用寡核苷酸微阵列芯片方法检测常见的食源性致病微生物

研制了1种高通量检测食品中常见致病微生物的寡核苷酸微阵列芯片。该芯片在种的水平可鉴别金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7、霍乱弧茵、空肠弯曲杆菌、大肠弯曲杆菌、单核细胞增生李斯特菌、乙型洛血型链球菌和副溶血性弧菌;在属的水平可鉴别弯曲肠杆菌属、沙门氏菌属和李斯特氏菌属。研究中利用16S rDNA和沙门氏菌、O157:H7和副溶血性弧菌的特异基因序列设计引物和探针。用参比菌株和实验室自分离的菌株检测该芯片的特异性,结果表明该芯片的特异性良好,在所检测的菌株之间无交叉反应,与同属的其他菌株之间也不存在交叉反应。在鲜活海产品的24 h增菌液中添加参比菌株,当样品增菌液中的目的菌的量达到10~6～10~7 CFU/mL时,芯片可以准确检测出目的菌。     

基于实时荧光核酸恒温扩增技术的食源性致病微生物检测

目的考察实时荧光核酸恒温扩增(simultaneous amplification and testing,SAT)技术在食源性致病微生物检测中的应用价值。方法以国标培养法及分子测序为参考方法,研究SAT方法用于检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌及单增李斯特氏菌的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率、准确度,同时利用卡方检验分析阳性率显著性差异。结果 4种致病菌SAT试剂盒的灵敏度均为100%,不存在假阴性及漏检情况;沙门氏菌(94.2%)、金黄色葡萄球菌(99.5%)、副溶血性弧菌(100%)和单增李斯特氏菌(100%)的特异性符合要求,假阳性率均小于9.6%,准确度均大于94%。结论 SAT技术具有高灵敏度、特异性强、准确度高,可作为上述4种致病菌的检验方法。     

Antimicrobial activity of extracts of edible wild and cultivated mushrooms against foodborne bacterial strains

The antimicrobial activity of aqueous, methanol, hexane, and ethyl acetate extracts from edible wild and cultivated mushrooms against nine foodborne pathogenic bacterial strains (Escherichia coli O157:H7, Salmonella Enteritidis, Shigella sonnei, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica, Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, and Staphylococcus aureus) was screened with a disk diffusion assay. Twenty-nine of the 48 species tested had antimicrobial activity. Methanol, ethyl acetate, and aqueous extracts accounted for 92.8% of the positive assays, whereas the hexane extracts accounted for only 7.2%. Gram-positive bacteria were more sensitive than gram-negative bacteria to fungal extracts, and C. perfringens was the most sensitive microorganism. Aqueous extracts from Clitocybe geotropa and Lentinula edodes had the highest antimicrobial activity against all the bacterial strains tested.     

北京市密云区餐饮食品中食源性致病菌监测结果分析

摘要: 目的 分析北京市密云区餐饮食品中食源性致病菌污染状况。 方法 按照《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》要求,在密云区的餐饮单位和网络外卖配送平台随机抽取餐饮食品,进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、河弧菌和致泻大肠埃希氏菌检测。结果 2018～2020年共采集餐饮食品6类210件,总检出率为8.10%（17件）。检出致病菌3种,其中单增李斯特氏菌检出率最高（7.27%）,其次是蜡样芽孢杆菌（4.55%）、致泻大肠埃希氏菌（0.83%）。在冷荤凉菜、熟制米面制品、沙拉和焙烤食品中食源性致病菌检出率分别是14.86%、11.76%、8.33%和5.0%。外卖配送平台餐饮食品检出率（11.65%）高于实体店购买餐饮食品（4.67%）。结论 密云区餐饮食品存在不同程度的致病菌污染,应对网络外卖配送平台和餐饮单位加强监管和健康宣教,采取针对性的措施,预防食源性疾病和食物中毒的发生。     

农产品中食源性致病菌的污染状况分析

目的了解农产品中食源性致病菌的污染状况,为政府监管提供依据。方法共抽取430份农产品样品,监测项目为沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7、霍乱弧菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌和诺如病毒。采用全自动基因指纹分析仪对分离到的部分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌株进行核糖体基因指纹鉴定。结果农产品中存在食源性致病菌的污染,畜禽产品中检出单核细胞增生李斯特氏菌22株、沙门氏菌17株、金黄色葡萄球菌7株;水产品中检出霍乱弧菌7株;鲜食蔬菜中检出金黄色葡萄球菌11株,72%的金黄色葡萄球菌产肠毒素。全自动基因指纹分析仪的鉴定结果和国标方法完全一致。结论应重视农产品的源头污染,加强监控。全自动基因指纹分析仪可用于食源性致病菌的快速鉴定和溯源。     

