多肽业铁螯合物制备及抑菌活性研究

以舟山带鱼下脚料为原料,制备多肽亚铁螯合物,并研究亚铁鳌合物的抑菌活性.利用风味酶和动物复合蛋白酶双酶法制备水解液,采用氯化亚铁螯合.以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等为测试菌株,采用牛津杯双层平板法确定亚铁螯合物的抑茵中浓度及探讨pH和温度对亚铁螯合物抑菌活性的影响.结果表明:(1)最佳酶解条件为带鱼下脚料蛋白用量4.1 g/100 mL,温度40℃,复合比1:1,酶量6×10(3)IU/100 mL,pH 7;(2)带鱼下脚料蛋白最佳螯合条件为:pH 7,时间15 min,温度20℃,抗坏血酸用量0.1%;(3)抑菌活性试验结果表明:亚铁螯合物对所选取的测试菌株除普通变形杆菌外都有一定抑菌作用,其中对巨大芽胞杆菌抑菌效果最好;在酸性条件下抑茵活性仍然较高,但在碱性环境中抑菌活性明显降低;在较低温度下保持抑菌活性,但高温处理后抑菌活性显著降低.亚铁螯合物对各测试菌株除普通变形杆菌之外均有较强的抑菌活性,是一种对细菌较为广谱的抑菌剂.     

带鱼下脚料蛋白多肽亚铁螯合物的制备及抗氧化活性研究

以舟山带鱼下脚料为原料,利用风味酶和动物复合蛋白酶水解制备多肽亚铁螯合物,并对亚铁鳌合物抗氧化活性进行了初步研究.结果表明:最佳酶解条件为带鱼下脚料蛋白用量4.1g,温度40℃,风味酶与动物蛋白酶复合比1:1,酶量6×103IU/100mL,pH7.带鱼下脚料蛋白最佳螯合条件为:pH7,时间15rain,温度20℃,抗坏血酸用量0.1%.抗氧化活性实验结果表明:亚铁螯合物对羟自由基具有一定清除作用,但对过氧化氢清除效果不明显,对植物油抗氧化效果接近VE,但持久性较差.     

超滤法制备高抗菌抗氧化活性带鱼蛋白亚铁螯合肽(Fe-HPH)的工艺研究

为了获得高抗菌、抗氧化活性的带鱼蛋白亚铁螯合肽(Fe-HPH),采用透过分子质量分别为10,5,3,1ku的超滤膜对带鱼蛋白酶解液亚铁螯合物进行分级分离,比较各级分及未分级带鱼蛋白亚铁螯合肽的肽含量及抗菌抗氧化活性;采用正交试验对最佳膜分离条件进行优化。试验结果显示:经透过分子质量3ku的膜超滤的肽液的抗菌、抗氧化活性最高,其最佳膜分离条件是:螯合肽质量分数30%,pH6.5,温度35℃,此时带鱼蛋白酶解液亚铁螯合物超滤液的DPPH自由基清除活性为81.2%(2mg/mL),对金黄色葡萄球菌的抑制率为91.3%。透过分子质量为3ku的超滤膜为分离高抗菌、抗氧化活性的带鱼蛋白亚铁螯合肽的最佳超滤膜。     

桃仁多肽螯合亚铁的抑菌活性及结构表征

分别对亚铁离子与不同分子质量桃仁多肽和不同植物多肽形成的螯合物,以及亚铁、锌、钙和镁离子与桃仁多肽形成螯合物的抑菌活性进行比较,并对螯合物进行结构表征。结果表明：小分子质量（小于5 000 Da）桃仁多肽PKP3组分与亚铁离子螯合后的抑菌活性强于大分子质量（大于10 000 Da）桃仁多肽亚铁螯合物,桃仁多肽与亚铁离子和锌离子螯合后有较强抑菌活性;4 种植物多肽与亚铁离子所形成的螯合物间的抑菌活性存在显著性差异（P＜0.05）,其中桃仁多肽螯合亚铁和小麦多肽螯合亚铁的抑菌活性最强,对大肠杆菌的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）均为5.0 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC分别为2.5、5.0 mg/mL;傅里叶变换红外光谱分析表明亚铁离子与4 种植物多肽分子的—COO－、N—H、C＝O形成配位键,多肽与亚铁离子能有效地螯合形成多肽螯合亚铁。     

