大豆蛋白水解物中肽分子分布的研究注

研究采用超滤法与凝胶过滤色谱(GFC)相结合实验方法就大豆蛋白酶解产物寡肽混合物的分子量的分布状况进行了测定.研究结果表明,木瓜蛋白酶与Asl.398蛋白酶的酶解物中以分子量在1000D以下的小肽为主木瓜蛋白酶解产物中分子量1000D以下的占63.9%,1000～2000D之间的4.64%,2000～4000D之间的占8.21%,4000～10000D之间的占8.20%,分子量10000D以上的占15%;As1.398蛋白酶酶解物中分子量1000D以下的占72.1%,1000D～2000D的占6.42%,2000D～4000D之间的占2.5%,4000～10000D之间的占3.92%,10000D以上的占15%.     

文蛤蛋白抗氧化活性肽的研究

利用正交实验研究了文蛤蛋白分别经木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶作用后酶解物对羟自由基和超氧自由基的清除作用,优化了水解条件,并对最佳清除率下的三种酶解物进行SephadexG50凝胶柱分离,测定酶解物中抗氧化活性肽的分子量分布。结果表明,三种酶酶解文蛤所得的酶解产物对自由基均具有清除作用,水解液中多肽的分子量主要集中在1000以下,分别占图谱面积的51.90%、61.7%和42.07%。     

响应面法优化糙刺参内脏团制备抗氧化肽的酶解工艺

以加工糙刺参的副产物内脏团为原料,选用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分别对其进行酶解,采用ABTS法对酶解产物进行抗氧化活性分析,筛选出酶解产物具有较强抗氧化活性的木瓜蛋白酶作为最适用酶,然后通过响应面法对酶解工艺条件进行了优化。结果表明:木瓜蛋白酶酶解糙刺参内脏团的最佳酶解参数为:温度为50.19℃,pH为8.0,加酶量为2.5%,酶解时间为9.0 h,此时3 mg/mL酶解物的还原能力(ABTS法)为0.2533μmol/g,实验验证结果为0.2552μmol/g;响应面法预测值与实验验证结果吻合性良好。此外,最佳酶解条件下所得酶解产物的氨基酸含量丰富,谷氨酸含量较多,分子量在2000 u以下的组分占总量的99.52%。     

鳙鱼肉酶解工艺及其产物清除羟自由基活性的研究

以高产低值的鳙鱼肉为原料,通过测定水解度及酶解产物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从胃蛋白酶、Alcalase2.4L、木瓜蛋白酶、胰酶4种常用蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶作为酶解鳙鱼肉制备清除羟自由基活性酶解物的水解酶;以羟自由基清除率为指标,利用正交试验对酶解条件进行优化,将优化酶解条件下的酶解产物进行高效液相色谱分离,测定分子量分布。结果表明:木瓜蛋白酶在温度45℃、p H7.0、酶加量2%、底物浓度20%、时间3 h的水解条件下,酶解产物对羟自由基清除率达76.13%。木瓜蛋白酶酶解物利用高效体积排阻色谱测定其主要分子量范围是2 691~32 u。     

两种双酶切大豆分离蛋白技术路线的比较

本研究以碱性丝氨酸蛋白酶和蛋白酶Ⅱ作为水解酶对大豆分离蛋白进行两步定向酶切,以制备具有改善肝昏迷生物活性的高F值寡肽。本研究设定两种定向酶切的技术路线,即在酶解过程中维持碱性丝氨酸蛋白酶最适pH的时间分别设定为3h（技术路线Ⅰ）和30min（技术路线Ⅱ）,而蛋白酶Ⅱ分别在酸性及中性条件下继续酶解大豆分离蛋白水解液。结果表明,技术路线Ⅰ、Ⅱ蛋白质回收率分别为86.5%、87.8%;酸溶性氮得率分别为83.2%、86.4%;灰分含量分别为11.1%、7.0%;技术路线Ⅰ所得肽的相对分子质量分布范围为：分子量大于5000的肽占肽总量的20.6%,分子量在3000左右的肽占总量的3.3%,分子量在500～600之间的肽占肽总量的61.3%;技术路线Ⅱ所得的产物组分相对分子质量分布范围为：分子量在1000以下的占71.3%,且分子量主要在700～900之间,分子量在2000左右的占5.7%,分子量在5000以上的占12.8%。研究结果表明,技术路线Ⅱ的酶切效果优于技术路线Ⅰ的。     