基于叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应PMA-qPCR 结合与高温裂解法高通量测序技术检测鉴定检测冷链食品中5多种 病原菌并构建金黄色葡萄球菌分子进化树完成病原菌分子进化树构建与溯源分析

目的 将PMA-qPCR、高通量测序以及分子进化树构建技术相结合,应用于冷链食品中多种病原菌的快速检测、种属鉴定、亲缘关系确定与溯源分析工作。 建立冷链食品中多种病原菌的快速检测技术并完成金黄色葡萄球菌的溯源分子进化分析工作。方法 以冷链食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌等等5种病原菌5种病原菌为作为研究对象, 应用PMA-qPCRPMA-qPCR技术结合高温裂解法作为冷链食品中病原菌检测初筛手段,应用微生物培养法以及生化鉴定仪器法进行方法比对验证qPCR结果,运用高通量测序以及分子进化树构建作为冷链食品中所分离病原菌的种属地位确证方法。研发病原菌活菌快速检测方法并开展冷链食品中病原菌的抽样调查。在建立稳定高效的检测方法后,为了获得冷链食品中病原菌污染水平、分布数据以及污染来源,研究开展冷链食品中病原菌的抽样调查检测工作。在检测出金黄色葡萄球菌等并分离病原菌后,进一步通过多位点采样以及16S rRNA测序构建了葡萄球菌属、弧菌属以及李斯特菌属分子生物进化树,完成菌株种属鉴定采用构建分子进化树的方法以及完成金黄色葡萄球菌等病原菌的溯源分析工作。结果 本研究应用建立的PMA-qPCR成功扩增了冷链食品中生活状态病原菌的特征性核酸片段,排除了死亡细菌以及阴性对照菌的干扰感染,病原菌最低检测浓度可达到1×103 CFU/mL,一次反应可检测42份试样,可以在16小时内完成检测工作。在冷链食品中病原菌抽样检测调查中,本研究共从随机采集的751份冷链食品中检出6162株病原菌,病原菌总体检出率为8.13% (6162/751)。通过后续的16S rRNA测序以及葡萄球菌属、弧菌属以及李斯特菌属分子进化树的构建成功溯源了金黄色葡萄球菌的污染来源并完成病原菌种属定位。通过分子进化树的构建成功溯源了金黄色葡萄菌的污染来源并完成菌种种属定位。本研究还注意到经微生物检验一株疑似单核细胞增生李斯特氏菌阳性菌株,该菌株后续通过测序、序列比对以及分子进化树构建确定为英诺克李斯特菌,这充分说明高通量测序的重要性以及方法验证的必要性。结论 研究在国内率先将PMA-qPCR、高通量测序与分子进化树构建技术相结合,应用于应用本研究方法可以快速有效检测5种冷链食品中的冷链食品中多种病原菌检测分析与种属鉴定,并完成金黄色葡萄球菌的溯源分析,方法特异性好、灵敏度高、检测通量高,研究方法与成果可以为冷链食品及相关食品中病原菌的精确检测与溯源分析提供全新的思路与方法。     

丹东口岸2003-2005年进口海产品中3种致病菌的检验

目的掌握丹东口岸进口海产品中单核细胞增生李斯特菌、沙门菌和副溶血性弧菌污染情况。方法对丹东口岸2003-2005年进口的海产品3种致病菌的检验结果进行了分析。结果1965批进口海产品中检出不合格产品44批(2.24%)。其中32批(1.63%)检出单核细胞增生李斯特菌、6批(0.31%)检出沙门菌和6批(0.31%)检出副溶血性弧菌。不合格产品主要为冻章鱼、冻海螺、冻紫石房蛤、活河螺、冻河螺肉等。结论从丹东口岸进口的海产品3种致病菌的污染比较严重,特别是被单核细胞增生李斯特菌的污染最严重,海产品中冻章鱼和冻海螺被这3种致病菌的污染比较普遍。     

广州市市售水产品食源性致病菌污染状况调查

目的了解广州市市售水产品食源性致病菌污染状况,为预防与控制食源性疾病发生提供依据。方法对2006—2013年广州市监测的1 602份水产品的食源性致病菌监测数据进行整理分析。结果 1 602份水产品食源性致病菌总体检出率为21.16%(339/1 602),副溶血性弧菌检出率高达19.54%(313/1 602),创伤弧菌检出率为8.63%(43/498),沙门菌检出率为1.08%(14/1 301),单增李斯特菌检出率为0.59%(6/1 021),霍乱弧菌检出率为0.14%(1/701)。结论广州市市售水产品存在常见的食源性致病菌污染,其中副溶血性弧菌依然是主要的致病菌,但是沙门菌、创伤弧菌、单增李斯特菌的污染也不可忽视。     