舟山海域4种低值鱼酶解蛋白亚铁螯合物自由基清除活性与抑菌活性研究

对马鲛鱼、带鱼、鳀鱼、梅童鱼碱性蛋白酶酶解蛋白亚铁螯合多肽自由基清除活性和抑菌活性进行研究,结果表明:4种低值鱼酶解蛋白亚铁螯合多肽(Low value fish enzymatic hydrolysates protein ferrous chelatingpeptides,LEFP)均出现不同程度的清除羟自由基、超氧阴离子、二苯基苦基苯肼(DPPH)等自由基的活性;4种低值鱼酶解产物亚铁螯合多肽对超氧阴离子的清除作用均较弱;羟自由基清除活性较强的是梅童鱼酶解蛋白亚铁螯合多肽;DPPH自由基清除活性较强的是马鲛鱼酶解蛋白亚铁螯合多肽;4种低值鱼酶解产物亚铁螯合多肽对待测菌株有不同程度的抑菌作用。其中带鱼酶解蛋白亚铁螯合多肽对3个被测菌株都表现出明显的抑菌活性,而马鲛鱼酶解蛋白亚铁螯合多肽则没有明显的抑菌活性。     

鱼蛋白酶水解物亚铁螯合修饰物抑菌特性及机理研究

目的:探讨鱼蛋白酶水解物亚铁螯合修饰物的抑菌特性及机理,为带鱼下脚料和其它低值鱼高值化以及多肽亚铁螯合物抑菌剂的应用奠定理论基础。方法:采用葡聚糖凝胶、SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法分离纯化并鉴定;以牛津杯双层平板法测定抑菌特性;通过透射电镜观测螯合物对大肠杆菌形态的影响。结果:分离到1种具有较高抑菌活性的纯化组分,相对分子质量约26 kDa;其对多种常见微生物,包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等均有较强的抑制作用。红外光谱检测表明亚铁离子与多肽形成环状共轭结构;多肽亚铁螯合物通过形成跨膜的离子通道,使菌体内容物外泄,最终导致菌体死亡;铁含量与多肽亚铁螯合物抑菌活性有关。结论:多肽亚铁螯合物抑菌机理是通过在微生物细胞表面形成跨膜离子通道,从而具有抑菌功效。推测螯合物可竞争性结合微生物生长所需铁元素,且螯合环结构对其抑菌活性也有贡献。     

复合酶解带鱼蛋白制备亚铁螯合多肽的工艺优化

以带鱼下脚料蛋白为原料,以水解度及亚铁螯合率为考察指标,采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶及胃蛋白酶进行单一酶解筛选试验,然后进行复合酶解试验.采用二次正交旋转组合设计,以水解度及亚铁螯合率为指标,研究酶制剂种类、加酶方式、复合酶比例、总加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备亚铁螯合多肽工艺的影响.综合考虑水解度和螯合率因素,最终确定复合酶解带鱼蛋白制备亚铁螯合多肽的最佳工艺条件为:总加酶量22 000 U/g,并以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶的酶活力配比4:6先后加入;酶解时间为碱性蛋白酶9h、木瓜蛋白酶8 h;pH值为碱性蛋白酶8.0、木瓜蛋白酶6.0;酶解温度为45℃.该条件下制备的带鱼蛋白亚铁螯合多肽产物水解度和螯合率分别为52.22％、82.31％.     

