳菜经离心后获得的过氧化物酶(POD)粗酶液进行酶活力和酶特性的研究.结果表明,鲜切木耳菜中过氧化物酶活力最适宜的pH值为4.0,温度为400C(温度＞60℃易失活),最适作用时间为6min.H2O2浓度＜0.6%时,鲜切木耳菜POD活力随浓度增加直线上升,0.8%时达到饱和.不同酚类底物与鲜切木耳菜POD的亲和力顺序为草酸＞愈创木酚＞儿茶酚＞焦性没食子酸＞酪氨酸、苯酚、间苯二酚.柠檬酸和抗坏血酸处理0后,POD活力逐渐下降,Na3+、Ca2+和Zn2+对POD具有抑制作用,Mg2+对其有激活作用.     

Ca2+激活生物酶对苎麻纤维脱胶的工艺参数优化

利用Ca2+对生物酶进行有效激活,以提高苎麻生物酶脱胶效果,优化脱胶工艺中Ca2+浓度、pH值、通气量等工艺参数,经过Box-Behnken试验设计和SAS软件分析,得出最优工艺条件为:果胶酶、半纤维素酶浓度分别为12、4 mg/mL,酶处理时间5 h,酶处理温度50°C,Ca2+浓度4.23 mg/mL,pH值4.8,通气量9.2 dm3/min.利用最优工艺处理后的精干麻的残胶率为1.96%,断裂强力为64.5 cN,纤维平均细度为0.457 tex.     

不同离子和添加剂对海参体壁粗蛋白酶活性的影响

研究了7种离子和3种添加剂对海参体壁粗蛋白酶的影响,为海参的保鲜加工提供理论依据。实验结果表明,随着离子和添加剂浓度增加,Ca2+和Zn2+对海参体壁粗蛋白酶作用由抑制转变为激活,K+、Na+、Mg2+、I-、H2PO4-与δ-内酯、柠檬酸和纳他霉素3种添加剂,在实验浓度范围内均对海参体壁粗蛋白酶有抑制作用。在实验所有离子与添加剂中,Zn2+在2 mg/mL时使相对酶活力达到最高,为240%;柠檬酸与纳他霉素分别在浓度为1 mg/mL和1.5 mg/mL时,使相对酶活力达到最低,为5%。     

低温β-半乳糖苷酶分离纯化及酶学性质研究

对来自新疆天山冻土的Rahnella sp.R3所产的胞内低温β-半乳糖苷酶进行纯化,并对其酶学性质进行研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、Q Sepharose High Performance阴离子交换层析、Sephacryl S-200High Resolution凝胶过滤层析,得到电泳纯酶。酶的活性回收率为21.3%,纯化倍数为35.6,比酶活由1.28U/mg提高到45.54U/mg。SDS-PAGE电泳显示其表观分子量为57.3kDa。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为45℃,在15℃时的酶活为最高酶活的40%,4℃时的酶活为最高酶活的23%。该酶对热敏感,45℃保温45min酶活全部丧失。纯酶的最适pH为7.0,在pH 6.5~7.5时保持稳定。5 mmol/L Na+、Ca2+、Cu2+、Al 3+、Zn2+对酶活力有不同程度的抑制作用,其中Al 3+抑制作用最强,Na+、Ca2+抑制作用不明显。5 mmol/L Mg2+、K+对酶活力具有促进作用,其中Mg2+促进作用较强,使酶活提高到1.19倍。25℃以ONPG为底物的Vmax,Km值分别为7.19mol/(min·mL)、4.64mmol/L。     

皱胃酶酶学性质的研究

研究了皱胃酶的酶学性质。皱胃酶的最适作用温度和最适pH值分别为42℃和6.0。在45℃以下和pH4.5～7.0范围内,酶活保持稳定。Ca2+、Na+、Fe3+对皱胃酶的凝乳有明显的促进作用,Mg2+、Cu2+、Ba2+对凝乳有抑制作用。并研究了底物浓度对酶反应的影响。     

中国蛤蜊内源酶性质的研究

研究了中国蛤蜊的肌肉与消化腺中内源酶的性质。结果表明:1中国蛤蜊肌肉中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H为7.0与9.0,可能存在同工酶;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Cu2+在5mmol/L时,对酶活力有激活作用,随着浓度升高对酶活力有抑制作用;Mn2+在5~15 mmol/L时,对酶活力影响不大,在20 mmol/L时对酶活力有激活作用。2消化腺中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H 8.0;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Mn2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Ca2+在5 mmol/L时,对酶活力有抑制作用,随着浓度升高有促进作用。Cu2+在5~15 mmol/L时对酶活力有促进作用,当浓度为20 mmol/L时,对酶活力有抑制作用。3肌肉中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H 10.0;Mn2+、Ca2+对淀粉酶活力有促进作用;Pb2+在5~10 mmol/L时对酶活力有促进作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有抑制作用;Mg2+在5~10 mmol/L时对酶活力有抑制作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有促进作用;Cu2+在5 mmol/L时对酶活力有促进作用,随着浓度升高,对酶活力有抑制作用。4消化腺中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H为9.0;Ca2+在20 mmol/L时对淀粉酶活性有促进作用,低于此浓度有抑制作用。Pb2+、Mg2+、Cu2+和Mn2+对淀粉酶活性皆有不同程度的抑制作用。     

酸性植酸酶产生菌的筛选、鉴定及发酵条件研究

从土壤中筛选到一株产酸性植酸酶酶活较高的菌株,初步鉴定为黑曲霉,菌株最优发酵条件为:麸皮3g/100mL、(NH4)2SO4 0.5g/100mL、发酵液初始pH5.5、发酵时间84h,酶活力可达12.06U/mL。对其粗酶液的酶学性质研究表明:该酶最适作用pH值为5左右,最适温度是45℃;该酶在55℃保温30min后酶活力保留在60%左右;在酸性和中性条件下有一定的稳定性;金属离子Ca2+、Fe2+、Na+、K+、Zn2+、Cu2+对酶有一定的抑制作用,Mg2+、Ba2+对酶有一定的激活作用。