2007年温州地区食源性致病菌污染调查分析

目的了解2007年温州地区食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌O157∶H7、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、香港海鸥菌的污染状况,提高温州地区食源性疾病检测、预警和控制能力,有效地预防、预测食源性疾病的暴发。方法依据国家食源性疾病监测网2007年度工作手册进行。结果检测生鸡肉、生猪肉、生牛肉、生羊肉、散装熟肉制品、海水鱼、淡水鱼、冷菜等八大类,共检出各类病原菌74株。其中以金黄色葡萄球菌的总检出率为最高,检出20株,检出率达15.04%;其次为副溶血性弧菌,检出39株,检出率为9.75%;单核细胞增生李斯特菌和沙门菌分别检出9株和6株,检出率分别为3.77%和2.51%,未检出大肠杆菌O157∶H7、空肠弯曲菌、香港海鸥菌。结论温州地区各类食品存在一定的食源性致病菌污染,其中冷菜、海水鱼、散装熟肉制品是主要污染品种。     

多重荧光定量PCR法检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌

目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和Taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该体系检测海产品中的副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌。结果副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌可得到特异性扩增,而共存于海产品中的其他细菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系对副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为72、40、80 cfu/ml。对舟山采集的150份样品进行检测,检出32份副溶血性弧菌、11份沙门菌、5份单增李斯特菌,与国标法检测结果一致。结论本研究建立的基于Taq Man探针的多重荧光定量PCR检测方法可以特异、灵敏、简单快速地实现对海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的检测。     

2016年广州市市售食品中食源性致病菌 监测结果分析

目的 了解广州市市售食品中食源性致病菌污染及分布情况, 发现危险因素。方法 2016年共采集6类共1058份食品样品, 对副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、致泻大肠埃希氏菌、沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特氏菌等进行监测分析。结果 检出食源性致病菌164株, 总检出率为15.50%。食源性致病菌中副溶血性弧菌的检出率最高(40.93%), 其次为蜡样芽胞杆菌(9.29%)、金黄色葡萄球菌(2.38%)、单增李斯特氏菌(2.08%)、沙门氏菌(1.42%), 致泻大肠埃希氏菌检出率为0。不同食品类别中水产品检出率最高, 达到了43.52%, 其次为烘焙食品(13.64%)、小摊贩食品(10.62%)、生鸡肉(8.47%)、冷藏膳食(7.50%)和熟肉制品(6.82%), 不同食品食源性致病菌检出率差异有统计学意义。不同采样场所中采自餐饮店的食品食源性致病菌检出率最高(50.00%), 其次是农贸肉菜市场(17.70%)、超市(16.71%)和小摊贩(10.62%), 最低的是零售店(9.83%)。散装食品食源性致病菌检出率(15.85%)高于预包装食品的检出率(9.09%)。中心城区烘焙食品、生鸡肉致病菌检出率要高于周边区, 周边区域小摊贩食品致病菌检出率为零。结论 2016年广州市市售食品存在较高的食源性致病菌检出率, 对食品安全隐患较高的食品应加强监管, 预防和控制食源性疾病的发生。     

实时荧光聚合酶链式反应技术与国标方法检测致病菌的应用与研究

目的比较实时荧光聚合酶链式反应技术(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)与国标方法在食品致病菌检测中的异同。方法应用RT-PCR法及国标GB 4789系列对采集的60件畜产品、禽产品、水产品和乳及乳制品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌以及副溶血性弧菌同时进行检测。结果除了金黄色葡萄球菌检测结果均为阴性外,其他3种致病菌2种方法都有检出,但RT-PCR方法的阳性率均高于国标方法。对于沙门氏菌,国标方法阳性率为1.67%,RT-PCR方法阳性率3.33%;单核细胞增生李斯特氏菌国标方法阳性率为7.50%,RT-PCR方法阳性率为15.00%;副溶血性弧菌国标方法阳性率为8.33%,RT-PCR方法阳性率为11.67%。结论在本实验条件下,RT-PCR技术的阳性检测结果多于国标GB4789系列,并且结果可完全覆盖国标GB4789。各企业实验室甚至政府主导的食品风险监测项目可根据产品特点,合理应用RT-PCR技术以减少人员工作量,方便产品放行并提高工作效率。     