带鱼蛋白亚铁螯合物的制备及性质研究

带鱼蛋白亚铁螯合物的制备及性质比较。以带鱼鱼糜为原料,酶解后根据酶解液体积加入不同量的FeCl_2溶液进行螯合,制备出不同比例(1%,2%,3%和4%)带鱼蛋白亚铁螯合物(Fe-HPH),测定螯合物的螯合率、溶解度、吸湿性和热变性温度等。2%Fe-HPH螯合率最高;1%,2%,3%和4%合物分别在pH为4 5,6和7时达到最大溶解度;在相对湿度为43%和81%的环境中,吸湿性均为4%Fe-H PH3%Fe-HPH2%Fe-H PH1%Fe-H PH:4种Fe-H PH热变性温度分别为51.3℃,62.4℃,68℃和73.5℃,即随着Fe~(2+)加入量的增多而升高:紫外全波段扫描和红外光谱验证了螯合前后结构发生变化。螯合时加入Fe~(2+)量不同,得到的螯合物性质也备有差异。     

辣木籽粕多肽亚铁螯合物的制备及结构分析

为探究辣木籽粕多肽亚铁螯合物的制备工艺及其结构特性。本实验以辣木籽粕多肽和氯化亚铁为原料制备多肽亚铁螯合物，同时以亚铁螯合率为指标对辣木籽粕多肽-亚铁螯合物的制备条件进行优化，得到了最佳螯合反应条件：肽铁质量比为4.1:1，多肽浓度为7.9 mg/mL，pH=4.70，反应温度为40 ℃，反应时间为20 min，在此条件下亚铁离子螯合率为（88.27±1.49）%。紫外、红外、荧光光谱以及扫描电镜和能谱分析等方法对螯合物进行结构分析表明，亚铁离子能够与多肽氨基酸上C=O 、N-H、—COO-等官能团结合生成多肽亚铁螯合物，表面疏水性与氨基酸组成分析表明极性氨基酸能够在螯合反应中起到重要作用。     

鲢鱼源多肽锌的制备工艺对其抑菌活性的影响

研究了制备工艺中的主要因素对鲢鱼源多肽锌螯合物的抑菌活性影响。以抑菌圈直径为指标,探讨了酶解工艺(蛋白酶种类和酶解时间)和螯合工艺(螯合反应的pH、多肽与氯化锌的质量比、螯合反应的温度和时间)对多肽锌螯合物的抑菌活性影响。结果表明,酶法水解鲢鱼蛋白制备抑菌型多肽锌的最佳条件为风味蛋白酶酶解时间6h、螯合反应pH为6.0、多肽与氯化锌质量比为2:1、反应时间45min、温度30℃,得到的螯合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为12.50mm和12.66mm,螯合物得率38.67%。因此,鲢鱼源多肽锌螯合物具有较好的抑菌活性,有望作为一种潜在的抗菌剂。     

花生肽亚铁螯合物的制备工艺优化及结构特性研究

研究超声波辅助条件下花生肽亚铁螯合物的制备工艺及其结构特性。方法 采用超声波辅助双酶酶解,考察肽铁质量比、pH、螯合温度和时间对螯合率的影响,并采用紫外、红外、荧光光谱及扫描电镜分析花生肽螯合前后空间结构及表观形态变化。结果 超声条件下碱性酶与风味酶复配能显著提高花生肽的亚铁离子螯合率;得到螯合率最佳的反应条件为肽铁质量比3.2:1,pH为7.9,温度38 ℃,时间30 min,亚铁螯合率可达67.5%;光谱分析表明,花生肽段所含的氨基与羧基参与螯合反应,使其空间结构发生改变;扫描电镜结果显示花生肽由平滑的片状结构转变为密集的球状结构。结论 得到了花生肽亚铁螯合物的最优制备工艺并确定其螯合位点,本研究不仅能提高花生粕的经济价值,还有利于促进新型铁制剂的开发。     