大豆蛋白酶解肽的分子量分布及抑制ACE活性关系研究

研究不同蛋白酶作用的酶解肽表现在血管紧张素转化酶(ACE)活性抑制差异,酶解产物的水解度、分子量分布与ACE抑制率的相互关系。用胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶等五种蛋白酶对大豆分离蛋白酶解,进行了多肽增量、水解度、超滤膜分离及其ACE抑制率对比等实验。结果表明,碱性蛋白酶的多肽增量最大,胃蛋白酶次之,依次为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶,胰蛋白酶则出现反常;水解度随着酶解的时间而增加,碱性蛋白酶的最大水解度可达到21%,依次为胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶,最低为胰蛋白酶仅为9%左右;与此对应的碱性蛋白酶的酶解物的ACE活性抑制率为最高(44.9%),胃蛋白酶次之(43.5%)。分子量范围在1000Da以下组分对ACE的抑制效果最高,碱性蛋白酶作用获得的小分子肽组成为71.25%,胃蛋白酶的为69.35%,但其对应的ACE抑制率却为64.57%和78.49%。中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作用获得的小分子肽的ACE抑制率分别为45.7%、47.3%和29.6%。胃蛋白酶的降压肽制备效果为最好,其次为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶。     

超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量分布的影响

本文探讨了超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布的影响。以牛血清白蛋白为底物,采用高效液相色谱法测定游离酶和固定化酶在超声和非超声作用下的酶解产物肽分子量大小及分布情况。结果表明,游离酶和固定化酶在超声和非超声条件下,酶解产物肽分子量大小及分布有一定的差异。非超声条件下,游离木瓜蛋白酶酶解效果明显比固定化酶酶解效果要好。比较超声条件下游离木瓜蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布情况发现:游离木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽主要分布在180~1000 Da、1000~5000 Da这两个范围内,而固定化木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽在180 Da所占比例比较大。     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

不同蛋白酶对异育银鲫酶解产物性质影响的研究

采用不同蛋白酶对异育银鲫进行酶解,其产物的性质存在较大的差异。一方面,胰蛋白酶对异育银鲫的水解度最大,可以达到39.4%,而胃蛋白酶对异育银鲫的水解度最小,低于10%;中性蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶酶解产物的产率较高;另一方面,胰蛋白酶和碱性蛋白酶酶解产物的分子量分布较为均匀;风味蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解产物的抗氧化活性相对较强;不同蛋白酶酶解产物的乳化性质均低于6 m~2/g,但蛋白酶酶解产物的乳化稳定性之间差异明显;不同蛋白酶酶解产物的起泡性质和起泡稳定性存在较大差异,起泡性最强的是木瓜蛋白酶酶解产物,而起泡稳定性最高的是中性蛋白酶酶解产物。     

大豆球蛋白酶解物的分离及其抗氧化活性研究

以7S和11S大豆球蛋白为原料,选用Alcalase碱性蛋白酶在其最佳酶解条件下进行酶解,对酶解物进行超滤分离纯化抗氧化肽,并对其各组分进行保护系数和对·DPPH（1,1-二苯基苦酰基苯肼）自由基清除率的研究。结果显示：7S和11S大豆球蛋白Alcalase碱性蛋白酶酶解物经超滤后所得分子量小于5kDa,组分保护系数分别为2.38和2.21,其·DPPH自由基清除能力分别为75.63%和73.56%。并经高效液相色谱分析该组分的分子量分布在1000Da以下的含量最多,7S和11S酶解物超滤后组分分子量小于1000Da组分分别占81.13%占87.84%。     

大豆蛋白水解物物化特性的研究

本文就高变性豆粕水解产物——大豆多肽在不同环境条件下的物化特性进行了测定。结果表明,水解产物在水中的溶解度较之大豆分离蛋白有大幅度的提高,提高幅度达90%;水解产物的粘度较之大豆分离蛋白有所下降,且其粘度在一定pH范围内随pH降低而升高;木瓜蛋白酶酶解物的苦味阈值为0.410%,As1.398蛋白酶水解的苦味阈值为0.520%;水解产物的吸水值随pH的下降而升高,且木瓜蛋白酶水解物的粘度值与As1.398蛋白酶的酶解产物基本相同。     

Fe3O4/PSF磁性复合超滤膜分离麦冬多糖

以原位生成法制得Fe3O4-PSF(聚砜)磁性复合超滤膜。改变磁场强度和压力,以截留率为考察指标,确定膜截留分子质量为30000D 和10000D 时对应的值分别为0.1T、0.4MPa 和0.8T、0.5MPa。对麦冬多糖提取液(含量为91.68%)进行连续性分离,并对分离后样品进行测定,GPC 软件分析A、C、D 3 样品结果：A 样品Mw 为32610D,分子质量30000D 以上的麦冬多糖的含量85.6%;C 样品Mw 为24069,分子质量10000～30000D 的麦冬多糖的含量达87.6%;D 样品Mw 为8664,分子质量1000～10000D 的麦冬多糖含量达88.7%。     

热处理对大豆蛋白水解液分子量的影响

以碱性内切酶2709为例,研究了不同热处理温度、时间对大豆蛋白酶解液分子量的影响,实验表明大豆蛋白经90℃,15min热处理,其水解度可达到20%以上,可制备分子量在200～600之间的寡肽。     