酸性电解水对副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌杀菌效果的比较研究

目的研究不同浓度酸性电解水对副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌单增李斯特菌的杀菌作用,比较酸性电解水对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的杀菌效果。方法采用传统的平板计数法进行细菌计数,扫描电镜观察细菌细胞的形态变化,琼脂糖胶电泳检测细菌DNA变化和BSA法进行细菌蛋白质泄露测定。结果酸性电解水对副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌均具有很强的杀灭效果,其杀菌效果随着电解水浓度的增加而增强。较高浓度的电解水处理后,副溶血性弧菌几乎全部杀灭,单核细胞增生李斯特氏菌菌落总数降低了1.45 log CFU/mL。扫描电镜实验表明,经酸性电解水处理的副溶血性弧菌坍塌明显,且随着酸性电解水浓度的升高,细胞形态崩解严重,细菌形状模糊。结论相较于单核细胞增生李斯特氏菌,酸性电解水对革兰氏阴性菌副溶血性弧菌有明显的杀菌效果     

聚合酶链式反应-变性高效液相色谱法检测5种食源性致病菌

目的建立聚合酶链式反应与变性高效液相色谱(polymerase chain reaction-denaturing high-performanceliquid chromatography,PCR-DHPLC)相结合的方法,快速检测5种食源性致病菌(沙门菌、副溶血性弧菌、福氏志贺菌、大肠埃希菌O157∶H7和单核细胞增生李斯特菌)。方法针对16S rRNA基因保守区设计引物,PCR扩增产物用变性高效液相色谱仪检测,并进行敏感性、特异性、检出率等指标测定。结果柱温61.4℃时,5种致病菌PCR产物分别呈现特异DHPLC色谱图,保留时间均为7min左右。对沙门菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特菌检出限均为5～10CFU/ml,福氏志贺菌和大肠埃希菌O157∶H7均为1～5CFU/ml。对83株目的分离株的检出符合率为100%,38株非目的分离株检测均为阴性;对人工污染食品中的5种致病菌均可正确检出。结论该PCR-DHPLC方法具有较高的敏感性和特异性,可用于食品中5种食源性致病菌的高通量快速检测。     

Antibacterial activity of a chitooligosaccharide mixture prepared by cellulase digestion of shrimp chitosan and its application to milk preservation

The antibacterial activity of a chitooligosaccharide mixture prepared by digestion of shrimp chitosan with cellulase at 50 degrees C for 14 h was evaluated. Sugars with 1 to 8 degrees of polymer (DP) were found in this chitooligosaccharide mixture, and the weight percentage of sugars with DP > or = 6 was 44.3%. Minimal lethal concentrations of this mixture against Aeromonas hydrophila, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Typhimurium, Shigella dysenteriae, Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, and Vibrio parahaemolyticus in nutrient broth were 5 to 29 ppm, which were much lower than those of the chitosan reactant (50 to 1,000 ppm). The antibacterial activity of this mixture in the sterilized milk against E. coli O157, L. monocytogenes, Salmonella Typhimurium, and S. aureus was much stronger at 4 degrees C than at 37 degrees C. When raw milk was supplemented with either 0.24% or 0.48% (wt/vol) of this oligosaccharide mixture and stored at 4 degrees C for 12 days, its mesophilic and psychrotrophic counts were reduced by at least 3 log cycles, and there was very little change in pH. In addition, this mixture retarded the growth of Salmonella species and caused quicker reduction of Staphylococcus species in raw milk. Accordingly, the shelf life of raw milk at 4 degrees C was extended by at least 4 days.     

Evaluation of antibacterial activity of 3-butenyl, 4-pentenyl, 2-phenylethyl, and benzyl isothiocyanate in Brassica vegetables

This study investigated antibacterial activities of 4 isothiocyanates (3-butenyl, 4-phentenyl, 2-phenylethyl, and benzyl isothiocyanate) against 4 Gram-positive bacteria (Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Listeria monocytogenes, and Staphylococcus aureus) and 7 Gram-negative bacteria (Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella choleaesuis, Salmonella enterica, Serratia marcescens, Shigella sonnei, and Vibrio parahaemolyticus) by an agar disc diffusion assay. Benzyl isothiocyanate (> 90.00 mm inhibition zone diameter at 0.1 μL/mL) and 2-phenylethyl isothiocyanate (58.33 mm at 0.2 μL/mL) showed large inhibition zones especially against B. cereus. Also, 3-butenyl isothiocyanate (21.67 mm at 1.0 μL/mL) and 4-pentenyl isothiocyanate (19.67 mm at 1.0 μL/mL) displayed potent antibacterial activity against A. hydrophila. Benzyl and 2-phenylethyl isothiocyanate indicated higher activity against most of the pathogenic bacteria than 3-butenyl and 4-pentenyl isothiocyanate, and were more effective against Gram-positive bacteria than Gram-negative bacteria.     