带鱼蛋白水解肽-金属配合物制备工艺

为提高带鱼下脚料的利用率为目的,以带鱼下脚料为原料,用木瓜蛋白酶水解,并分别与氯化亚铁、氯化镁、氯化锌和氯化钙螯合,采用单因素试验及正交试验进行优化,测定最佳螯合条件。研究表明:当金属元素添加量为2%时,带鱼蛋白水解肽-金属配合物(铁肽、钙肽、镁肽和锌肽)最佳螯合工艺条件为:螯合时间30 min, pH 7.0,温度30℃。此时铁肽、钙肽、镁肽和锌肽最大螯合率分别为68.9%, 63.2%, 65.7%和42.3%。     

复合氨基酸亚铁的制备研究

本初步研究了利用脱脂豆粕酶解成复合氨基酸液，与亚铁盐螯合制备复合氨基酸的工艺，重点探讨了豆粕的酶解工艺和氨基酸亚铁的螯合反应条件。结果表明：豆粕酶解的最佳条件为加酶量(复合蛋白酶)为4％、固液比为1：24、pH值为8．0、酶解时间为16小时；复合氨基酸亚铁螯合的最佳条件为反应温度25℃，反应时间30min，pH=6．0，氨基酸与亚铁盐的配体摩尔比为2：1。     

卵黄高磷蛋白肽-亚铁螯合物的制备及其稳定性分析

目的 优化卵黄高磷蛋白肽螯合亚铁的制备工艺，筛选结合亚铁含量最高的卵黄高磷蛋白肽制备肽-亚铁螯合物，并分析该螯合物的耐温、耐盐、耐酸碱稳定性。方法 响应面法优化亚铁螯合物的制备工艺，超滤分离得到不同分子量大小的肽组分，采用邻菲罗啉法测定亚铁结合含量，采用Ferrozine法测定温度、盐浓度、pH对游离铁释放量的影响。结果 最优螯合工艺条件为肽-亚铁质量比4:1、63℃、pH 4.8、43 min，该条件下小于3 kDa卵黄高磷蛋白肽的亚铁结合含量最高，为(96.13±2.86) μg Fe2+?mg pro，该螯合物耐温、耐盐、耐酸碱稳定性较好。结论 优化工艺的亚铁螯合率高，既能够节约亚铁离子的用量，还能够提高肽-亚铁的结合含量。小于3 kDa卵黄高磷蛋白肽-亚铁螯合物的亚铁含量高、稳定性好，是一种潜在的铁补充剂。 关键词：卵黄高磷蛋白肽；肽-亚铁螯合物；稳定性     

带鱼鱼糜加工副产物酶解液的钙螯合工艺研究

目的:为有效利用带鱼鱼糜加工副产物,确定以其为原料制得的酶解物螯合钙的最佳螯合工艺。方法:在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面分析法,探讨酶解物与氯化钙的螯合工艺条件。结果:优化的螯合工艺为:酶解物与氯化钙质量比6.4∶1,料液比1∶50 g/m L,温度30℃,时间21 min,pH 7.0,在此工艺条件下螯合率和螯合物得率分别为83.41%和13.49%,与预测值83.56%和13.61%吻合。结论:所确定的螯合工艺反应条件温和,反应速度快,酶解物与钙的螯合率和螯合物得率都较高,为钙螯合物的制备以及带鱼鱼糜加工副产物的高值化利用提供依据。     

基于亚铁螯合能力的灰树花蛋白酶解工艺优化及其抗氧化活性

以灰树花为原料,探究灰树花蛋白亚铁螯合肽的最佳制备条件,并对其抗氧化活性进行评价。从6?种蛋白酶中筛选出酶解最佳用酶,在此基础上,以亚铁螯合能力为响应值,进行单因素和正交试验,同时研究了灰树花蛋白亚铁螯合肽对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基的清除效果。结果表明,碱性蛋白酶酶解物的亚铁螯合能力最强,在pH?9、加酶量1?800?U/g、酶解温度55?℃、底物质量浓度0.5?g/100?mL、酶解时间2.5?h的条件下,灰树花蛋白亚铁螯合肽的亚铁螯合能力最强,可达1.854?mg/g,此时水解度为6.14%。灰树花蛋白亚铁螯合肽对DPPH自由基和羟自由基有较强的清除效果,且与多肽质量浓度呈正相关。结果显示,灰树花蛋白亚铁螯合肽具有良好的亚铁螯合能力,并具有较好的抗氧化活性,有望发展为新型的膳食补充剂。     