黑豆多肽的制备及其对乙醇脱氢酶活性的 影响研究

目的制备黑豆多肽,研究其对乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性的影响。方法采用碱性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解法制备黑豆多肽。用截留分子量分别为5000、3500、2000、1000 Da的透析袋将黑豆多肽分离成4个相对分子量的肽段,对不同相对分子量的黑豆多肽进行抗氧化能力以及体外醒酒活性实验。结果黑豆多肽在碱性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解后的水解度达35.64%。不同分子量的黑豆多肽均具有对乙醇脱氢酶的激活作用和对羟自由基(·OH)的清除能力,且都随着黑豆多肽相对分子质量的减小而增强。相对分子质量在1000 Da以下的黑豆多肽对乙醇脱氢酶的激活率和羟自由基(·OH)的清除能力最强,分别达22.43%和24.39%。结论黑豆多肽具有较强的乙醇脱氢酶激活率,并且与黑豆蛋白质和其他来源的多肽相比,相对分子质量在500~2000 Da的黑豆多肽中亮氨酸和丙氨酸的含量较多,因此推测黑豆多肽具有较好的醒酒效果。     

共生发酵魔芋飞粉发酵乳中生物活性肽的分离、纯化

对多菌固化发酵剂共生发酵魔芋飞粉发酵乳中的可溶性肽进行了初步的分离、纯化及理化特性的研究。发现用80%饱和度的(NH4)2SO4只能沉淀分子量相对较大的肽段,用凝胶层析柱洗脱,出峰时间较早。改用乙醇沉淀,能得到分子量较小的肽段。通过SDS-PAGE凝胶电泳,测定可溶性肽的分子量分布在10kD以内。说明其有可能作为生物活性肽加以利用,将魔芋飞粉变废为宝,大大提高经济和社会效益。     

木瓜蛋白酶水解绿豆蛋白制备可溶性肽的研究

通过研究木瓜蛋白酶对绿豆蛋白的水解作用,分析了酶浓度、底物浓度、温度、pH、水解时间等因素对水解度的影响,从而确定木瓜蛋白酶水解绿豆蛋白制备绿豆多肽的最佳水解条件,并利用葡聚糖凝胶(SephadexG-15)柱层析测定绿豆多肽分子量。实验结果表明,当水解度为30%时,绿豆多肽分子量绝大多数在1000Da以下。     

超滤对芸豆蛋白酶解物抗氧化活性的影响

采用超滤法从芸豆蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽。研究超滤系统主要参数对膜通量的影响,确定最优的超滤条件和膜清洗方法,并对超滤前后酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行比较。结果表明：采用改性聚醚砜平板超滤膜在室温,酶解液质量分数2.5%,pH6.5 和压力0.25MPa 条件下的分离纯化效果较好;超滤能有效去除酶解液中相对分子质量较大的组分,相对分子质量2000～1000D 及1000D 以下的组分分别从11.38% 和12.64% 提高到32.83% 和 45.91%,其抗氧化活性也得到明显提高。     

超滤在大豆多肽分离纯化中应用

本试验应用超滤技术对大豆多肽进行分离,研究了超滤系统几个主要参数对膜通量的影响。研究结果表明:截留分子量30000Da的超滤膜应在压力0.12MPa、温度40℃、pH值7.0下运行40min为一个周期,膜通量为19L/m2·h左右;截留分子量10000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行60min为一个周期,膜通量为25L/m2·h左右;截留分子量5000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行80min为一个周期,膜通量为22L/m2·h左右;经分离得到分子量>30000Da的大豆多肽约占13.21%,分子量10000～30000Da的大豆多肽约占4.05%,分子量5000～10000Da的大豆多肽约占6.41%,分子量<5000Da的大豆多肽约占76.11%。     

大豆生理活性肽的研究(Ⅱ)--抗氧化性和ACE抑制活性的初步研究

采用AS1.398和Alcalase两种蛋白酶,制备了水解度为10%～24%的大豆多肽,对其抗氧化性、ACE抑制活性和相对分子质量的分布进行了研究,结果表明采用AS1.398酶水解的DH为12%的产品抗氧化活性最高,添加量为6 mg/mL时使亚油酸的氧化诱导期延长2.92倍,其相对分子质量分布在1 000以上的组分较多;采用Alcalase酶水解的DH为14%的大豆多肽产品,ACE抑制活性最高,IC50为0.144 mg/mL,其相对分子质量分布大多在200～600之间.     

大豆粕蛋白酶酶解条件和产物分析研究

以水解度为衡量指标,通过正交试验设计,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和As1.398蛋白酶酶解大豆粕的最佳水解条件进行了筛选.试验结果表明:木瓜蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度60℃、时间5 h、酶浓度5%.胰蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%;As1.398蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH6.5、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%.对酶解产物进行超滤和SDS-PAGE电泳分析表明,因酶解条件不同,大豆粕酶解产物中蛋白质和肽的组成及其数量也不同;酶的种类不同,大豆粕酶解产物组成也不同;大豆粕水解度越高,其酶解产物中小分子肽数量越多.