2014~2016年丽江市食品中食源性致病菌监测结果分析

目的 了解丽江市食品中食源性致病菌的污染状况, 为开展丽江市食品安全评估和确定高风险食品种类和分布提供科学依据。方法 2014~2016年采集丽江市售食品344份, 对沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌、蜡样芽孢杆菌6种食源性致病菌进行监测分析。结果 344份食品样品检出食源性致病菌51株, 总检出率为14.82%。3年食源性致病菌检出率分别为21.00%、15.13%和9.60%, 不同年份检出率差异有统计学意义。检出的4种食源性致病菌, 其中以蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌检出率最高, 分别为8.14%和3.49%; 空肠弯曲菌、副溶血性弧菌未检出。米米制品、学生餐(盒饭)和生肉类污染严重, 检出率分别为23.53%、18.18%和16.92%。结论 丽江市辖区市售食品中存在不同程度的食源性致病菌污染, 食品安全监管部门应加强食品安全监督管理。     

2016~2018年文山州市售食品食源性致病菌监测结果分析

目的 了解文山州食品中食源性致病菌的污染状况, 找到可能引起食源性疾病的高风险食品。 方法 根据《云南省食品安全风险监测》实施方案的要求采集样品, 按照《食品污染物和有害因素风险监测工作手册》中规定的标准操作程序进行样品检验, 并对数据进行分析。结果 535份样品检出食源性致病菌143株, 总检出率26.73%, 其中, 副溶血性弧菌检出率最高(55.00%), 其次, 产气荚膜梭菌(28.57%), 变形杆菌(13.09%), 霍乱弧菌(10.00%), 创伤弧菌(10.00%), 沙门氏菌(9.23%), 弯曲菌(6.84%), 单增李斯特菌(5.06%), 蜡样芽胞杆菌(4.78%), 金黄色葡萄球菌(3.78%)。结论 文山州所售食品中存在不同程度食源性致病菌污染, 政府应制定有针对性的食品安全工作策略并认真落实监督管理。     

双重荧光定量PCR检测沙门菌和单核细胞增生李斯特菌方法的建立

目的建立双重荧光定量PCR方法,快速检测沙门菌和单核细胞增生李斯特菌。方法通过设计特异性引物和探针,扩增沙门菌的fimY基因和单核细胞增生李斯特菌的hly基因,采用倍比梯度稀释法检测该体系的灵敏度,以另外7株肠道致病菌评价检测体系的特异性;建立了沙门菌和单核细胞增生李斯特菌感染小鼠的检测模型以验证方法的适用性。结果建立了同时检测沙门菌和单核细胞增生李斯特菌的双重荧光定量PCR方法,从DNA提取到检测完毕仅需2.5 h。检测两种病原菌的灵敏度分别为11和12.8 copies/μl,特异性为100%,符合率为93.3%。结论该法缩短了检测时间,并有良好的灵敏性和特异性,在疾病防控及食品卫生行业中很有应用前景。     

Use of linear, Weibull, and log-logistic functions to model pressure inactivation of seven foodborne pathogens in milk

Survival curves of six foodborne pathogens suspended in ultra high-temperature (UHT) whole milk and exposed to high hydrostatic pressure at 21.5 degrees C were obtained. Vibrio parahaemolyticus was treated at 300 MPa and other pathogens, Listeria monocytogenes, Escherichia coli O157:H7, Salmonella enterica serovar Enteritidis, Salmonella enterica serovar Typhimurium, and Staphylococcus aureus were treated at 600 MPa. All the survival curves showed a rapid initial drop in bacterial counts followed by tailing caused by a diminishing inactivation rate. A linear model and two nonlinear models were fitted to these data and the performances of these models were compared using mean square error (MSE) values. The log-logistic and Weibull models consistently produced better fits to the inactivation data than the linear model. The mean MSE value of the linear model was 6.1, while the mean MSE values were 0.7 for the Weibull model and 0.3 for the log-logistic model. There was no correlation between pressure resistance and the taxonomic group the bacteria belong to. The order, most to least pressure-sensitive, of the single strains tested was: V. parahaemolyticus (gram negative)相似文献