一株海洋链霉菌发酵条件的优化及其抑菌活性物质的研究

灰略红链霉菌（Streptomyces griseorubens）F8分离于黄海海岸线沉淀物,通过单因素试验优化其发酵条件,并对其代谢产物及抑菌活性进行研究。结果表明,最佳发酵条件为培养时间11 d、接种量8%、培养温度30 ℃、初始pH值8.0。菌株F8所产抑菌物质对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,变形杆菌（Proteus）和产气杆菌（Aerobacter aerogenes）具有抑制作用,抑菌圈直径分别为23 mm、34 mm、44 mm,最小抑菌浓度（MIC）分别为100 μg/mL、30 μg/mL、20 μg/mL。菌株F8所产抑菌活性物质的酸碱、热、光照以及遗传稳定性均较好。     

酶解马鲛鱼下脚料制备海鲜酱工艺优化

对马鲛鱼下脚料水提液进行酶解,通过单因素及正交酶解试验,优化了马鲛鱼下脚料的酶解工艺,再利用酶解液制备海鲜调味酱,并与市售海鲜酱的感官品质进行对比分析。结果表明,马鲛鱼下脚料的最佳酶解工艺条件为：中性蛋白酶用量500 U/g,液料比（V_水∶m_下脚料）3∶1 （mL/g）,酶解温度55 ℃,pH值 7.5,酶解时间5 h,该酶解条件下酶解液中氨基酸态氮的质量浓度高达（0.325±0.004） g/100 mL。制备的海鲜酱与市售海鲜酱的口感相当,产品理化及微生物指标符合相关国家标准要求。     

酸法脱酰胺结合酶解制备米蛋白肽及其与亚铁螯合工艺研究

采用米蛋白为原料,经酸法脱酰胺、蛋白酶酶解后,以FeCl_2作为铁源制备米蛋白肽亚铁螯合物。结果表明,碱性蛋白酶对米蛋白的水解效果最好,经4 h酶解后蛋白的水解度和蛋白肽得率分别达到23.4%和73.4%。酸法脱酰胺处理能有效提高米蛋白肽的得率。采用0.4 mol/L HCl在95℃处理3 h制备的脱酰胺米蛋白,其水解度和蛋白肽得率分别达到27.1%和92.6%;单因素试验表明反应温度、pH和质量比均对米蛋白肽亚铁螯合物的产品得率和螯合能力有显著影响;米蛋白肽与亚铁盐的最佳螯合工艺条件为:反应温度50℃、蛋白肽与亚铁盐的质量比2:1、pH 6.5;在此条件下其产品得率为65.2%,亚铁螯合能力最大为21.6 mg/g。     

乳清蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的:研究乳清蛋白肽与金属离子螯合的工艺及螯合物的性质,发掘乳清蛋白与金属离子螯合物的保健功效,为人们提供一种新型的保健食品。方法:以水解度和抗氧化活性为指标,筛选最适酶解乳清蛋白的酶,优化酶解乳清蛋白的条件。将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化螯合工艺制备螯合产物,探讨乳清蛋白肽-钙离子螯合物的理化性质和生物活性。结果:碱性蛋白酶为酶解乳清蛋白的最适用酶。最佳酶解工艺条件是:酶解温度50℃、最适pH 8.0、酶/底物800 U/g、底物质量浓度0.05 g/m L、水解时间1 h。优化的乳清蛋白肽-钙螯合物制备条件是:以固体钙的形式添加,乳清多肽与氯化钙质量比20∶1,反应时间20 min,反应温度50℃。采用红外光谱法对螯合物进行表征,所得物质为乳清蛋白酶解物与钙的螯合复合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽可与钙离子螯合,所得螯合物具有显著的抗氧化活性,为乳清蛋白复合产品的开发提供试验依据。